L-選擇素、異黏蛋白mRNA在胃癌中的表達(dá)及意義

馬衛(wèi)軍，劉繼微，石建芹，齊潔敏

(承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000)

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

L-選擇素、異黏蛋白mRNA在胃癌中的表達(dá)及意義

馬衛(wèi)軍，劉繼微，石建芹，齊潔敏

(承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000)

目的:在基因水平檢測胃癌組織L-選擇素和異黏蛋白(metadherin，MTDH)的表達(dá)情況，并分析二者與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。方法:應(yīng)用RT-PCR法檢測90例胃癌組織和55例癌旁正常組織L-選擇素和MTDH mRNA的表達(dá)。結(jié)果:胃癌組織L-選擇素和MTDH mRNA的相對表達(dá)量明顯高于癌旁正常組織(P＜0.05)。L-選擇素、MTDH mRNA的表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P＜0.05)，與性別、年齡無關(guān)(P＞0.05)。胃癌組織L-選擇素、MTDH mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.369，P＜0.05)。結(jié)論:L-選擇素和MTDH與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可作為評估惡性腫瘤轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后的指標(biāo)。

胃癌;L-選擇素;異粘蛋白;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一，其浸潤、轉(zhuǎn)移嚴(yán)重影響了患者預(yù)后，如何控制胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移成為當(dāng)今胃癌研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移是癌細(xì)胞和宿主細(xì)胞之間相互作用的過程，包括細(xì)胞之間粘附力的改變，基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的降解等。因此，作為細(xì)胞黏附分子的L-選擇素以及能夠調(diào)控該過程的異黏蛋白(MTDH)可能在胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。為此，本研究采用RT-PCR法檢測了L-選擇素和MTDH在胃癌組織中的表達(dá)情況，探討了二者在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年10月至2014年1月承德市多家醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷確診為胃癌的新鮮組織90例，癌灶＞10cm處癌旁新鮮正常組織55例，且患者臨床資料完整，術(shù)前未行放、化療。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑:逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑盒和DL1000 DNA Marker購于Takara公司，所有引物序列由上海Invitrogen公司合成。

1.2.2 總RNA的提取及目的片段的合成:按照Trizol試劑說明書抽提組織的總RNA，分光光度計(jì)檢測RNA的濃度及純度，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。PCR引物序列:內(nèi)參β-actin的上游引物:5’- CCTGTGGCATCCACGAAACT-3’，下游引物:5’-GAAGCATTTG- -CGGTGGACGAT-3’，片段長度為315bp;L-選擇素上游引物:5’-CATCATGGAACCGACT GCT-3’，下游引物:5’-ATGGCCACTGCATGACCA-3’，片段長度為408bp;MTDH上游引物:5′-TGTTTCTGCTGGG CTACGG-3′，下游引物:5′-GTTCTCGCTCCGGAGATT-3′，片段長度為150bp。PCR反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性2min，94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸1min，共30個(gè)循環(huán);最后72℃延伸5min，4℃結(jié)束反應(yīng)。

1.2.3 檢測及分析:以β-actin為內(nèi)參照，將PCR產(chǎn)物行2%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)采集圖像后分析mRNA的相對表達(dá)量:采用Quantity One 4.6.2軟件分析各條帶的灰度值，再分別計(jì)算L-選擇素、MTDH條帶與β-actin條帶的灰度值之比，即為目的基因mRNA的相對表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 L-選擇素、MTDH mRNA的表達(dá)情況 胃癌組織L-選擇素、MTDH mRNA的相對表達(dá)量均明顯高于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1:

表1 胃癌組織和癌旁正常組織L-選擇素和MTDH mRNA的表達(dá)(±s)

表1 胃癌組織和癌旁正常組織L-選擇素和MTDH mRNA的表達(dá)(±s)

項(xiàng)目和組織 n mRNA表達(dá)量 t P L-選擇素 胃癌組織 90 0.509±0.187 10.353 ＜0.05癌旁正常組織 55 0.214±0.024 MTDH 胃癌組織 90 0.693±0.106 14.148 ＜0.05癌旁正常組織 55 0.489±0.024

2.2 L-選擇素、MTDH mRNA表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 L-選擇素、MTDH mRNA的表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P＜0.05)，與性別、年齡無關(guān)(P＞0.05)。見表2:

表2 L-選擇素和MTDH mRNA的表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 胃癌組織L-選擇素、MTDH mRNA表達(dá)的相關(guān)性 胃癌組織L-選擇素、MTDH mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.369，P＜0.05)。見表3:

表3 胃癌組織L-選擇素與MTDH mRNA表達(dá)的相關(guān)性(n)

