葉下珠化學(xué)成分研究

祖魯寧，楊 帆,，李大同，欒路軍，孟慶國(guó) (. 中國(guó)人民解放軍404醫(yī)院，山東 威海 6400；.煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院，山東 煙臺(tái) 64005)

葉下珠(Phyllanthusurinaria)為大戟科葉下珠屬植物，主要分布于我國(guó)長(zhǎng)江以南地區(qū)。葉下珠全株，微苦、甘、酸，性涼，有清熱利尿、明目、消積的功能。常用于治療腹瀉、下痢、尿路感染、腎炎水腫和黃疸性肝炎等疾病。由于在同屬植物中發(fā)現(xiàn)了生物堿、黃酮、木質(zhì)素、鞣質(zhì)、萜類、甾體、有機(jī)酸等化學(xué)成分，并且篩選出了具有抗腫瘤，治療肝炎，抗菌消炎等藥理活性的活性成分[1]。經(jīng)過(guò)對(duì)葉下珠乙醇提取部位系統(tǒng)分離，從中分離鑒定了9個(gè)化合物(圖1)。

1 儀器與材料

熔點(diǎn)采用毛細(xì)管法在Yamato model MP-21型熔點(diǎn)測(cè)定儀上測(cè)定，溫度未經(jīng)校正。核磁共振氫譜用Bruker Spectmspin AC-P600型核磁共振儀測(cè)定。柱色譜用硅膠100～200目、200～300目，薄層色譜用硅膠H，HSGF-254 TLC板(煙臺(tái)市芝罘黃務(wù)硅膠開發(fā)試驗(yàn)廠)，葡聚糖凝膠Sephadex LH-20。所用試劑均為市售分析純。藥材葉下珠經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院吳秋業(yè)教授鑒定。

2 提取與分離

葉下珠全草10 kg，用75%乙醇回流提取，得到提取物濃縮的浸膏1.5 kg。浸膏依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮得到各萃取部分浸膏。氯仿部分用硅膠拌樣(100～200目)，依次用石油醚-乙酸乙酯，氯仿-甲醇梯度洗脫，分別得到A、B、C、D，E5個(gè)部分。B、C、D部分分別經(jīng)過(guò)硅膠柱色譜分離(石油醚-乙酸乙酯，氯仿-甲醇梯度洗脫)，Sephadex LH-20柱色譜分離(氯仿-甲醇=1:1洗脫)，制備薄層方法，得到化合物1～9，結(jié)構(gòu)見圖1。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶(氯仿-甲醇)；mp: 238.0～240.7 ℃；1H-NMR (600 Hz, CD3OD-d6) δ: 7.06 (2H, s, H-2, 6)；13C-NMR (150 Hz, CD3OD-d6) δ: 169.7 (C-1′), 147.3 (C-3, C-5), 141.3 (C-4), 125.6 (C-1), 115.2 (C-2, C-6)。與已知物沒(méi)食子酸對(duì)照，Rf值相同，混合熔點(diǎn)不下降。由以上結(jié)果確定此化合物為沒(méi)食子酸(gallic acid)。

化合物2：無(wú)色針狀結(jié)晶(甲醇)；mp: 152.5～154.7 ℃;1H-NMR (600 Hz, CD3OD-d6) δ: 7.90 (2H, s, H-2, 6), 4.35 (2H, q, H-2′), 1.25 ( 3H, t, H-3′);13C-NMR (150 Hz, CD3OD-d6) δ : 167.5 (C-1′), 147.5 (C-3, 5), 141.2 (C-4), 121.7 (C-1), 110.8 (C-2, 6), 61.8 (C-2′), 15.2 (C-3′), 38.0 (C-6)，以上數(shù)據(jù)與陳云等[2]報(bào)道的綠原酸一致，故確定化合物為綠原酸。

化合物3：黃色粉末(甲醇)；1H-NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ: 7.69 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 7.61 (1H, dd,J=2.0 Hz, 8.0 Hz, H-6′), 6.93 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.35 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.09 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ: 181.6 (C-4), 163.7 (C-7), 161.2 (C-2), 161.0 (C-9), 158.5 (C-5), 149.5 (C-4′), 145.2 (C-3′), 120.8 (C-1′), 118.3 (C-6′), 115.2 (C-5′), 113 (C-2′), 105.3 (C-3), 103.0 (C-10), 98.4 (C-6), 94.5 (C-8);13C-NMR譜中可見所有碳信號(hào)均分布于芳香區(qū), 其中含有一個(gè)不飽和羰基信號(hào)，5個(gè)次甲基信號(hào)和9個(gè)季碳信號(hào)，由此推測(cè)此化合物可能是黃酮類化合物。上述數(shù)據(jù)與馬美民等[3]報(bào)道的槲皮素的數(shù)據(jù)一致，故化合物被鑒定為槲皮素。

