微乳毛細(xì)管電色譜電動(dòng)進(jìn)樣場(chǎng)放大堆積法檢測(cè)化妝品中糖皮質(zhì)激素

李娟等

1引言

糖皮質(zhì)激素是一類疏水性較強(qiáng)的中性化合物，具有抗炎、抗過敏、抑制纖維細(xì)胞增生、減少5羥色胺形成等作用，加入化妝品中可達(dá)到快速美白效果。但是，長期使用含有糖皮質(zhì)激素的化妝品會(huì)產(chǎn)生毛囊萎縮、面部血管擴(kuò)張、高血壓、免疫功能下降等副作用[1]，對(duì)人體造成嚴(yán)重傷害。我國衛(wèi)生部頒發(fā)的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007版）中明確規(guī)定糖皮質(zhì)激素為化妝品中的禁用組分。

為了解化妝品中糖皮質(zhì)激素利用現(xiàn)狀，有必要對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)。目前糖皮質(zhì)激素分析方法主要有高效液相色譜法[2～4]、 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[5，6]、 固相萃取液相色譜法[7，8]和毛細(xì)管電泳法（CE）[9～11]等。采用液相色譜法，方法穩(wěn)定，但是溶劑消耗大且檢測(cè)靈敏度較低；液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法儀器價(jià)格昂貴；固相萃取液相色譜聯(lián)用需要對(duì)樣品進(jìn)行凈化前處理和離線預(yù)富集，操作繁瑣且富集倍數(shù)較低；毛細(xì)管電泳分離方法因耗時(shí)少、分離效率高，在糖皮質(zhì)激素分析中得到廣泛應(yīng)用，但靈敏度和檢測(cè)限方面都較難達(dá)到微量或痕量檢測(cè)的要求。因此，針對(duì)糖皮質(zhì)激素，建立一種簡單、準(zhǔn)確、高靈敏度的檢測(cè)方法，對(duì)于化妝品的質(zhì)量監(jiān)控有重要的意義。

微乳毛細(xì)管電色譜法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）對(duì)疏水中性物質(zhì)具有良好的分離能力，但是MEEKC在線富集的方法報(bào)道較少[12～14]。場(chǎng)放大堆積（Fieldamplified sample stacking，F(xiàn)ASS）是一種常用的富集技術(shù)，與MEEKC聯(lián)用能兼顧分離選擇性和富集效果。電動(dòng)進(jìn)樣（Electric injection）不僅增加富集倍數(shù)，還增強(qiáng)了進(jìn)樣選擇性，將富集作用擴(kuò)展到進(jìn)樣階段。但是，糖皮質(zhì)激素中性不帶電，通常采用流體力學(xué)進(jìn)樣，不能直接進(jìn)行電動(dòng)進(jìn)樣。本研究通過調(diào)節(jié)樣品基質(zhì)pH值，促使分析物發(fā)生電離，能夠以電遷移模式進(jìn)入毛細(xì)管。本研究建立了MEEKCFASS聯(lián)用場(chǎng)放大進(jìn)樣同時(shí)檢測(cè)化妝品中6種糖皮質(zhì)激素的方法，與常規(guī)毛細(xì)管電泳法相比，方法靈敏度提高了2個(gè)數(shù)量級(jí)。本方法操作過程簡單、樣品用量少、經(jīng)濟(jì)快速，具有良好的分離度和靈敏度。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

TH3100型高效毛細(xì)管電泳儀（保定天惠分離科學(xué)研究所），熔融石英毛細(xì)管（河北永年瑞灃光導(dǎo)纖維廠，65 cm×50 μm，有效長度50 cm）。SK2200H超聲波清洗器（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）； NW10VF0酸度計(jì)（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司）；TGL16G高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市英峪高科儀器廠）；Milli Q Refrence超純水機(jī)（美國Millipore公司）。

潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品（J&K公司）。十二烷基硫酸鈉（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析純，上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。實(shí)驗(yàn)用水均為超純水?；瘖y品樣品購于無錫某超市。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取適量潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分別加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱內(nèi)避光保存，使用時(shí)根據(jù)需要稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。

