藿香正氣制劑中厚樸不同提取工藝對(duì)胃腸活動(dòng)的影響研究

張慧敏，任虹，何瑤，傅超美，羅妮妮， 蔣燕萍

《中華人民共和國(guó)藥典》（2010年版）收載藿香正氣制劑具有解表化濕、理氣和中的功效。厚樸作為該方臣藥，功善行氣燥濕，主要用于治療濕滯傷中，食積氣滯，腹脹便秘，脘腹脹痛。其功效主治基本符合大部分現(xiàn)代人利用藿香正氣系列制劑治療中暑、感冒和“胃腸道不適”等病癥。通過對(duì)歷版《中國(guó)藥典》、《中成藥部頒標(biāo)準(zhǔn)》等所收載藿香正氣制劑標(biāo)準(zhǔn)的查閱，發(fā)現(xiàn)其中厚樸一味藥材的提取工藝主要有60%、70%、95%乙醇進(jìn)行熱回流提取等[1～4]。提取溶媒對(duì)藥物有效成分的提取率及藥效影響較大，因此本課題組選用藿香正氣方中厚樸為模型藥物，就其不同提取工藝促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)作用進(jìn)行研究。

1 試驗(yàn)儀器與材料

1.1 儀器

數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4(國(guó)華電器有限公司) ；R501B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申順生物科技有限公司)；常規(guī)手術(shù)器械。

1.2 試藥

吲哚美辛腸溶片（重慶科瑞制藥有限責(zé)任公司，25 mg/片）；酚酞片（臨汾奇林藥業(yè)有限公司，0.1 g/片）；消旋山莨菪堿片（杭州民生藥業(yè)有限公司，5 mg/片）；西沙必利片（浙江京新藥業(yè)股份有限公司，5 mg/片）；L-精氨酸（成都市科龍化工試劑廠）。

1.3 動(dòng)物

昆明種小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，由成都達(dá)碩生物科技有限公司（科技部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK(川)2008-24）提供；清潔級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體重（200±20）g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物中心（科技部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（川）2008-21）提供。

1.4 試驗(yàn)藥液的制備

取厚樸40 g ,分別用60%、70%、95%乙醇加熱回流3次, 每次200 mL ,每次提取1 h , 合并提取液，濾過，減壓回收乙醇后，調(diào)整體積為1000 mL；左旋精氨酸加生理鹽水溶解，并以鹽酸調(diào)至pH7.0。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)消旋山莨菪堿模型小鼠排便的影響研究[5～8]

2.1.1 造模方法 選取清潔級(jí)昆明種小鼠（20±2）g，雌雄各半。適應(yīng)數(shù)天后，隨機(jī)分為6組，每組10 只。分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、厚樸藥物組1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃蒸餾水(5 mL．kg-1)，厚樸藥物組1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)每日分別灌胃60%、70%、95%乙醇熱回流法厚樸提取物（200 mg．kg-1），陽(yáng)性對(duì)照組灌胃酚酞片（12.5 mg．kg-1)水溶液，連續(xù)灌胃7天。在給藥后第8 天，各組小鼠禁食不禁水12 h后。正常對(duì)照組灌胃蒸餾水(5 mL．kg-1)，其余各組灌胃消旋山莨菪堿片 (4 mg．kg-1)水溶液。30 min 后，各組小鼠灌胃受試藥物。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 觀察并記錄各組小鼠首次排便時(shí)間、6 h小鼠排便的粒數(shù)并稱量排出糞便的重量。結(jié)果見表1。

表1 厚樸提取物對(duì)小鼠排便作用的影響(±S,n=10)

組別 首次排便時(shí)間/min 6 h排便粒數(shù) 6 h排便重量/g空白對(duì)照組 44.2±13.1 7.2±3.4 0.36±0.109模型組 61.1±9.8** 4.1±3.1** 0.29±0.094 *陽(yáng)性對(duì)照組 49.8±19.7△△ 5.7±1.3△ 0.37±0.059 △△厚樸藥物組1 53.4±17.7△△ 5.2±3.3△ 0.35±0.099△