3 討論

惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程需要多因素參與，該過程主要包括細(xì)胞黏附、基質(zhì)降解和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移3個(gè)步驟。在此過程中細(xì)胞黏附分子及能夠促進(jìn)腫瘤發(fā)展的相關(guān)蛋白發(fā)揮了重要作用，在基因水平對其檢測能更進(jìn)一步闡明它們在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的重要性。

選擇素家族是細(xì)胞黏附分子家族成員之一，其中L-選擇素在腫瘤細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移過程中具有關(guān)鍵作用。劉敏等[1]的研究采用體外黏附抑制實(shí)驗(yàn)證實(shí)，L-選擇素可協(xié)助肝癌細(xì)胞與冰凍淋巴結(jié)切片的黏附，且該黏附可被L-選擇素的抗體抑制;李坤等[2]的研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌組織L-選擇素的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。上述研究顯示，L-選擇素與癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，但關(guān)于L-選擇素在胃癌中的研究尚未見報(bào)道。本研究采用RT-PCR法進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織L-選擇素mRNA的相對表達(dá)量明顯高于癌旁正常組織，且在胃癌組織的表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)，說明L-選擇素在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。

MTDH已被證實(shí)是一種原癌基因，功能主要是調(diào)節(jié)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的信號途徑，如PI3K/Akt、Wnt/β-catenin等，從而參與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移、血管再生等。有研究發(fā)現(xiàn)，MTDH蛋白在多種人類腫瘤中都呈過表達(dá)，如卵巢癌、膀胱癌等[3-4];另外，Song等[4]的研究發(fā)現(xiàn)，MTDH在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜不典型增生及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)率逐漸增高，且在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。本研究在基因水平進(jìn)行了檢測，證實(shí)了胃癌組織MTDH mRNA的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，并與胃癌組織分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期有關(guān)。

本研究還發(fā)現(xiàn)，胃癌組織L-選擇素、MTDH mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)，說明二者在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起協(xié)同作用，可作為判斷胃癌進(jìn)展的分子標(biāo)志。本研究提示，深入研究L-選擇素、MTDH與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性，將為指導(dǎo)臨床胃癌的治療和評估預(yù)后提供新的理論依據(jù)，但L-選擇素、MTDH在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中具體的作用機(jī)制，有待進(jìn)一步詳細(xì)研究。

[1]劉敏，王莉芬，朱杰，等.L-選擇蛋白可能介導(dǎo)小鼠肝癌HCa-F細(xì)胞經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的研究[J].解剖學(xué)報(bào)，2004，35(5):502-508.

[2]李坤，金春亭，張果.CCR7和L-選擇素在大腸癌組織中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥，2012，52(7):35-37.

[3]Li C, Liu J, Lu R, et al. AEG-1overexpression: a novel indicator for peritoneal dissemination and lymph node metastasis in epithelial ovarian cancers [J]. Int J Gynecol Cancer,2011,21(4): 602-608.

[4]周健，王增軍，殷長軍，等.膀胱移行細(xì)胞癌中MTDH和Ki-67的表達(dá)及臨床意義[J].江蘇醫(yī)藥，2012，38(11):1282-1284.

[5]Song H, Li C, Li R, et al. Prognostic significance of AEG-1 expression in colorectal carcinoma[J].Colorectal Dis, 2010, 25(10): 1201-1209.

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF L-SELECTIN AND MTDH IN GASTRIC CARCINOMA

MA Wei-jun, LIU Ji-wei, SHI Jian-qin, et al
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To detect the expression of L-selectin and metadherin (MTDH) at genetic level in gastric carcinoma and analyze the relationship between their expression and clinical pathological characteristics of gastric carcinoma.Methods:The expression of L-selectin and MTDH mRNA in 90 cases gastric carcinoma and 55 cases corresponding nontumor normal tissues were detected by RT-PCR.Results:The relative expression of L-selectin and MTDH mRNA in gastric carcinoma were all obviously higher than that in corresponding non-tumor normal tissues (P＜0.05). The expression of L-selectin and MTDH mRNA in gastric carcinoma were related to differentiation degree, inf i ltration depth, lymph node metastasis and TNM stage (P＜0.05); but no related to age and sex (P＞0.05). In gastric carcinoma, the MTDH mRNA expression was positively related to L-selectin (P＜0.05).Conclusions:L-selectin and MTDH is closely related to development of gastric carcinoma, and can be acted as index for evaluating the metastatic potential of malignant tumor and prognosis.

Gastric carcinoma; L-selectin; MTDH; RT-PCR

R735.2

A

1004-6879(2014)05-0371-03

2014-04-14)