3結(jié)果與討論

3.1樣品基質(zhì)pH值及濃度的影響

采用電動(dòng)進(jìn)樣時(shí)中性分析物的解離度會(huì)顯著影響FASS的富集效果。糖皮質(zhì)激素在中性或酸性條件下難解離，而隨著堿性的增強(qiáng)， 解離度增大，因此選擇堿性樣品基質(zhì)有利于電動(dòng)進(jìn)樣。由于背景緩沖液為強(qiáng)酸性，堿性過強(qiáng)可能會(huì)發(fā)生背景緩沖液區(qū)帶與樣品區(qū)帶發(fā)生酸堿中和，使樣品和樣品區(qū)帶均呈電中性，造成嚴(yán)重峰裂分和重疊或不出峰。實(shí)驗(yàn)考察了pH 7.5～9.5的硼砂緩沖液作為樣品基質(zhì)，發(fā)現(xiàn)在pH 8.5時(shí)峰形良好，富集效果最好。

硼砂緩沖液的濃度影響樣品基質(zhì)的離子強(qiáng)度和電導(dǎo)率，理論上，低濃度基質(zhì)溶液在樣品進(jìn)口端形成低電場(chǎng)，能推動(dòng)更多的樣品離子進(jìn)入毛細(xì)管。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，硼砂濃度在1～ 9 mmol/L范圍內(nèi)，1 mmol/L硼砂緩沖液富集效果最佳。若硼砂緩沖液濃度低于1 mmol/L，過低的離子強(qiáng)度和電導(dǎo)率會(huì)影響樣品區(qū)帶的電場(chǎng)強(qiáng)度，場(chǎng)強(qiáng)過低引起分析物遷移速度過慢，對(duì)富集不利，且過低濃度的基質(zhì)在進(jìn)樣端口形成的電場(chǎng)過低，造成樣品進(jìn)樣不完全，在進(jìn)樣階段存在樣品損失，降低富集效率，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定，甚至不出峰。因此，樣品基質(zhì)濃度選擇為1 mmol/L。

3.2水柱長度的影響

1引言

糖皮質(zhì)激素是一類疏水性較強(qiáng)的中性化合物，具有抗炎、抗過敏、抑制纖維細(xì)胞增生、減少5羥色胺形成等作用，加入化妝品中可達(dá)到快速美白效果。但是，長期使用含有糖皮質(zhì)激素的化妝品會(huì)產(chǎn)生毛囊萎縮、面部血管擴(kuò)張、高血壓、免疫功能下降等副作用[1]，對(duì)人體造成嚴(yán)重傷害。我國衛(wèi)生部頒發(fā)的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007版）中明確規(guī)定糖皮質(zhì)激素為化妝品中的禁用組分。

為了解化妝品中糖皮質(zhì)激素利用現(xiàn)狀，有必要對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)。目前糖皮質(zhì)激素分析方法主要有高效液相色譜法[2～4]、 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[5，6]、 固相萃取液相色譜法[7，8]和毛細(xì)管電泳法（CE）[9～11]等。采用液相色譜法，方法穩(wěn)定，但是溶劑消耗大且檢測(cè)靈敏度較低；液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法儀器價(jià)格昂貴；固相萃取液相色譜聯(lián)用需要對(duì)樣品進(jìn)行凈化前處理和離線預(yù)富集，操作繁瑣且富集倍數(shù)較低；毛細(xì)管電泳分離方法因耗時(shí)少、分離效率高，在糖皮質(zhì)激素分析中得到廣泛應(yīng)用，但靈敏度和檢測(cè)限方面都較難達(dá)到微量或痕量檢測(cè)的要求。因此，針對(duì)糖皮質(zhì)激素，建立一種簡單、準(zhǔn)確、高靈敏度的檢測(cè)方法，對(duì)于化妝品的質(zhì)量監(jiān)控有重要的意義。

微乳毛細(xì)管電色譜法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）對(duì)疏水中性物質(zhì)具有良好的分離能力，但是MEEKC在線富集的方法報(bào)道較少[12～14]。場(chǎng)放大堆積（Fieldamplified sample stacking，F(xiàn)ASS）是一種常用的富集技術(shù)，與MEEKC聯(lián)用能兼顧分離選擇性和富集效果。電動(dòng)進(jìn)樣（Electric injection）不僅增加富集倍數(shù)，還增強(qiáng)了進(jìn)樣選擇性，將富集作用擴(kuò)展到進(jìn)樣階段。但是，糖皮質(zhì)激素中性不帶電，通常采用流體力學(xué)進(jìn)樣，不能直接進(jìn)行電動(dòng)進(jìn)樣。本研究通過調(diào)節(jié)樣品基質(zhì)pH值，促使分析物發(fā)生電離，能夠以電遷移模式進(jìn)入毛細(xì)管。本研究建立了MEEKCFASS聯(lián)用場(chǎng)放大進(jìn)樣同時(shí)檢測(cè)化妝品中6種糖皮質(zhì)激素的方法，與常規(guī)毛細(xì)管電泳法相比，方法靈敏度提高了2個(gè)數(shù)量級(jí)。本方法操作過程簡單、樣品用量少、經(jīng)濟(jì)快速，具有良好的分離度和靈敏度。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

