抗凝劑對布氏桿菌病檢測結(jié)果的影響

蒙文娟

廣西壯族自治區(qū)融水縣動物疫病預(yù)防控制中心，廣西融水 545300

在融水縣2013年家畜布氏桿菌病血清流行病學(xué)調(diào)查中，某鄉(xiāng)鎮(zhèn)送檢的豬、牛、羊血樣出現(xiàn)了在虎紅平板凝集試驗檢測中100%為陽性、試管凝集試驗中100%為陰性的現(xiàn)象。針對這兩種試驗結(jié)果的差異，筆者經(jīng)過分析，懷疑是該鄉(xiāng)獸醫(yī)站技術(shù)人員使用含肝素鈉的真空采血管采樣造成的。為進一步了解是否因抗凝劑對布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗結(jié)果造成了假陽性，即血漿、血清對布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗檢測結(jié)果是否有影響，筆者進行了以下對比試驗。

1 材料與方法

1.1 采樣材料

一次性P E注射器（無抗凝劑）、真空采血管（含肝素鈉）和靜脈采集管。

1.2 被檢血清

某羊場20只成年羊，采用頸靜脈采血。

血清樣品（A 01-A 20）：用一次性P E注射器從羊只頸靜脈處抽取血液5m L，常溫靜置2h自然凝固，經(jīng)離心沉淀，取上清液并編號。

血漿樣品（B 01-B 20）：用真空采血管從羊只頸靜脈處抽取血液5m L，離心沉淀，取上清液并編號。

將分離好的血清和血漿樣品于-4℃冷藏保存，次日檢測。

1.3 診斷液

布魯氏菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清，布魯氏菌病虎紅平扳凝集抗原，以及布魯氏菌病試管凝集抗原均購自青島易邦生物工程有限公司。

1.4 虎紅平板凝集試驗（RBPT）

取被檢樣品30μL分別置于潔凈玻璃片上，各加布氏桿菌病虎紅平板凝集抗原懸液30μL，攪拌混勻至直徑大小為1c m，然后搖動1～2m i n，于4m i n內(nèi)在黑色背景下觀察結(jié)果。陰、陽性血清對照試驗成立，即當(dāng)陰性血清對照不凝集、陽性血清對照出現(xiàn)凝集時，方可對被檢樣品進行判定。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：“++++”，凝集塊呈菌叢狀，凝集塊間液體明顯清亮；“+++”，凝集反應(yīng)較強；“++”，形成較明顯卷邊，凝集塊間液體稍清亮；“+”，稍有凝集，稍有卷邊形成，凝集物間液體呈紅色；“-”，無凝集，呈均勻粉紅色。將4m i n內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象判為陽性（+），無凝集現(xiàn)象、呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。對出現(xiàn)陽性反應(yīng)的需作試管凝集試驗檢測。

1.5 試管凝集試驗（SAT）

被檢血清樣品分別作 1:25、1:50、1:100、1:200稀釋，同時設(shè)陰、陽性血清對照，陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清相同；陽性血清需稀釋到原有滴度，加抗原的方法與被檢血清相同。

將0.5m L 1:20稀釋的抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，置36～37℃作用24h，取出觀察結(jié)果并記錄。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：按各試管上層液體清亮度判讀?！?+++”，菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；“+++”，菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；“++”，菌體凝集顯著，液體50%清亮；“+”，凝集物有沉淀，液體 25%清亮；“-”，凝集物無沉淀，液體均勻渾濁。以產(chǎn)生50%凝集的血清最大稀釋度為受檢血清的效價。待檢血清在1:50（++）以上為陽性，1:25（+）為可疑。

2 結(jié)果與分析

血清樣品A 01-A 20分別進行布氏桿菌病RBPT、布氏桿菌病SAT的檢測結(jié)果：20份均為陰性、20份均為陰性；血漿樣品B 01-B 20分別進行布氏桿菌病RBPT、布氏桿菌病SAT的檢測結(jié)果為：20份均為陽性、20份均為陰性。

3 討 論

1）本試驗中，血漿樣品在布氏桿菌病RBPT檢測中100%呈陽性、而在SAT檢測中100%呈陰性的原因，可能是由血清與血漿中的部分差異成分與虎紅平板凝集抗原發(fā)生非特異性凝集反應(yīng)造成的。血漿和血清的主要區(qū)別是血漿含有纖維蛋白原和少量凝血因子，而血清不含纖維蛋白原和較多的凝血產(chǎn)物[1]。

2）雖然本次試驗進行對比檢測的樣品數(shù)量不多，但RBPT檢測出現(xiàn)100%陽性率、SAT檢測出現(xiàn)0%陽性率的試驗結(jié)果，對我們的檢測工作具有一定的提示意義。今后在布氏桿菌病檢測中應(yīng)避免使用含抗凝劑的材料進行血液采集，避免對養(yǎng)殖戶和檢測工作造成影響。

3）布氏桿菌病的血清學(xué)診斷方法種類較多，每種方法的準(zhǔn)確率都不是100%，我們在實際檢疫中應(yīng)使用兩種或兩種以上的方法相互佐證，最后再做出診斷。

4）布氏桿菌病是一種人畜共患病，主要采取的防治措施是檢疫凈化。布氏桿菌病的防控除了做好日常監(jiān)測、引種家畜的隔離觀察、消毒、抽樣檢測等綜合措施，還應(yīng)該嚴(yán)格檢疫操作步驟，盡量做到少誤差、零錯誤，這樣才能消除傳染源、切斷傳播途徑，最終保護人們的健康和養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

[1]血漿在血液中是如何代謝的？[J].健康必讀，2013（11）：14.http://www.cqvip.com/QK/81485A/201311/48470070.htmL