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    手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服生物負(fù)載水平測(cè)定方法介紹

    2014-03-04 03:16:26王文慶張步增
    中國(guó)醫(yī)療器械雜志 2014年2期
    關(guān)鍵詞:生物產(chǎn)品方法

    王文慶,張步增,吳 平

    山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心,濟(jì)南市,250101

    手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服生物負(fù)載水平測(cè)定方法介紹

    【作 者】王文慶,張步增,吳 平

    山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心,濟(jì)南市,250101

    該文首先對(duì)手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服產(chǎn)品生物負(fù)載的定義、生物負(fù)載測(cè)定的意義以及指標(biāo)要求進(jìn)行了闡述;隨后,主要針對(duì)生物負(fù)載水平的評(píng)價(jià)方法選擇以及確認(rèn)進(jìn)行具體介紹。

    手術(shù)衣;手術(shù)單;潔凈服;生物負(fù)載;潔凈度-微生物;回收率;修正系數(shù)

    所謂生物負(fù)載(bio-burden),是指產(chǎn)品上存活微生物的總數(shù)。在YY/T 0506手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服系列標(biāo)準(zhǔn)中,生物負(fù)載又稱為 “潔凈度-微生物”(cleanliness-microbial),它反映的是待滅菌的手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服產(chǎn)品的微生物污染情況,可為以下方面提供信息:

    (1) 手術(shù)衣、手術(shù)單和潔凈服原料生產(chǎn)廠家向其用戶證實(shí)原料是在良好的微生物控制環(huán)境下生產(chǎn)的;

    (2) 需進(jìn)行輻照滅菌的手術(shù)衣、手術(shù)單和潔凈服產(chǎn)品的滅菌過(guò)程確認(rèn)和常規(guī)控制;

    (3) 非無(wú)菌供應(yīng)手術(shù)衣、手術(shù)單和潔凈服產(chǎn)品生產(chǎn)廠家向其用戶證實(shí)的微生物污染控制要求已得到滿足;

    (4) 無(wú)菌供應(yīng)手術(shù)衣、手術(shù)單和潔凈服產(chǎn)品的滅菌過(guò)程控制中,作為對(duì)凈化設(shè)施、人流、物流控制系統(tǒng)保持產(chǎn)品潔凈的綜合能力的監(jiān)視手段之一。

    YY/T 0506手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服系列標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服產(chǎn)品的生物負(fù)載水平為lg(CFU/dm2) ≤2。每dm2產(chǎn)品上最多只允許100 CFU的微生物存在。

    YY/T 0506手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服系列標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)規(guī)定[2],應(yīng)按照ISO 11737-1標(biāo)準(zhǔn)和該標(biāo)準(zhǔn)附錄中的袋蠕動(dòng)法進(jìn)行微生物試驗(yàn)以評(píng)價(jià)產(chǎn)品的潔凈度-微生物。但是ISO 11737-1標(biāo)準(zhǔn)只給出了生物負(fù)載測(cè)定方法設(shè)計(jì)要求以及對(duì)所設(shè)計(jì)的方法進(jìn)行確認(rèn)的指南。并沒(méi)有針對(duì)手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服產(chǎn)品給出具體的測(cè)定方法。

    對(duì)此,我們根據(jù)ISO 11737-1的要求設(shè)計(jì)了一套符合手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服產(chǎn)品特點(diǎn)的潔凈度-微生物測(cè)定方法。該方法的技術(shù)路線是:(1) 設(shè)定適宜的洗脫程序,采用袋蠕動(dòng)法對(duì)試樣上自然污染的微生物進(jìn)行洗脫,對(duì)洗脫液進(jìn)行薄膜過(guò)濾,并對(duì)濾膜進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù),得到試樣上洗脫的微生物總數(shù);(2) 以產(chǎn)品接種的方式將一定數(shù)量的需氧芽孢接種到滅菌后的相同試樣上,用相同程序進(jìn)行操作,得到洗脫芽孢總數(shù),用接種芽孢總數(shù)和洗脫芽孢總數(shù)求得修正系數(shù);(3) 通過(guò)修正系數(shù)對(duì)試樣上洗脫的微生物總數(shù)進(jìn)行修正,從而確定試樣的生物負(fù)載水平。

    1 測(cè)定方法

    1.1 洗脫菌落數(shù)的測(cè)定

    試樣洗脫菌落數(shù)測(cè)定流程圖見(jiàn)圖1。

    圖1 洗脫菌落數(shù)測(cè)定流程圖Fig.1 Flow diagram of elution microbial population determination