TH3100型高效毛細(xì)管電泳儀（保定天惠分離科學(xué)研究所），熔融石英毛細(xì)管（河北永年瑞灃光導(dǎo)纖維廠，65 cm×50 μm，有效長度50 cm）。SK2200H超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）； NW10VF0酸度計(jì)（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司）；TGL16G高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市英峪高科儀器廠）；Milli Q Refrence超純水機(jī)（美國Millipore公司）。

潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品（J&K公司）。十二烷基硫酸鈉（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析純，上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。實(shí)驗(yàn)用水均為超純水?；瘖y品樣品購于無錫某超市。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取適量潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分別加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱內(nèi)避光保存，使用時(shí)根據(jù)需要稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。

3結(jié)果與討論

3.1樣品基質(zhì)pH值及濃度的影響

采用電動(dòng)進(jìn)樣時(shí)中性分析物的解離度會(huì)顯著影響FASS的富集效果。糖皮質(zhì)激素在中性或酸性條件下難解離，而隨著堿性的增強(qiáng)， 解離度增大，因此選擇堿性樣品基質(zhì)有利于電動(dòng)進(jìn)樣。由于背景緩沖液為強(qiáng)酸性，堿性過強(qiáng)可能會(huì)發(fā)生背景緩沖液區(qū)帶與樣品區(qū)帶發(fā)生酸堿中和，使樣品和樣品區(qū)帶均呈電中性，造成嚴(yán)重峰裂分和重疊或不出峰。實(shí)驗(yàn)考察了pH 7.5～9.5的硼砂緩沖液作為樣品基質(zhì)，發(fā)現(xiàn)在pH 8.5時(shí)峰形良好，富集效果最好。

硼砂緩沖液的濃度影響樣品基質(zhì)的離子強(qiáng)度和電導(dǎo)率，理論上，低濃度基質(zhì)溶液在樣品進(jìn)口端形成低電場(chǎng)，能推動(dòng)更多的樣品離子進(jìn)入毛細(xì)管。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，硼砂濃度在1～ 9 mmol/L范圍內(nèi)，1 mmol/L硼砂緩沖液富集效果最佳。若硼砂緩沖液濃度低于1 mmol/L，過低的離子強(qiáng)度和電導(dǎo)率會(huì)影響樣品區(qū)帶的電場(chǎng)強(qiáng)度，場(chǎng)強(qiáng)過低引起分析物遷移速度過慢，對(duì)富集不利，且過低濃度的基質(zhì)在進(jìn)樣端口形成的電場(chǎng)過低，造成樣品進(jìn)樣不完全，在進(jìn)樣階段存在樣品損失，降低富集效率，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定，甚至不出峰。因此，樣品基質(zhì)濃度選擇為1 mmol/L。

3.2水柱長度的影響

1引言

糖皮質(zhì)激素是一類疏水性較強(qiáng)的中性化合物，具有抗炎、抗過敏、抑制纖維細(xì)胞增生、減少5羥色胺形成等作用，加入化妝品中可達(dá)到快速美白效果。但是，長期使用含有糖皮質(zhì)激素的化妝品會(huì)產(chǎn)生毛囊萎縮、面部血管擴(kuò)張、高血壓、免疫功能下降等副作用[1]，對(duì)人體造成嚴(yán)重傷害。我國衛(wèi)生部頒發(fā)的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007版）中明確規(guī)定糖皮質(zhì)激素為化妝品中的禁用組分。

為了解化妝品中糖皮質(zhì)激素利用現(xiàn)狀，有必要對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)。目前糖皮質(zhì)激素分析方法主要有高效液相色譜法[2～4]、 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[5，6]、 固相萃取液相色譜法[7，8]和毛細(xì)管電泳法（CE）[9～11]等。采用液相色譜法，方法穩(wěn)定，但是溶劑消耗大且檢測(cè)靈敏度較低；液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法儀器價(jià)格昂貴；固相萃取液相色譜聯(lián)用需要對(duì)樣品進(jìn)行凈化前處理和離線預(yù)富集，操作繁瑣且富集倍數(shù)較低；毛細(xì)管電泳分離方法因耗時(shí)少、分離效率高，在糖皮質(zhì)激素分析中得到廣泛應(yīng)用，但靈敏度和檢測(cè)限方面都較難達(dá)到微量或痕量檢測(cè)的要求。因此，針對(duì)糖皮質(zhì)激素，建立一種簡單、準(zhǔn)確、高靈敏度的檢測(cè)方法，對(duì)于化妝品的質(zhì)量監(jiān)控有重要的意義。

