HPLC法快速測定甜葉菊中瑞鮑迪苷A*

張友財 俞堅(jiān) 董雪瑞 朱軍林 婁澤楠

（杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州310018）

HPLC法快速測定甜葉菊中瑞鮑迪苷A*

張友財**俞堅(jiān) 董雪瑞 朱軍林 婁澤楠

（杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州310018）

建立以甜葉菊葉片為原料，采用超聲萃取法用體積濃度70%的乙醇對瑞鮑迪苷A進(jìn)行提取，使用高效液相色譜儀檢測甜葉菊樣品液中瑞鮑迪苷A含量的方法。采用-NH2基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈與水體積比80∶20，流速1.2 mL/min，紫外檢測波長210 nm，進(jìn)樣量15 μL。甜葉菊中瑞鮑迪苷A分別在純水、體積濃度70%乙醇、80%乙腈中提取得率為10.25 mg/g、11.52 mg/g、13.49 mg/g，范圍內(nèi)線性關(guān)系良好相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9。采用體積濃度70%乙醇對瑞鮑迪苷A進(jìn)行提取，此方法安全有效、操作簡單、定量準(zhǔn)確。

甜葉菊；瑞鮑迪苷A；超聲萃?。桓咝б合嗌V

甜菊糖是天然低熱量高倍甜味劑，被譽(yù)為“世界第三糖”。甜菊糖主要含有甜菊糖苷、瑞鮑迪苷A、瑞鮑迪苷C等8種成分。其中，瑞鮑迪苷A是甜味品質(zhì)最好的成分。甜菊糖甜度是蔗糖350～400倍，而熱量僅為蔗糖的1/300。目前報道甜菊糖有抗糖尿病、降血壓、抗菌抗病毒、抗炎等功能。因此，飲料中用瑞鮑迪苷A替代蔗糖，可使飲料低糖化。隨著人們越來越崇尚保健和安全食品，甜菊糖因其具有低熱量、安全、天然、保健等優(yōu)點(diǎn)，將成為21世紀(jì)保健食品消費(fèi)方向，成為未來甜味劑發(fā)展方向。

我國尚未制定食品甜菊糖苷國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，因此靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡便易行的甜菊糖苷分析方法亟待建立。目前甜菊糖苷檢測方法有重量分析法、分光光度法、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳法。本文采用超聲萃取瑞鮑迪苷A，用HPLC繪制瑞鮑迪苷A標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終檢測出樣品溶液中瑞鮑迪苷A含量。該方法對瑞鮑迪苷A提取安全有效、操作簡單、定量準(zhǔn)確。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甜葉菊葉片，杭州藝福堂茶葉有限公司；瑞鮑迪苷A標(biāo)準(zhǔn)品，實(shí)驗(yàn)室自制；乙醇，分析純，杭州蕭山化學(xué)試劑廠；乙腈，色譜純，美國天地有限公司；純水，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 儀器與設(shè)備

KQ-300E型超聲波清洗器（40 Hz，300 W），昆山市超聲儀器有限公司；BT124S萬分之一電子天平，北京賽多利斯天平有限公司；Agilent1200高效液相色譜儀，檢測器為紫外檢測器，上海天普分析儀器有限公司；DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海益恒實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3 液相色譜儀分析條件

色譜柱：-NH2基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈與水體積比80∶20；流速：1.2mL/min；檢測器：紫外檢測器，波長210nm；進(jìn)樣量：15μL。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 瑞鮑迪苷A提取

將甜菊葉粉碎，過80目篩，稱取3份，每份1.00 g，干燥30 min至恒重，分別置于20.0 mL的純水、乙醇、乙腈中，超聲提取20 min。計算瑞鮑迪苷A的提取率。

式中：η——瑞鮑迪苷A的提取率，%；

m1——瑞鮑迪苷A的質(zhì)量，g；

m2——干甜菊苷的質(zhì)量，g。

1.4.2 樣品液制備

將樣品分別進(jìn)行抽濾，取濾液，移取10.0 mL至25 mL容量瓶中分別用純水、乙醇和乙腈定容。再分別移取10.0 mL，置于25 mL容量瓶中分別定容。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

將標(biāo)準(zhǔn)品瑞鮑迪苷A置于105℃干燥箱烘2 h，分別稱取60 mg、45 mg、30 mg、15 mg，均用流動相溶解，稀釋至25 mL。

1.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

測定瑞鮑迪苷A標(biāo)準(zhǔn)液，記錄標(biāo)準(zhǔn)品峰面積，計算標(biāo)準(zhǔn)液濃度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系考察

按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法，重復(fù)進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量15 μL，記錄標(biāo)準(zhǔn)品峰面積，以峰面積和質(zhì)量濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程Y=0.000 4X+0.020 2，R2=0.999 9。結(jié)果表明，在0.6 mg/mL～2.4 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取1.2 mg/mL瑞鮑迪苷A15 μL，按相同色譜條件進(jìn)行HPLC分析，重復(fù)進(jìn)樣3次，測得結(jié)果瑞鮑迪苷A峰面積RSD為1.93%，表明儀器精密度良好。

2.3 乙醇體積濃度對瑞鮑迪苷A提取率的影響

分別稱取4份1.00 g樣品粉末，分別用20.0 mL體積濃度60%、70%、80%、90%的乙醇溶解，超聲提取30 min，抽慮，進(jìn)行色譜分析，計算瑞鮑迪苷A提取率，分別為7.40 mg/g、10.56 mg/g、10.14 mg/g、5.53 mg/g。