    用1 dm2模板以無(wú)菌操作的方式裁取三個(gè)試樣,分別記為1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)試樣。將三個(gè)試樣分別投入3個(gè)盛有200 mL無(wú)菌氯化鈉注射液的無(wú)菌勻漿袋中,將每個(gè)勻漿袋分別放入勻漿器中,將洗脫參數(shù)設(shè)定為運(yùn)行頻率200 r/min,運(yùn)行時(shí)間1 min,啟動(dòng)勻漿器對(duì)試樣分別進(jìn)行洗脫。以無(wú)菌操作的方式將濾膜和濾杯裝載于過(guò)濾裝置上,將每份體積為200 mL的洗脫液分別經(jīng)兩個(gè)濾膜各過(guò)濾100 mL,將濾膜菌面朝上分別貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上。將3個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板置于35oC恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d,三個(gè)玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板置于28oC恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d。逐日觀察菌落生長(zhǎng)情況,點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)[3]。

    按式(1)計(jì)算每個(gè)試樣洗脫的菌落總數(shù)。

    式中:

    Yi—第i個(gè)試樣洗脫的菌落總數(shù),單位為CFU;

    Ai—第i個(gè)試樣營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板菌落數(shù),單位為CFU;

    Bi—第i個(gè)試樣玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板菌落數(shù),單位為CFU。

    i = 1,2,3;

    按式(2)計(jì)算三個(gè)試樣洗脫的平均菌落數(shù)。

    式中:

    Y—三個(gè)試樣洗脫的平均菌落數(shù),單位為CFU。

    1.2 修正系數(shù)的測(cè)定

    修正系數(shù)測(cè)定流程圖見(jiàn)圖2。

    用適宜的方法制備萎縮芽孢桿菌ATCC 9372芽孢懸液保藏備用。臨用前用無(wú)菌氯化鈉注射液制備接種懸液,使每0.1 mL接種懸液中含有約100 CFU萎縮芽孢桿菌芽孢。按照“洗脫菌落數(shù)的測(cè)定”部分中相同的方法進(jìn)行取樣,分別記為a號(hào)、b號(hào)和c號(hào)試樣,用制造商推薦的滅菌方式對(duì)試樣進(jìn)行滅菌,備用。將三個(gè)試樣分別置于直徑為150 mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,向每個(gè)試樣接種0.1 mL芽孢懸液(約100 CFU),均勻涂布并使其干燥。按照“洗脫菌落數(shù)的測(cè)定”部分中相同的洗脫方法對(duì)接種試樣進(jìn)行洗脫。以無(wú)菌操作的方式將濾膜和濾杯裝載于過(guò)濾裝置上,將三份體積為200 mL的洗脫液分別進(jìn)行薄膜過(guò)濾,將濾膜菌面朝上分別貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上。將三個(gè)貼有濾膜的平板置于35oC恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d,逐日觀察菌落生長(zhǎng)情況,點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。

    圖2 修正系數(shù)測(cè)定流程圖Fig.2 Flow diagram of correction factor determination

    按式(3)計(jì)算三個(gè)試樣洗脫的平均菌落數(shù)。

    式中:

    X— 三個(gè)試樣洗脫平均菌落數(shù),單位為CFU;Xa— 試樣a洗脫菌落數(shù),單位為CFU;

    Xb— 試樣b洗脫菌落數(shù),單位為CFU;

    Xc—試樣c洗脫菌落數(shù),單位為CFU。

    按式(4)計(jì)算回收率。

    式中:

    R— 回收率;

    X— 三個(gè)試樣洗脫平均菌落數(shù),單位為CFU;

    Z — 接種芽孢數(shù),單位為CFU。

    按式(5)計(jì)算修正系數(shù)。

    f — 修正系數(shù);R — 回收率。

    1.3 生物負(fù)載水平(潔凈度—微生物)的計(jì)算

    按式(6)進(jìn)行潔凈度-微生物的計(jì)算。

    式中:

    M — 潔凈度-微生物;

    f — 修正系數(shù);

    Y— 三個(gè)試樣洗脫平均菌落數(shù),單位為CFU。

    2 方法解釋和說(shuō)明

    ISO 11737-1中提到,“對(duì)特定技術(shù)而言,提高回收率能增加生物負(fù)載測(cè)定的準(zhǔn)確度。若發(fā)現(xiàn)回收率低于50%,應(yīng)考慮技術(shù)改進(jìn)或使用替代技術(shù)。應(yīng)注意存在回收率不高于50%的某些情況”[4]。通過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證我們發(fā)現(xiàn),當(dāng)將勻漿器的運(yùn)行頻率設(shè)定為200 r/min,運(yùn)行時(shí)間設(shè)定為1 min時(shí),大部分產(chǎn)品能有較高的回收率。進(jìn)行生物負(fù)載測(cè)定時(shí),我們推薦優(yōu)先考慮此洗脫參數(shù)。但是我們同時(shí)也發(fā)現(xiàn),并不是所有的產(chǎn)品在此洗脫參數(shù)下都有較高的回收率,比如某些水刺無(wú)紡布產(chǎn)品,在此洗脫參數(shù)下就沒(méi)有獲得較高的回收率。所以,當(dāng)有回收率低于50%的情況出現(xiàn)時(shí),可考慮對(duì)洗脫參數(shù)進(jìn)行調(diào)整和/或加入表面活性劑等。對(duì)個(gè)別產(chǎn)品,如果有足夠的證據(jù)表明洗脫回收率不可能高于50%,這時(shí)應(yīng)按能獲得最高回收率的試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定。

