應(yīng)用免疫印跡法探討血清幽門螺桿菌抗體譜與上消化道疾病的關(guān)系*

崔建鵬周力

應(yīng)用免疫印跡法探討血清幽門螺桿菌抗體譜與上消化道疾病的關(guān)系*

崔建鵬①周力①

目的：用免疫印跡法檢測幽門螺桿菌（Hp）感染中不同血清分型與慢性淺表性胃炎（CSG）、慢性萎縮性胃炎（CAG）、消化性潰瘍（PU）和胃癌（GC）的關(guān)系。方法：選取確診為Hp感染的上消化道疾病患者205例，用Western blot法（免疫印跡法）測血清幽門螺桿菌抗體譜，檢測Hp抗體分型，分析CagA和/ 或VacA抗體陽性的表達情況。結(jié)果：在Hp現(xiàn)癥感染中，CSG、CAG、PU、GC患者的HpⅠ型感染比例明顯高于Ⅱ型感染（P＜0.01）；PU及GC中HpⅠ型感染率高于CSG（P＜0.05）。不同年齡段及不同性別中HpⅠ型感染比例均高于Ⅱ型感染（P＜0.01）。各組的Hp I型感染者中以CagA+VacA抗體為主，檢出率為77.4%；其中以CSG組最低（70.4%）、GC組最高（81.8%）。各組CagA+VacA抗體檢出率顯著高于單一CagA/VacA抗體檢出率（P＜0.01）。結(jié)論：應(yīng)用免疫印跡法進行幽門螺桿菌血清學(xué)分型檢測對于上消化道疾病的判斷有臨床指導(dǎo)意義，Ⅰ型Hp感染更需要進行根治。

幽門螺桿菌； 免疫印跡法； 分型； CagA； VacA

幽門螺桿菌（Hp）是一種人類最常見的慢性致病菌。目前已經(jīng)確認(rèn)Hp與4種上消化道疾病疾病有密切關(guān)聯(lián)：（1）慢性胃炎；（2）消化性潰瘍?。唬?）胃癌；（4）胃黏膜相關(guān)性淋巴樣組織（mucosaassociated lymphoid tissue MALT）淋巴瘤[1]。目前認(rèn)為細胞毒素相關(guān)蛋白A（Cytotoxin associated gene A， CagA）、空泡毒素（Vacuolating cytotoxin A，VacA）與Hp的致病力密切相關(guān)[2]。本研究使用免疫印跡法對確診Hp感染的上消化道疾病患者進行血清Hp抗體檢測，并進行分型，探討血清幽門螺桿菌抗體譜與上消化道疾病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年2-12月因上腹痛、飽脹、納差、黑便等癥狀在本院消化內(nèi)科門診就診及住院的患者205例。所有調(diào)查者均行胃鏡檢查，其中慢性萎縮性胃炎、胃潰瘍、胃癌均行病理活檢確診。分別為：慢性淺表性胃炎（CSG）、慢性萎縮性胃炎（CAG）、消化性潰瘍（PU）、胃癌（GC）。患者中男121例，女84例，年齡14～86歲，平均（44.91±16.66）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）除外近期服用NSAIDs；（2）1個月內(nèi)未服用抗生素、抑酸劑、PPI及鉍劑；（3）14C呼氣試驗及免疫印跡實驗陽性；（4）除外孕婦和兒童。

1.2 試劑14C尿素膠囊1粒（1 μCi）及呼氣卡，由安徽養(yǎng)和醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)；Hp抗體分型檢測試劑盒由深圳市帕勞特生物制品有限公司提供。

1.3 方法14C呼氣試驗：患者應(yīng)空腹或禁食4 h，陽性提示Hp現(xiàn)癥感染；Hp抗體分型檢測：嚴(yán)格按試劑盒說明進行操作。

1.4 Hp抗體分型判斷標(biāo)準(zhǔn) Ⅰ型Hp（HpⅠ）：顯示CagA和/或VacA抗體陽性；Ⅱ型Hp（HpⅡ）：僅UreA和/或UreB（尿素酶）抗體陽性，CagA和VacA抗體陰性；Hp陰性：CagA、VacA、UreA、UreB抗體均陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以（±s）表示，比較采用單因素方差分析，方差齊采用LSD分析進行兩兩比較，計數(shù)資料比較采用 χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hp不同血清分型在不同年齡組中陽性率的比較 205例患者均為Hp現(xiàn)癥感染，其中HpⅠ型感染173例，陽性率為84.4%；HpⅡ型感染32例，陽性率為15.6%。在不同年齡組中HpⅠ型感染率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但HpⅠ型感染的發(fā)生率明顯高于HPⅡ型感染（P＜0.01），見表1。