2.4 不同溶劑對瑞鮑迪苷A提取結(jié)果

選取不同的溶劑，水、體積濃度70%乙醇、體積濃度80%乙腈對甜菊葉進(jìn)行提取，結(jié)果顯示不同溶劑提取對瑞鮑迪苷A含量影響很大，體積濃度70%乙醇和體積濃度80%乙腈作溶劑得到瑞鮑迪苷A含量高。由于水提時雜質(zhì)多，而乙腈成本較高且極易揮發(fā)，具有毒性，因此我們選取體積濃度70%乙醇作提取溶劑。體積濃度70%乙醇提取瑞鮑迪苷A的色譜圖見圖1。

圖1 體積濃度70%乙醇作提取劑所得提取液的液相色譜圖

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，采用超聲萃取法可以增加甜菊糖苷的提取率、縮短浸提時間。試驗(yàn)分析表明，用體積濃度70%乙醇做提取劑安全可靠，且本法操作簡單、定量準(zhǔn)確，為檢測瑞鮑迪苷A提供良好的方法。

［1］胡獻(xiàn)麗，董文賓，鄭丹，等.甜菊及甜菊糖研究進(jìn)展［J］.食品研究與開發(fā)，2005，26（1）：36-38.

［2］WAYNE E S，ALVIN LNMR.Studies of the comformation of the natural sweetener Rebaudioside A［J］.Carbohyd Res，2009，344，2 533-2 538.

［3］徐健，李維林.甜菊糖藥理作用及生產(chǎn)工藝研究進(jìn)展［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2013，39（10）：207-214.

［4］路勇，胡國華.萊鮑迪A苷的研究進(jìn)展［J］.食品安全導(dǎo)刊，2012(6)：50-51.

［5］王亞平，李世光，趙金慶，等.中國甜菊糖產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及其應(yīng)對［J］.對外貿(mào)易，2013，232(10)：4-6.

［6］常麗娟，王竹天，楊大進(jìn).甜菊糖苷化學(xué)分析法研究概況［J］.國外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)手冊，2007，34（3）：197-200.

［7］施榮富，史作清，馮君謙，等.食品飲料中甜菊甙的檢測方法［J］.中國食品添加劑，1994（3）：19-23.

［8］項(xiàng)秀珠，郭秀珠，黃品湖.甜菊甙含量的測定方法研究［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，1996（2）：97-99.

［9］陳慕英，于喜水，孫玉華，等.甜菊糖苷類的研究［J］.中醫(yī)藥信息，2001，18（3）：23-24.

［10］邵寒娟，胡涌剛，丁亮，等.毛細(xì)管電泳有效分離測定甜菊糖苷新方法的研究［J］.分析科學(xué)學(xué)報，2001，17（2）：127-130.

表1 平行樣品的測定

2.3 樣品加標(biāo)回收率

取一批已經(jīng)測出含量的樣品，加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中一份加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后使它的含量接近線性范圍的上限，一份加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后使它的含量接近檢測下限，另一份加入標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，然后測定樣品中磷含量，并計算樣品加標(biāo)回收率?；厥章蕼y定結(jié)果見表2。

表2 加標(biāo)回收試驗(yàn)

2.4 與標(biāo)準(zhǔn)方法的比較

對同一種樣品，處理方法相同，測定方法不同。5種樣品用本改進(jìn)法和國標(biāo)法分別進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。從表3可以看出，本法與國標(biāo)法測定結(jié)果基本吻合。

表3 2種方法測定5種食品中磷的含量的結(jié)果比較

3 小結(jié)

通過改進(jìn)法測定食品中磷的含量，大大縮短了樣品前處理的時間，用抗壞血酸代替國標(biāo)方法中的對苯二酚避免了有毒試劑對化驗(yàn)員的危害及環(huán)境的污染。本方法靈敏度高，檢出限、精密度、回收率都比較好，可以適于食品中磷元素含量的測定。

參考文獻(xiàn)

［1］謝紅偉.雞蛋蛋黃中磷元素含量分析［J］.微量元素與健康研究，1999，16（3）：46.

［2］劉華.微波消解技術(shù)在分析食品中微量元素方面的應(yīng)用［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，11（4）：406-408.

Identification of rebandiodside A in stevia by HPLC*

ZHANG You-cai*YU Jian DONG Xue-rui ZHU Jun-lin LOU Ze-nan
（Hangzhou vocational and technical college，Zhejiang Hangzhou 030006，China）

With Stevia as the raw material,the extraction of rebandiodside A(RA)by ultrasonic extraction with70% ethanol was researched;A HPLC method for determination of rebandiodside A(RA)in stevia was developed.NH2column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used.The mobile phase was composed of acetonitrile and water（80∶20,v/v），at a flow rate of 1.2 mL/min；The detection wavelength was 210 nm.injection volume was 15 μL.The extraction rates were 10.25 mg/g，11.52 mg/g，13.49 mg/g in pure water,70%ethanol,and 80% acetonitrile separately.The calibration curves had good linearity.Correlative coefficient R2=0.999 9.The method which was characterized by simplicity, higher accuracy,provided a good method for the determination of rebandiodside A in stevia.

stevia；rebandiodside A；ultrasonic extraction；HPLC

TS207.3

A

1673-6044（2014）04-0060-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.04.017

浙江省新苗人才計劃項(xiàng)目（2013R450006）。

**張友財，男，1993年出生，杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院分析檢測專業(yè)在讀專科。

2014-10-24