血清細胞纖維連接蛋白水平與腦出血預后的相關性分析

蔣邦文，何武金

(1.廣西灌陽縣人民醫(yī)院，廣西灌陽541600;2.桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院，廣西桂林541000)

腦出血是全世界病死率和致殘率極高的常見病之一，其在我國致死性疾病中所占的比例亦不斷升高。該病發(fā)生原因往往與腦動脈粥樣硬化、高血壓等有關，但至今其治療方法及效果仍不盡如人意[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)細胞纖維連接蛋白(cFN)與心腦血管疾病有關。cFN是血管內皮的一種糖蛋白，它的水平升高可以損傷血管內皮，容易誘發(fā)腦出血。筆者探討了腦出血患者血清cFN水平與腦出血1個月死亡的相關性以及其臨床意義，現(xiàn)將結果報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 隨機選取2012年4月—2013年2月灌陽縣人民醫(yī)院收治的高血壓性基底節(jié)區(qū)急性腦出血患者68例為腦出血組，男48例，女37例;年齡45～85歲;入院時平均動脈壓94～187 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa);格拉斯哥(GCS)評分7～13分;多田公式計算血腫量8～65 mL。選取同期健康體檢人群50例作為對照組，其中男30例，女20例;年齡44～84歲。 2組間年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)。腦出血組患者均除外既往腦血管性疾病、使用抗凝劑、嚴重感染、嚴重心肝腎疾病及嚴重頭部外傷史。樣本采集時患者及健康人均知情同意，自愿簽署知情同意書。

1.2 主要試劑及儀器 人cFN ELISA試劑盒(Cusabio公司);高速低溫離心機(德國Eppendorf公司);離心管(美國Corning公司)，雪花制冰機(日本 SANYO公司);Bio－Rad 680酶標儀(Bio－Rad公司)。

1.3 實驗方法 腦出血組靜脈血在入院時獲得，對照組靜脈血體檢時獲得。在患者入院后次日清晨采集空腹靜脈血3 mL，立即冰盒取回后4℃冰箱靜置2h，4℃ 4000 r/min離心5 min，吸取血清按每管50 μL分裝于5個0.5 mL離心管，與病例或對照基本情況表統(tǒng)一編號后，－80℃冰箱保存。按照說明書取出試劑盒內的標準品，分別按照1000，500，250，125，62.5，31.2，15.6，0 μg/L 的濃度作標準曲線;各組血清樣本用樣本稀釋液進行1∶500倍稀釋;然后將標準品與待測血清樣本加于酶標板孔底部，輕輕晃動，酶標板加上覆膜，37℃孵育120 min;移去酶標板上的液體，甩干，然后每孔加生物素標記抗體工作液100 μL，37℃孵育60 min;移去孔內液體，甩干，洗板3次，每孔加200 μL洗滌液，每次浸泡2min，甩干;每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100 μL，37℃孵育60 min;依次每孔加入底物溶液90 μL，37℃避光顯色;15 min內于波長450 nm酶標儀上測量各孔的光密度(OD值)。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析。本實驗所有計量數據用均數±標準差表示，比較采用t檢驗;采用Logistic回歸對腦出血患者死亡的危險因素進行分析;利用ROC曲線評價血清cFN濃度對腦出血患者死亡的預測價值。所有統(tǒng)計檢驗均為雙側檢驗，檢驗水準α=0.01。

2 結果

2.1 2組血清cFN濃度的比較 腦出血組血清cFN濃度為(286.91 ±59.85)μg/L，對照組為(165.94 ±38.23)μg/L，2組比較有顯著性差異(t=12.529，P＜0.01)。

2.2 腦出血組1個月后死亡與非死亡病例血清cFN濃度比較 入院后1個月內死亡17例，死亡原因均為腦出血。死亡患者血清 cFN 濃度為(343.34±34.88)μg/L，非死亡患者為(268.10 ±54.47)μg/L，二者比較有顯著性差異(t=5.328，P＜0.01)。Logistic回歸分析顯示，cFN 濃度(OR=1.23，95%CI(1.06，1.37)，P＜0.01)是腦出血死亡的獨立危險因素。

2.3 ROC曲線評價血清cFN濃度對腦出血1個內月死亡的預測價值 ROC曲線顯示血清cFN濃度對預測腦出血1個月內死亡有顯著價值(AUC=0.882，95%CI(0.803，0.962)，P＜0.01)，且血清cFN濃度大于299.25 μg/L對預測腦出血1個月內死亡的敏感性為88%，特異性為78%。

