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    綿羊巴氏桿菌病和鏈球菌病混合感染的診斷和防治初探

    2014-03-01 08:06:35施進(jìn)文蔡葵蒸
    中國草食動(dòng)物科學(xué) 2014年1期
    關(guān)鍵詞:殺性氏桿菌鏈球菌

    施進(jìn)文,蔡葵蒸

    (1.寧夏同心縣動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心,同心 751300;2.西北民族大學(xué))

    疾病防控

    綿羊巴氏桿菌病和鏈球菌病混合感染的診斷和防治初探

    施進(jìn)文1,蔡葵蒸2

    (1.寧夏同心縣動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心,同心 751300;2.西北民族大學(xué))

    近年來在我國新疆、河北、遼寧、山東、吉林、甘肅等?。ㄗ灾螀^(qū))不斷有綿羊巴氏桿菌病發(fā)生[1-6],而鏈球菌與巴氏桿菌混合感染的較為少見。2011年入冬以來,寧夏回族自治區(qū)同心縣肉羊育肥區(qū)域羊群中相繼發(fā)生了一種以咳嗽、呼吸困難、流粘濃性鼻液、跛行為主要特征的疫病,疫情延續(xù)近半年之久,給廣大養(yǎng)殖戶造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,應(yīng)該引起動(dòng)物防疫部門的重視。

    1 發(fā)病情況

    2011 年入冬,同心縣肉羊育肥區(qū)域興隆村養(yǎng)殖育肥戶王某200只羊群發(fā)生咳嗽、呼吸困難、流粘濃性鼻液,發(fā)病羊以育肥羔羊和體弱羊?yàn)橹?發(fā)病175只,經(jīng)過多方搶救治療,頻死期宰殺和死亡共計(jì)42只,發(fā)病率87.5%,致死率24%。隨后同心肉羊育肥區(qū)域楊家河灣村養(yǎng)殖育肥戶李某400只羊群發(fā)病特征同上,并有咽喉腫脹、跛行等癥狀,發(fā)病237只,發(fā)病率59.25%,致死率26.16%。該病很快波及其他養(yǎng)殖區(qū),經(jīng)過筆者調(diào)查統(tǒng)計(jì),至2012年6月,養(yǎng)殖區(qū)共飼養(yǎng)育肥羊60 545只,發(fā)病羊23 289只,死亡羊5 579只,發(fā)病率38.46%,死亡率9.21%,致死率23.95%。

    2 臨床癥狀

    最急性型:突然發(fā)病,寒顫,虛弱無力,呼吸困難,可在數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡。急性型:體溫達(dá)4l~42℃,精神沉郁,食欲廢絕,呼吸急促,咳嗽,鼻孔常流血,結(jié)膜潮紅有黏性分泌物;病初便秘,后期腹瀉,有時(shí)排血水。頸部和胸下部發(fā)生水腫,有角膜炎;觸診肺區(qū)有疼痛感,聽診有支氣管呼吸音和水泡音。病程長者漸進(jìn)性消瘦,頻死期臥地不起,四肢劃動(dòng),抽搐死亡。慢性者跛行。

    3 剖檢變化

    可視粘膜充血或出血,皮下組織有淡黃色液體浸潤,有水腫、充血和出血。肺臟有灰白色的病灶,有水腫,出血,質(zhì)地變硬,切面呈大理石樣變,有的病例呈纖維素性胸膜肺炎,可見急性壞死性肺炎,胸腔內(nèi)有大量纖維素性滲出物;氣管內(nèi)有大量泡沫樣液體,粘膜點(diǎn)狀出血;部分心包積液、心外膜出血,部分心腔內(nèi)儲(chǔ)滿血塊。肝臟呈土黃色,有壞死灶,膽囊充盈,也有膽囊破裂者。腸系膜淋巴結(jié)充血、水腫,間有點(diǎn)狀出血;瘤胃空虛,真胃、腸道粘膜及腎外膜有出血點(diǎn),有些真胃粘膜脫落;腹腔有數(shù)量不等的積液,脾未見腫大。