注：與正常對(duì)照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01,與模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01

結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組的首次排便時(shí)間、6 h 排便粒數(shù)和6 h 排便重量均有顯著性差異，說明便秘模型造模成功（P＜0.05）。與模型組相比，酚酞片陽(yáng)性組與厚樸提取物各組均能顯著縮短小鼠首次排便時(shí)間（P＜0.05），顯著增加小鼠6 h排便粒數(shù)（P＜0.05）和6 h 排便重量（P＜0.05）。表明厚樸提取液能有效緩解消旋山莨菪堿模型小鼠的便秘，而厚樸提取物3組之間的差異不明顯，厚樸藥物組2號(hào)（70%乙醇熱回流提取組）有優(yōu)于其余兩組的趨勢(shì)。

2.2 對(duì)左旋精氨酸致胃腸運(yùn)動(dòng)障礙模型大鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)的影響研究[6～11]

2.2.1 造模方法 選取清潔級(jí)SD大鼠（200±20）g，雌雄各半，適應(yīng)數(shù)天后，隨機(jī)分為6組，每組10 只。分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、厚樸藥物組1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)。正常對(duì)照組,每日腹腔內(nèi)注射與其它組容量相同的生理鹽水，灌胃蒸餾水5 mL．kg-1；模型組腹腔內(nèi)注射左旋精氨酸，劑量為：第l 天5 g．kg-1，第2～5天2.5 g．kg-1，同時(shí)灌胃蒸餾水5 mL．kg-1；陽(yáng)性對(duì)照組:每日灌胃西沙必利（22.5 mg．kg-1）混懸液，左旋精氨酸用量及用法同造模組；厚樸藥物組：厚樸藥物組1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)每日分別灌胃60%、70%、95%乙醇熱回流法厚樸提取物（5mL．kg-1），左旋精氨酸用法和用量同造模組。

連續(xù)給藥后第6天，即實(shí)驗(yàn)前，將各組大鼠禁食不禁水18 h，第7天灌藥1 h后，灌胃半固體糊2 mL/只，(半固體糊的配制：取10 g 羧甲基纖維素鈉，溶于250 mL 生理鹽水中，分別加入奶粉18 g、糖8 g、淀粉8 g和活性炭末2 g，攪拌均勻，配制成300 mL，約300 g 的黑色半固體糊狀物；冰箱冷藏，用時(shí)恢復(fù)至室溫)，30 min后采用脫頸法處死。剖開腹腔后迅速取出整個(gè)胃腸于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，結(jié)扎胃賁門，輕輕剝離，鋪直，測(cè)量幽門至盲腸部全長(zhǎng)及幽門至半固體糊前沿的距離，以幽門至半固體糊前沿距離占幽門至回盲部全長(zhǎng)的百分率為半固體糊推進(jìn)百分率。然后結(jié)扎胃幽門，取胃，用濾紙拭干后稱全重，沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后拭干，稱胃凈重，以胃全重和胃凈重的差值為胃殘留物重，以此與所給糊重的百分比為胃內(nèi)殘留率。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 計(jì)算小腸推進(jìn)率和胃內(nèi)殘留率，結(jié)果見表2。

小腸推進(jìn)率(%)=[幽門至半固體糊前沿距離/幽門至回盲部全長(zhǎng)]×100%

胃殘留率(%)=[(胃全重－胃凈重)/炭糊重]×100%

表2 厚樸提取物對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)障礙模型大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響(±S,n=10)

表2 厚樸提取物對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)障礙模型大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響(±S,n=10)