化合物4：淡黃色粉末(氯仿-甲醇)；mp: 187.3～189.5 ℃; 鹽酸鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，三氯化鋁反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)化合物為黃酮類化合物；1H-NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ: 7.66 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2′), 7.62 (1H, dd,J=2.1 Hz, 8.4 Hz, H-6′), 6.86 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 6.39 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.14 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 5.47 (1H, d,J=8.0 Hz), 4.73 (1H, s, rha H-1);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ: 180.2 (C-4), 164.7 (C-7), 160.2 (C-2), 159.3 (C-9), 158.5 (C-5), 149.5 (C-4′), 145.2 (C-3′), 135.3 (C-3), 120.2 (C-1′), 116.0 (C-6′), 114.7 (C-5′), 112.2 (C-2′), 103.5 (C-10), 96.4 (C-6), 94.1 (C-8); glc: 105.2 (C-1), 76.6 (C-2), 78.5 (C-3), 71.8 (C-4), 71.6 (C-5), 66.4 (C-6); rha: 101.7 (C-1), 73.5 (C-2), 74.2 (C-3), 73.9 (C-4), 68.2 (C-5), 17.9 (C-6); 上述數(shù)據(jù)與孟澤彬[4]和王銀朝等[5]報(bào)道的蕓香苷的數(shù)據(jù)一致，故化合物被鑒定為蕓香苷。

化合物5：白色針狀結(jié)晶(甲醇)；mp: 165.3～169.5 ℃;1H-NMR (600 Hz, CDCl3-d6) δ: 5.37 (1H, t, H-6), 5.27 (1H, m, H-22), 5.16 (1H, m, H-23), 3.34 (1H, m, H-3);13C-NMR (150 Hz, CDCl3-d6) δ: 37.5 (C-1), 30.2 (C-2), 71.6 (C-3), 43.0 (C-4), 142.3 (C-5), 121.7 (C-6), 32.2 (C-7), 31.8 (C-8), 50.1 (C-9), 36.6 (C-10), 22.8 (C-11), 40.8 (C-12), 42.5 (C-13), 55.9 (C-14), 24.2 (C-15), 30.5 (C-16), 56.0 (C-17), 12.4 (C-18), 20.0 (C-19), 41.9 (C-20), 20.8 (C-21), 141.2 (C-22), 128.5 (C-23), 51.4 (C-24), 30.6 (C-25), 20.8 (C-26), 31.4 (C-27), 25.6 (C-28), 21.6 (C-29); TLC展開后紫外燈下無(wú)熒光，濃硫酸/乙醇顯紫紅色，與豆甾醇標(biāo)準(zhǔn)品在多種溶劑體系做TLC對(duì)照，Rf值相同，確定化合物5為豆甾醇，參見張雁冰等[6-8]報(bào)道。

化合物6：淡黃色粉末(甲醇)；鹽酸鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，三氯化鋁反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)化合物為黃酮類化合物；1H-NMR (600 Hz, CD3OD) δ: 7.25 (2H, d,J=8.4Hz, H-2′, H-6′), 6.70 (1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 6.63 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3′, H-5′), 6.22 (1H, d, H-6);13C-NMR (150 Hz, CD3OD) δ: 115.4 (C-2), 146.2 (C-3), 178.5 (C-4), 160.4 (C-5), 101.4 (C-6), 163.4 (C-7), 113.2 (C-8), 140.3 (C-9), 112.5 (C-10), 132.0 (C-1′), 130.5 (C-2′, 6′), 115.4 (C-3′, 5′), 155.9 (C-4′); 與山奈酚標(biāo)準(zhǔn)品在3種溶劑體系做TLC對(duì)照，Rf值相同，確定化合物6為豆甾醇，參見吳秋月等[9]報(bào)道。

化合物7：白色粉末；mp: 207.2～209.0 ℃;1H-NMR (600 Hz, CDCl3-d6) δ: 7.43 (1H, d,J=16.2 Hz, H-β), 7.06 (1H, s, H-2′), 6.96 ( 1H, d,J=7.8 Hz, H-6′) , 6.74 (1H, d,J=7.8 Hz, H-5′) , 6.21(1H, d,J=16.2 Hz, H-α), 5.16 ( 1H, s, H-3), 3.46 (1H, d,J=7.8 Hz, H-5), 3.89 (1H, s, H-4) , 1.79 (4H, m, H-2, 6);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ : 176.5(C-7), 166.3 (C-8), 148.6 (C-4′), 145.8 (C-3′), 144.6 (C-β), 125.4 (C-1′), 121.7 (C-6′), 115.8 (C-2′), 114.7 (C-5′), 114.5 (C-α), 75.2 (C-1), 73.3(C-4), 71.6 (C-3), 71.4 (C-5), 39.5 (C-2), 38.0 (C-6),以上數(shù)據(jù)與陳德昌[10]報(bào)道的綠原酸一致結(jié)果，故確定化合物7為綠原酸。