3 討論

隨著社會生活條件的進步和改善以及人們的飲食生活方式的改變，腦血管疾病已成為現(xiàn)代社會嚴重威脅人們健康的最主要疾病[1]之一，其除了具有高病死率、致殘率外，還有較高的復發(fā)率。而腦出血是腦血管疾病常見的急危重癥疾病，發(fā)病率占腦卒中的10%～30%[2]，相對缺血性梗死而言，腦出血有著更高的致殘率及病死率。隨著醫(yī)療水平的改善，腦出血患者病死率有所降低，但腦出血所導致的疾病負擔卻日益增加[3]。因此研究腦出血病理損傷機制、治療、預后，借以降低腦出血患者病死率成為目前許多學者的追求熱點。研究表明，腦出血患者預后與很多因素有關，如腦血腫周圍組織局部腦血流下降、腦血腫周圍組織水腫、血腦屏障受損、血液分解產物釋放多種生物活性物質等[4－5]。

cFN是纖維連接蛋白的一員，是一組具有多種生物活性的大分子糖蛋白，主要由肝細胞、血管內皮細胞和纖維母細胞等合成，它參與了機體的細胞連接黏附、增殖分化、上皮組織的修復及排列規(guī)律化以及機體免疫調控等多種生理活動[6]。cFN作為一個血小板整合素的配體，其功能主要參與血小板的黏附和聚集反應，使之黏附、聚集于內膜上，形成附壁血栓，從而加速止血[7]。

近年來，cFN在腦血管疾病中的作用日益受到重視，其可作為判斷腦梗死病情一種敏感性很高的指標。在急性缺血性卒中患者中，cFN水平在溶栓治療后繼發(fā)出血的患者中明顯升高，因而cFN可作為判斷在溶栓治療中并發(fā)出血的危險性的一種有用指標[8]。Castellanos等[9－10]研究發(fā)現(xiàn)急性缺血性卒中溶栓治療后繼發(fā)出血的患者血中cFn水平明顯升高，出血越嚴重，cFN的水平也越高，cFN濃度達到或超過3.6 mg/L時，預測出血發(fā)生的準確性為100%。莊麗麗等[11]研究也發(fā)現(xiàn)原發(fā)性腦出血早期患者血漿cFn水平升高，且隨血腫容量增加血漿cFN濃度也越高。Silva等[12]分別檢測183例腦出血患者不同時間段血漿IL－6及cFN水平，發(fā)現(xiàn)在后繼出現(xiàn)血腫增大和預后較差的患者中，血漿細胞因子或炎癥遞質的水平明顯升高，cFN高于6 μg/L與顱內血腫擴大獨立相關。

本研究發(fā)現(xiàn)cFN在腦出血患者早期顯著升高，死亡患者cFN水平明顯比非死亡患者增高，表明cFN顯著升高是腦出血后1個月死亡的獨立危險因素。此外還利用ROC曲線辨別了cFN的判定界值，對預測腦出血1個月內死亡有較高的靈敏度和特異度，提示腦出血患者血清cFN水平升高有助于早期判斷腦出血患者的病死情況。腦出血患者血清中cFN明顯升高的具體機制尚未明確，其原因可能有:腦血管破裂出血大多發(fā)生于患有基礎病變的血管，最常見的是腦血管的細、小動脈硬化;硬化的動脈表現(xiàn)為平滑肌增生，內膜增厚，膠原纖維明顯增多，甚至發(fā)生纖維素樣壞死，血管壁出現(xiàn)蔥皮樣層狀增厚，導致動脈血管管腔狹窄，當血壓突然升高，病變血管易出現(xiàn)破裂性出血，可能通過血管增生的內皮細胞和纖維母細胞合成cFN增多，導致血清中cFN含量升高;同時顱內動脈破裂后，可產生大量炎性遞質，如IL、轉化生長因子等，促進血管內皮細胞和纖維母細胞合成cFN增多，使血清中cFN含量升高;另外，cFN作為一個血小板整合素的配體，當血管破裂，內皮細胞損傷釋放組織因子，可刺激cFN的釋放，促進其參與血小板的黏附和聚集反應，從而加速止血。而cFN在腦出血患者的發(fā)生發(fā)展過程中，其異常升高更可能是疾病發(fā)生的反饋機制形成，腦出血越嚴重，機體反饋刺激cFN升高更明顯。因此，cFN水平可用于反映腦出血的嚴重程度，測定患者血清cFN含量，有助于判斷腦出血患者病情嚴重程度，對腦出血患者死亡風險有顯著的預測價值。

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