表1 Hp不同血清分型在不同年齡組中陽性率的比較 例（%）

2.2 Hp不同血清分型在不同性別中陽性率的比較 121例男性患者中100例為HpⅠ型感染，陽性感染率為82.6%；84例女性患者中73例為HpⅠ型感染，陽性感染率為86.9%。男女患者HpⅠ型感染陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但HpⅠ型感染的發(fā)生率明顯高于HPⅡ型感染（P＜0.01），見表2。

表2 Hp不同血清分型在不同性別中陽性率的比較 例（%）

2.3 Hp血清學(xué)分型在消化系統(tǒng)疾病中的表達情況 CSG、CAG、PU、GC組中的HpⅠ型感染率顯著高于Ⅱ型（P＜0.01）。其中PU、GC組HpⅠ型感染率高于CSG組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；PU、GC、CAG 組HpⅠ型感染率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；CAG、CSG組HPⅠ型感染率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 Hp血清分型在消化道疾病中的表達情況 例（%）

2.4 不同疾病的Hp I型中CagA、VacA抗體的表達 在四組的Hp I型感染者中檢測CagA、VacA抗體的表達情況，發(fā)現(xiàn)以CagA+VacA抗體為主，檢出率為77.4%；其中以CSG組最低（70.4%）、GC組最高（81.8%），各組間CagA+VacA抗體的檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；但各組疾病中CagA+VacA抗體檢出率顯著高于單一CagA/VacA抗體檢出率（P＜0.01），見表4。

表4 不同疾病的Hp I型中CagA、VacA抗體的表達 例（%）

3 討論

Hp感染是人類最常見的慢性細菌性感染性疾病之一，在全世界流行廣泛。Hp在人群之間通過糞-口、口-口、胃-口傳播，Hp憑借其產(chǎn)生尿素酶、空泡毒素、細胞毒素相關(guān)蛋白等導(dǎo)致細胞損傷，促進上皮細胞釋放多種炎癥介質(zhì)，使炎癥反應(yīng)遷延不愈，而Hp毒株、胃內(nèi)微生態(tài)環(huán)境及宿主個體差異等多種綜合因素影響胃黏膜炎癥進一步發(fā)展及轉(zhuǎn)歸[3]。細胞毒素相關(guān)蛋白基因A（CagA）和空泡毒素A（VacA）是Hp兩種主要的致病毒素，CagA蛋白能夠破壞胃黏膜上皮細胞的頂端連接，使基底膜降解，干擾上皮細胞正常分化，從而使上皮細胞失去細胞黏附性及極性，伸出具有侵襲性的遷移偽足，導(dǎo)致廣泛的組織炎癥，進而促使?jié)儾〉男纬膳c發(fā)展[4]；VacA主要通過改變離子通透性導(dǎo)致上皮細胞空泡形成，進一步使胃黏膜損傷，甚至導(dǎo)致糜爛或潰瘍[5]。目前根據(jù)Hp的致病因子分為：Ⅰ型Hp菌株分泌CagA和或VagA，為高毒力菌株，與消化性潰瘍和胃癌的發(fā)生極為密切；Ⅱ型Hp菌株不含細胞毒素相關(guān)基因A（CagA），不表達VacA和CagA，這類菌株毒性小[6]。臨床上常用13C或14C尿素呼氣試驗檢測Hp感染，因其敏感性及特異性高，為非侵入性方法中Hp檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法之一；而免疫印跡法檢測幽門螺桿菌抗體可用于Hp流行病學(xué)篩查[7]。本試驗用14C尿素呼氣試驗確定Hp感染，免印跡法進行血清學(xué)Hp抗體譜檢查，測出CagA、VacA、UreA、UreB 4種抗體，確定其Hp分型。