化合物8：1H-NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ: 8.25～9.80 (2H, br, OH), 6.96 (2H, s, H-2, 6), 4.19～4.24 (2H, m, H-1″), 1.26～1.30 (3H, t, H-2″);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ: 169.3 (C-1′), 152.3 (C-3,5), 142.9 (C-4), 125.7 (C-1), 105.4 (C-2,6), 69.5 (C-1″), 16.5 (C-2″); FeCl3乙醇溶液顯色反應(yīng)呈陽(yáng)性，且碳譜顯示為對(duì)稱結(jié)構(gòu)，由此確定化合物8為4-乙氧基沒(méi)食子酸。

化合物9：黃色粉末(氯仿-甲醇)；mp: 231～233 ℃; 鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，三氯化鋁反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)化合物為黃酮類化合物；1H-NMR (600Hz, DMSO-d6) δ: 11.94 (1H, s, 5-OH), 9.70 (1H, s, 7-OH), 7.50 (1H, dd,J=8.4, 2.1Hz, H-6′), 7.45 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2′), 6.89 (1H, d,J=8.4 Hz, H-6′), 6.67 (1H, s, H-8), 6.60 (1H, s, H-3), 4.12, 3.84, 3.70 (9H, s, 3×OCH3);13C-NMR (150 Hz, DMSO-d6) δ: 182.1 (C-3), 163.6 (C-1), 157.5 (C-7), 157.1 (C-9), 152.5 (C-5), 149.3 (C-3′), 149.0 (C-4′), 131.8 (C-6), 122.1 (C-1′), 121.0 (C-6′), 111.7 (C-5′), 108.8 (C-2′), 106.5 (C-4), 104.6 (C-2), 95.6 (C-8), 60.6 (6-OCH3), 56.1 (3′,4′-OCH3);上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，確定化合物8為異澤蘭黃素。

4 討論

作者對(duì)葉下珠提取物的氯仿部位進(jìn)行了化學(xué)成分的系統(tǒng)分離，鑒定了9個(gè)化合物。其中，化合物7～9為首次從該植物中分離得到化合物(1)、 (2)、(8) 為植物多酚類化合物，而植物多酚多具有抗菌消炎的活性，這可能也是葉下珠具有抗菌消炎作用的原因。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 萬(wàn)振先, 周國(guó)平, 易楊華. 葉下珠化學(xué)成分的研究[J]. 中草藥, 1995, 25 (9)：455-456.

[2] 陳云，王國(guó)凱，武 璨，等. 紅花龍膽化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2013, 38(3)：362--365.

[3] 馬養(yǎng)民, 姜少娟, 史清華. 沙棘果渣中異鼠李素和槲皮素的提取與分離[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào), 2009, 24 (5): 121-124.

[4] 孟澤彬, 國(guó)興明, 張素英. 直葶石豆蘭化學(xué)成分的研究[J]. 貴州教育學(xué)院學(xué)報(bào), 2008, 19 (6): 20-22.

[5] 王銀朝, 趙寶玉, 譚承建, 等. 變異黃芪地上部分化學(xué)成分研究[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2006, 15 (5): 14-16, 20.

[6] 張雁冰, 李 玲, 劉宏民, 等. 馬?；瘜W(xué)成分研究[J]. 鄭州大學(xué)學(xué)報(bào), 2005, 31 (1): 75-77.

[7] 潘曉輝, 李 碩, 李 瑜. 駝絨藜化學(xué)成分研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2005, 17 (3): 290-293.

[8] 吳 希, 夏厚林, 黃立華, 等. 香附化學(xué)成分研究[J]. 中藥材, 2008, 31 (7): 990-992.

[9] 吳秋月，齊 潔，李默影，等. 牦牛兒苗的化學(xué)成分研究[J]. 中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012, 40 (1): 76-78.

[10] 陳德昌. 中藥化學(xué)對(duì)照品工作手冊(cè)[M]. 北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 1999: 154.

[11] Nakasugi T, Nakashima M, Komai K. Antimutagens in Gaiyou[J]. J Agric Food Chem, 2000, 48: 3256-3266.