    我們采用的修正系數(shù)的測(cè)定方法為ISO 11737-1中給出的產(chǎn)品接種法,即通過(guò)向產(chǎn)品接種一定數(shù)量的選定的微生物,形成人工負(fù)載,用來(lái)確立回收率。該方法建立了一個(gè)模型系統(tǒng),比較適用于生物負(fù)載比較低的產(chǎn)品的測(cè)定。在ISO 11737-1中,除了產(chǎn)品接種法外還有另外一種方法——重復(fù)處理法,該方法的原理是對(duì)產(chǎn)品上自然存在的微生物進(jìn)行重復(fù)洗脫處理,直到回收的微生物累計(jì)數(shù)量沒(méi)有明顯增加。每重復(fù)一次都將洗脫液從產(chǎn)品或產(chǎn)品部分上完全回收并計(jì)數(shù),比較連續(xù)回收得到的累計(jì)結(jié)果。我們沒(méi)有選擇重復(fù)處理法的原因,主要是因?yàn)槭中g(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服產(chǎn)品本身是在凈化條件下生產(chǎn),一般情況下其自然污染率都比較低,采用重復(fù)處理法很難得到具有統(tǒng)計(jì)意義的試驗(yàn)結(jié)果,我們的驗(yàn)證試驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。

    在特定產(chǎn)品的常規(guī)檢驗(yàn)中,尤其是對(duì)于具有較高洗脫回收率的產(chǎn)品,不必每次檢驗(yàn)都測(cè)定修正系數(shù)。在方法沒(méi)有改變的前提下,可以利用已得到的修正系數(shù)進(jìn)行結(jié)果計(jì)算,使檢驗(yàn)方法得到簡(jiǎn)化。不過(guò),建議能周期性地對(duì)回收率/修正系數(shù)進(jìn)行確認(rèn)。

    3 總結(jié)

    傳統(tǒng)的微生物檢驗(yàn)方法,比如藥品等的微生物總數(shù)測(cè)定,其樣品本身一般都可以以特定的方法溶解,得到的供試液中的微生物即可代表樣品本身的微生物,一般不涉及洗脫的問(wèn)題。而大部分醫(yī)療器械產(chǎn)品,比如本文所述的手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服產(chǎn)品,其性狀決定了必須對(duì)其進(jìn)行洗脫,然后才能對(duì)洗脫液進(jìn)行生物負(fù)載的測(cè)定。在這種情況下,如果不對(duì)方法的洗脫率進(jìn)行研究,而只是單純地采用傳統(tǒng)的微生物檢驗(yàn)方法進(jìn)行生物負(fù)載測(cè)定,勢(shì)必導(dǎo)致結(jié)果的不準(zhǔn)確。本文介紹的方法與傳統(tǒng)的微生物檢驗(yàn)方法的最大不同之處就是,在傳統(tǒng)微生物檢驗(yàn)方法的基礎(chǔ)上引進(jìn)了修正系數(shù)的概念,對(duì)傳統(tǒng)微生物檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行修正,以得到準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果。我們希望通過(guò)本文的撰寫(xiě)能夠幫助相關(guān)人員理解YY/T0 506中潔凈度-微生物的概念,掌握手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服產(chǎn)品生物負(fù)載的測(cè)定方法,加深對(duì)ISO 11737-1標(biāo)準(zhǔn)中醫(yī)療器械生物負(fù)載測(cè)定理念和方法的理解。

    [1] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. YY/T 0506.2-2009 病人, 醫(yī)護(hù)人員和器械用手術(shù)單、手術(shù)衣和潔凈服 第2部分: 性能要求和性能水平[S].

    [2] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. YY/T 0506.3-2005 病人, 醫(yī)護(hù)人員和器械用手術(shù)單, 手術(shù)衣和潔凈服 第3部分: 試驗(yàn)方法[S].

    [3] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 中華人民共和國(guó)藥典[S]. 2010.

    [4] International Organization for Standardization. ISO 11737-1: 2006 Sterilization of medical devices - Microbiological methods - Part 1: Determination of a population of microorganisms on products[S].

    Introduction to Method for Determination of Bio-burden on Surgical Drapes, Gowns and Clean Air Suits

    【 Writers 】Wang Wenqing, Zhang Buzeng, Wu Ping
    Shandong Quality Inspection Center for Medical Devices, Jinan, 250101

    surgical drapes, surgical gowns, clean air suits, bio-burden,cleanliness-microbial, recovery ef fi ciency, correction factor

    R187

    A

    10.3969/j.issn.1671-7104.2014.02.017

    1671-7104(2014)02-0138-03

    2013-08-36

    王文慶, E-mail: wangwenqing80@hotmail.com

    【 Abstract 】Firstly, the essay introduces the definition of bio-burden, the significance of determination of bio-burden and the speci fi c performance requirements. Then, the essay introduces the method selection and validation on the bio-burden determination of surgical drapes, gowns and clean air suits.

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