    4 診斷

    4.1 病料接種培養(yǎng)、致病性試驗(yàn)和PCR擴(kuò)增

    4.1.1 接種支原體培養(yǎng)基(KM2) 取肺臟組織,首先在滅菌的pH值7.2磷酸緩沖液中洗滌2次,然后剪碎加入KM2培養(yǎng)基研磨,4℃5 000 r/min離心10 min,取上清液。上清液一部分用0.45 mm濾器過濾后接種KM2培養(yǎng)基,另一部分直接接種KM2培養(yǎng)基,置37℃、5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),觀察培養(yǎng)基顏色變化,病料過濾接種培養(yǎng)基每隔3天盲傳一次,結(jié)果培養(yǎng)基顏色未發(fā)生變化,即無支原體生長。

    4.1.2 接種鏈球菌培養(yǎng)基 取病料肝臟和肺臟深部組織,各接種THB和THA培養(yǎng)基,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取THB和THA培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色,鏡檢。結(jié)果肝臟接種培養(yǎng)物中觀察到一種G+鏈狀球菌(圖1)。

    圖1 革蘭氏染色觀察到的鏈狀球菌

    4.1.3 接種巴氏桿菌分離用培養(yǎng)基和PCR擴(kuò)增 取病料肝臟和肺臟深部組織,各接種馬丁肉湯和馬丁肉湯瓊脂,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色,鏡

    檢。結(jié)果在肺臟接種培養(yǎng)物中觀察到一種G-短桿菌(圖2)。此菌在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上不生長,在鮮血瓊脂上生長良好、不溶血。取該菌馬丁肉湯培養(yǎng)物,注射體重18 g左右小白鼠,皮下0.2 mL,小鼠在36 h出現(xiàn)死亡。取死亡小鼠心血、肝和脾觸片,瑞特氏染色鏡檢,結(jié)果觀察到兩級(jí)濃染的小桿菌。該菌用巴氏桿菌特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增,結(jié)果擴(kuò)增出了與預(yù)期大小相符的457 bp片段(圖3)。

    圖2 革蘭氏染色觀察到的兩極著色傾向的桿菌

    圖3 巴氏桿菌特異性引物擴(kuò)增分離菌的結(jié)果

    4.2 診斷結(jié)果

    根據(jù)細(xì)菌分離培養(yǎng)、培養(yǎng)特性觀察、細(xì)菌染色形態(tài)觀察,分離出兩種菌:一種為鏈球菌,另一種為多殺性巴氏桿菌(分子生物學(xué)方法鑒定亦確定為巴氏桿菌)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,分離的多殺性巴氏桿菌具有很強(qiáng)的致病性。因此,本次疫情可認(rèn)為是多殺性巴氏桿菌和鏈球菌混合感染所致,其中多殺性巴氏桿菌是造成死亡的主要原因。

    5 防治措施

    5.1 發(fā)病過程中嘗試的治療措施

    處方一:發(fā)病羊群上午全部注射。30%安乃近注射液10 mL+板藍(lán)根注射液10 mL+魚腥草注射液10 mL+160萬IU青霉素1支+100萬IU鏈霉素1支,混合搖勻注射成年大羊2只或育肥羔羊3~4只。重癥羊下午注射20%氟奇喘無敵(氟苯尼考注射液)10 mL,成年羊注射5 mL,羔羊注射2.5 mL。