微乳毛細(xì)管電色譜法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）對(duì)疏水中性物質(zhì)具有良好的分離能力，但是MEEKC在線富集的方法報(bào)道較少[12～14]。場(chǎng)放大堆積（Fieldamplified sample stacking，F(xiàn)ASS）是一種常用的富集技術(shù)，與MEEKC聯(lián)用能兼顧分離選擇性和富集效果。電動(dòng)進(jìn)樣（Electric injection）不僅增加富集倍數(shù)，還增強(qiáng)了進(jìn)樣選擇性，將富集作用擴(kuò)展到進(jìn)樣階段。但是，糖皮質(zhì)激素中性不帶電，通常采用流體力學(xué)進(jìn)樣，不能直接進(jìn)行電動(dòng)進(jìn)樣。本研究通過調(diào)節(jié)樣品基質(zhì)pH值，促使分析物發(fā)生電離，能夠以電遷移模式進(jìn)入毛細(xì)管。本研究建立了MEEKCFASS聯(lián)用場(chǎng)放大進(jìn)樣同時(shí)檢測(cè)化妝品中6種糖皮質(zhì)激素的方法，與常規(guī)毛細(xì)管電泳法相比，方法靈敏度提高了2個(gè)數(shù)量級(jí)。本方法操作過程簡單、樣品用量少、經(jīng)濟(jì)快速，具有良好的分離度和靈敏度。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

TH3100型高效毛細(xì)管電泳儀（保定天惠分離科學(xué)研究所），熔融石英毛細(xì)管（河北永年瑞灃光導(dǎo)纖維廠，65 cm×50 μm，有效長度50 cm）。SK2200H超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）； NW10VF0酸度計(jì)（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司）；TGL16G高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市英峪高科儀器廠）；Milli Q Refrence超純水機(jī)（美國Millipore公司）。

潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品（J&K公司）。十二烷基硫酸鈉（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析純，上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。實(shí)驗(yàn)用水均為超純水?；瘖y品樣品購于無錫某超市。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取適量潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分別加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱內(nèi)避光保存，使用時(shí)根據(jù)需要稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。

3結(jié)果與討論

3.1樣品基質(zhì)pH值及濃度的影響

采用電動(dòng)進(jìn)樣時(shí)中性分析物的解離度會(huì)顯著影響FASS的富集效果。糖皮質(zhì)激素在中性或酸性條件下難解離，而隨著堿性的增強(qiáng)， 解離度增大，因此選擇堿性樣品基質(zhì)有利于電動(dòng)進(jìn)樣。由于背景緩沖液為強(qiáng)酸性，堿性過強(qiáng)可能會(huì)發(fā)生背景緩沖液區(qū)帶與樣品區(qū)帶發(fā)生酸堿中和，使樣品和樣品區(qū)帶均呈電中性，造成嚴(yán)重峰裂分和重疊或不出峰。實(shí)驗(yàn)考察了pH 7.5～9.5的硼砂緩沖液作為樣品基質(zhì)，發(fā)現(xiàn)在pH 8.5時(shí)峰形良好，富集效果最好。

硼砂緩沖液的濃度影響樣品基質(zhì)的離子強(qiáng)度和電導(dǎo)率，理論上，低濃度基質(zhì)溶液在樣品進(jìn)口端形成低電場(chǎng)，能推動(dòng)更多的樣品離子進(jìn)入毛細(xì)管。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，硼砂濃度在1～ 9 mmol/L范圍內(nèi)，1 mmol/L硼砂緩沖液富集效果最佳。若硼砂緩沖液濃度低于1 mmol/L，過低的離子強(qiáng)度和電導(dǎo)率會(huì)影響樣品區(qū)帶的電場(chǎng)強(qiáng)度，場(chǎng)強(qiáng)過低引起分析物遷移速度過慢，對(duì)富集不利，且過低濃度的基質(zhì)在進(jìn)樣端口形成的電場(chǎng)過低，造成樣品進(jìn)樣不完全，在進(jìn)樣階段存在樣品損失，降低富集效率，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定，甚至不出峰。因此，樣品基質(zhì)濃度選擇為1 mmol/L。

3.2水柱長度的影響