文獻[8]報道CagA基因陽性菌株率占Hp菌株的比例大，西方國家為60%～70%。亞洲有報道含有CagA基因的Hp菌株感染率接近100%[9]。我國目前各地報道不一，在70%～100%之間[10-11]。許定紅等[12]應(yīng)用ELISA法檢測貴州省黔東南地區(qū)含Hp-CagA抗體陽性的Hp菌株占84.25%。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)本地區(qū)Hp現(xiàn)癥感染中，I型Hp感染占84.4%，與之相符，其中CSG為72.1%、CAG為82.4%、GC 為91.7%，PU最高達94.2%，調(diào)查表明本地區(qū)I型Hp感染與消化性潰瘍及胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，與相關(guān)報道相符[13-14]。本調(diào)查還發(fā)現(xiàn)患有上消化道疾病的Hp感染者，I型Hp菌株感染率與年齡、性別無明顯相關(guān)性。

有學(xué)者用ELISA法在貴州地區(qū)檢測到Hp陽性的消化性潰瘍中，含CagA抗體菌株的感染率為70%左右，與本次調(diào)查差別較大，分析原因考慮可能為所用檢測方法、調(diào)查人群不同，另一個原因可能為本研究入選標(biāo)準(zhǔn)排除近期服用NSAIDs的病例。流行病學(xué)調(diào)查顯示，在服用NSAIDs的人群中，15%～30%的人可患消化性潰瘍，與Hp感染同為消化性潰瘍的兩個獨立的危險因子[15]。

通過本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在本院消化內(nèi)科門診就診及住院且患有上消化道疾病的患者，Hp現(xiàn)癥感染中以Ⅰ型菌株為主，且Ⅰ型Hp感染與消化性潰瘍、胃癌關(guān)系密切，其中Ⅰ型Hp菌株中同時表達CagA和VacA抗體的亞型是上消化道疾病的主要致病菌?；加猩舷兰膊∏覟棰裥虷p菌株感染的患者，更應(yīng)及時、嚴(yán)格的行Hp根除治療。

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Discussion of the Relationship between the Serum Helicobacter Pylori Antibody Spectrum and the Disease of Upper Digestive Tract Using Western Blot

CUI J ian-peng，ZHOU Li.//Medical Innovation of China，2014，11 （24）：028-030

Objective：To detect the relationship between the different serotype of Helic-obacter pylori infection among the disease of the chronic superficial gastritis， chronic atrophic gastritis， peptic ulcer and gastric cancer using the Western blot.Method：205 patients with upper gastrointestinal diseases who diagnosed Hp infection were selected，the helicobacter pylori antibody spectrum was detected by the Western blot， the positive expression of the CagA and / or VacA antibody were analyzed.Result：Among the patients with Hp infection，the infection ratio of Hp Ⅰamong the disease of CSG， CAG， PU， GC were obviously higher than Hp Ⅱ（P＜0.01）；Hp Ⅰinfection ratio in PU， GC were higher than in CSG（P＜0.05）. Hp Ⅰtype infection in the different age groups and different gender ratio were higher than type Ⅱ infection （P＜0.01）. The CagA + VacA antibodies was priority in the HpI type of each groups， the detection rate was 77.4%； the CSG group was the lowest （70.4%），the GC group was the highest （81.8%）. CagA + VacA antibody detection rate of each groups was significantly higher than that of single CagA/VacA antibody detection rate （P＜0.01）.Conclusion：It is significance in clinical to use the Western blot to detect the different serotype of Helicobacter pylori in diagnoses the disease of upper digestive tract. HPⅠinfection should be cured for more reasons.

Helicobacter pylori； Western blot； Serotype； CagA； VacA

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.24.009

2014-02-22） （本文編輯：蔡元元）

貴州省高層次人才科研條件特助經(jīng)費項目（TZJF-2008-56）

①貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 貴州 貴陽 550004

周力

First-author’s address：The Affiliated Hospital of Guiyang Medical School，Guiyang 550004，China