    處方二:注射用頭孢噻呋鈉(混分)5 g+注射用滅菌水10 mL混合,注射2只成羊或3~4只育肥羔羊,并注射大退燒(30%安乃近注射液)每只羊10 mL。

    處方三:百草傳奇(氟苯尼考注射液)+克林新(鹽酸林可霉素注射液)各10 mL,注射2只大羊或4只育肥羔羊。

    處方四:用中成藥清肺止咳散(泰鑫藥業(yè)生產(chǎn))拌料使用,每只羊10 g,連用5 d,療效顯著。

    處方五:維生素C注射液10 mL+10%葡萄糖溶液250 mL+激能(能量合劑)10 mL+0.9%生理鹽水250 mL+注射用頭孢噻呋鈉(混粉)4 g+地塞米松磷酸鈉注射液5 mg,一次靜脈注射1只大羊或2只羔羊。

    5.2 疫情診斷后所采取的措施

    該病確診后及時(shí)隔離病羊,對(duì)癥治療;圈舍消毒,徹底清潔病羊圈舍、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)所及周圍環(huán)境,對(duì)其活動(dòng)場(chǎng)所、用具用克毒靈消毒粉溶液(二氯異氰脲酸鈉,按1∶800稀釋消毒)等進(jìn)行徹底消毒;病死羊及被污染的飼草料和糞便尿等污染物集中深埋,做無害化處理;加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,改善衛(wèi)生條件,消除各種致病因素;同時(shí),禁止販運(yùn)病羊和無秩序屠宰,最后使疫情得到了控制。

    6 小結(jié)與討論

    1)根據(jù)細(xì)菌分離培養(yǎng)、培養(yǎng)特性觀察、細(xì)菌染色形態(tài)觀察、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及分子生物學(xué)方法診斷,本次疫情可認(rèn)為是以多殺性巴氏桿菌為主要致病性并伴發(fā)鏈球菌混合感染的較為復(fù)雜的疫病。造成羊只大批死亡的原因是養(yǎng)殖戶缺乏科技意識(shí),發(fā)病后延誤病情,無法應(yīng)對(duì)。筆者經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查,病理剖檢變化診斷后,列出5個(gè)處方,其中處方一藥物配伍合理,成本低,療效好,能夠及時(shí)控制疫情發(fā)生,結(jié)合處方二至五,對(duì)控制和撲滅疫情發(fā)揮了顯著的作用。建議養(yǎng)殖戶使用處方一和處方四。疫情診斷后,采取綜合性防治措施,及時(shí)治療病羊,減少新發(fā)病羊只,對(duì)重癥羊采取打針輸液,中西醫(yī)結(jié)合治療,羊群飲電解多維或葡萄糖口服液,使羊只很快得到康復(fù)。

    2)對(duì)于該病的預(yù)防,應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,改善衛(wèi)生條件,平時(shí)應(yīng)注意避免羊只擁擠和受潮,消除可能降低抗病力的一切因素,圈舍要定期消毒;在春乏季節(jié)并遇著天氣劇烈變化時(shí),飼料中添加羊只保健藥品,如微量元素、維生素、氨基酸等,提高羊群的整體抗病能力。另外,對(duì)于該種疾病常發(fā)地區(qū),可考慮注射羊巴氏桿菌和鏈球菌的菌苗來預(yù)防。

    [1]郭順有.綿羊綿羊巴氏桿菌病防治[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2012,28(6):91,127.

    [2]冉祥云,靳兆江,孫博,等.綿羊巴氏桿菌病診斷[J].畜牧與獸醫(yī),2000,32(3):45-46.

    [3]李清香,李生福,石全有,等.綿羊巴氏桿菌病診斷[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,30(9):79.

    [4]徐萬祥.綿羊巴氏桿菌病的診斷和防治[J].中國草食動(dòng)物,2010,30(5):71-72.

    [5]馬建東,陳世軍,夏俊,等.綿羊巴氏桿菌病的診斷和治療[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2011,13:323.

    [6]王衛(wèi)東.綿羊鏈球菌病與腸毒血癥混感的診治[J].北方牧業(yè),2012,6(5):27.

    S858.26

    A

    2095-3887(2014)01-0038-03

    10.3969/j.issn.2095-3887.2014.01.011

    2013-10-08

    施進(jìn)文,男,高級(jí)畜牧師。

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