注：與正常對(duì)照組比較 (1)P＜0.01,與模型組比較(2)P＜0.01

組別 胃殘留率/% 小腸推進(jìn)率/%空白對(duì)照組 84.2±13.0 58.3±5.4模型組 99.1±19.8(1) 49.1±7.7(1)陽(yáng)性對(duì)照組 86.8±19.9(2) 55.7±3.9(2)厚樸藥物組 -1 89.9±17.7(2) 53.9±4.3(2)厚樸藥物組- 2 87.1±10.1(2) 54.1±5.1(2)厚樸藥物組- 3 90.1±13.0(2) 53.1±3.5(2)

與正常對(duì)照組相比，模型組胃排空、小腸推進(jìn)顯著減慢（P＜0.01），表明造模成功。與模型組相比，西沙必利片陽(yáng)性組與厚樸提取物各組均能顯著改善大鼠胃腸動(dòng)力障礙模型的胃排空（P＜0.01）和小腸推進(jìn)（P＜0.01）。表明厚樸提取液能有效促進(jìn)大鼠胃排空和胃腸蠕動(dòng)，而厚樸提取物3組之間的差異不明顯，其中厚樸藥物組2號(hào)（70%乙醇熱回流提取組）有優(yōu)于其余兩組的趨勢(shì)。

3 討論

厚樸中主要成分為厚樸酚、和厚樸酚，味苦，辛，溫。歸脾、肺、胃、大腸經(jīng)，具有下氣除滿、燥濕消痰的功效，主治脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳。厚樸在一定程度上能促進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胃腸蠕動(dòng)，這與厚樸功效中調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)功能相吻合，亦與藿香正氣制劑理氣和中的功效相符合。因此，本文選取消旋山莨菪堿模型小鼠實(shí)驗(yàn)和左旋精氨酸致胃腸運(yùn)動(dòng)障礙模型大鼠實(shí)驗(yàn)以考察厚樸不同提取工藝緩解便秘作用和促進(jìn)胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)作用。

中藥療效的好壞，提取工藝是重要的影響因素之一，從厚樸不同提取工藝對(duì)消旋山莨菪堿模型小鼠實(shí)驗(yàn)和左旋精氨酸致胃腸運(yùn)動(dòng)障礙模型大鼠實(shí)驗(yàn)中可以看出70%乙醇熱回流提取組優(yōu)于60%乙醇熱回流提取組和95%乙醇熱回流提取組，但三者差異不顯著。因此接下來有必要采用HPLC、LC-MS 等技術(shù)對(duì)3 種不同提取工藝制備的提取液進(jìn)行化學(xué)成分的分析，結(jié)合厚樸中有效成分含量、其他藥效學(xué)指標(biāo)、生產(chǎn)成本等因素，進(jìn)一步篩選出制備工藝合理、質(zhì)量穩(wěn)定可控、臨床療效顯著的最佳提取工藝。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:1231.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中成藥分冊(cè),第7冊(cè)[S].北京：人民衛(wèi)生出版社,1998:206.

[3] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中成藥分冊(cè),第9冊(cè)[S].北京：人民衛(wèi)生出版社,1998:220.

[4] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)—中藥成方制劑[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,1996.

[5] 徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002: 1363.

[6] 李儀奎,金若敏,王欽茂,等.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006: 428.

[7] 吳光杰,田穎剛,謝明勇.車前子多糖對(duì)便秘模型小鼠通便作用的研究[J].食品科學(xué),2007,28(10):514.

[8] 吳經(jīng)耀,呂圭源,等.川、浙厚樸緩解小鼠便秘作用的藥效比較[J].安徽醫(yī)藥,2012,16(6):732.

[9] 李涯松,單兆偉,沈洪,等.和胃肢囊對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠胃動(dòng)力的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合脾胃雜志,2000,(6):327.

[10] 張國(guó)華,王賀玲.木香對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)作用的影響及機(jī)制研究[J].中國(guó)現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2004,3(13):24.

[11] Orihata M ,sarna SK.Nitric oxide mediates mechano—and chemoreceptor-activated intestinal feedback control of gastric emptyping[J].Dig Dis Sci,1996 jul,41(7):1303.