表皮生長(zhǎng)因子和前列腺素E2在合并幽門螺桿菌感染的胃上皮內(nèi)瘤變中的作用研究

徐 丹，孫圣斌，黃曼玲，張 姮，吳 杰

2000年，世界衛(wèi)生組織(WHO)腫瘤新分類，將胃上皮組織形態(tài)學(xué)上具有一定異型性，在浸潤(rùn)前的腫瘤性改變，即胃上皮惡性腫瘤的前驅(qū)病變稱為胃上皮內(nèi)瘤變(gastric intraepithelial neoplasia，GIN)，取代了以往異型增生、不典型增生和原位癌等術(shù)語(yǔ)。根據(jù)細(xì)胞異型和結(jié)構(gòu)紊亂程度分為低級(jí)別胃上皮內(nèi)瘤變(low gastric intraepithelial neoplasia，LGIN)和高級(jí)別胃上皮內(nèi)瘤變(high gastric intraepithelial neoplasia，HGIN) 兩類，在胃癌的發(fā)生過(guò)程中胃黏膜的變化是一個(gè)由黏膜炎癥、LGIN、HGIN、癌變的發(fā)展過(guò)程。LGIN和HGIN代表著胃黏膜上皮不同程度的瘤變過(guò)程[1-2]。慢性胃炎、消化性潰瘍、胃癌、胃黏膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤等與幽門螺桿菌(Hp)密切相關(guān)[3-4]。眾所周知，表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和前列腺素E2(PGE2)是重要的胃黏膜保護(hù)因子。郝英霞等[5]研究發(fā)現(xiàn)從慢性淺表性胃炎→慢性萎縮性胃炎→胃癌，血清EGF水平逐漸升高，Hp有升高EGF的作用。而EGF和PGE2在GIN中的作用如何，目前尚不清楚，因此，本研究對(duì)EGF和PGE2在合并Hp感染的GIN中的作用進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年5月—2013年4月武漢市中心醫(yī)院收治的胃鏡下初次行黏膜鉗取活檢，病理診斷為L(zhǎng)GIN的患者82例為研究對(duì)象，其中男49例，女33例；年齡32～77歲，平均53.4歲。均排除胃鏡或病理診斷為上消化道潰瘍、食管癌、胃癌及其他上消化道非上皮性腫瘤者。

1.2 胃鏡下分型 采用2003年中華消化內(nèi)鏡學(xué)會(huì)大連會(huì)議制定的慢性胃炎分型分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),分為淺表性胃炎、糜爛性胃炎、出血性胃炎、萎縮性胃炎。同時(shí)存在多種病變時(shí)以主要病變計(jì)算。

1.3 病理診斷及炎癥的病理分級(jí) 胃鏡下取5塊標(biāo)本，胃竇2塊，取自距幽門2～3 cm 的大彎和小彎；胃體2塊，取自距賁門8 cm 的大彎和約距胃角近側(cè)4 cm的小彎；胃角1塊，用于組織病理學(xué)觀察病理。將病理切片進(jìn)行蘇木素-伊紅染色，診斷LGIN。按2000版WHO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，LGIN指結(jié)構(gòu)和細(xì)胞學(xué)異常多發(fā)生于上皮下半部；細(xì)胞核緊密排列在基底，核染色質(zhì)密集深染，核增大，分裂象較少，可保持一定極性；腺體結(jié)構(gòu)較不規(guī)則，形態(tài)較紊亂，可出現(xiàn)背靠背及共壁。根據(jù)慢性炎性細(xì)胞的密集程度和浸潤(rùn)深度分級(jí)，輕度炎癥：慢性炎性細(xì)胞較少并局限于黏膜淺層，不超過(guò)黏膜層的1/3；中度炎癥：慢性炎性細(xì)胞較密集，超過(guò)黏膜層的1/3，達(dá)到2/3；重度炎癥：慢性炎性細(xì)胞密集，超過(guò)黏膜層的2/3。

1.4 Hp感染的診斷 快速尿素酶法：于胃竇和胃體各鉗取1小塊組織，兩者均為陽(yáng)性結(jié)果判為Hp陽(yáng)性，否則為Hp陰性。

本文要點(diǎn)提示——

(1)幽門螺桿菌(Hp)陽(yáng)性患者血清表皮生長(zhǎng)因子(EGF)水平高于Hp陰性患者，但前列腺素E2(PGE2)水平低于Hp陰性患者。血清EGF和PGE2在合并Hp感染的胃上皮內(nèi)瘤變起一定作用。

(2)淺表性胃炎、糜爛性胃炎、出血性胃炎及萎縮性胃炎患者無(wú)論是否感染Hp其血清EGF、PGE2水平比較均無(wú)差異。

(3)無(wú)論是否感染Hp，胃炎伴低級(jí)別胃上皮內(nèi)瘤變患者，隨著炎癥程度的加重，血清EGF水平升高，PGE2水平降低。

1.5 血清EGF及PGE2水平測(cè)定 患者均隔夜空腹10 h以上取肘靜脈血6～8 ml，2 903 r/min(離心半徑4 cm) 離心10 min，收集血清。將血清于-70 ℃保存，用于EGF及PGE2水平的測(cè)定。EGF檢測(cè)試劑盒及PGE2檢測(cè)試劑盒均為美國(guó)R&D公司生產(chǎn)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法，操作按說(shuō)明書進(jìn)行，檢測(cè)血清EGF和PGE2的水平。

2 結(jié)果

2.1 胃鏡和病理診斷結(jié)果 82例患者初次胃鏡診斷為淺表性胃炎16例、糜爛性胃炎52例、出血性胃炎9例、萎縮性胃炎5例。病理診斷為慢性炎癥伴L(zhǎng)GIN，其中輕度炎癥34例、中度炎癥42例、重度炎癥6例。Hp陽(yáng)性58例，Hp陰性24例。

2.2 Hp陽(yáng)性和Hp陰性患者血清EGF及PGE2水平比較 Hp陽(yáng)性患者較Hp陰性血清EGF水平升高，PGE2水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

Table1 Comparison of serum EGF and PGE2 levels in Hp positive and Hp negative patients

組別例數(shù)EGFPGE2Hp陽(yáng)性581807±499118±18Hp陰性24 685±17 210±34t值1428115751P值 0003 0001

注：EGF=表皮生長(zhǎng)因子，PGE2=前列腺素E2

2.3 Hp陽(yáng)性和Hp陰性不同胃鏡下分型患者血清EGF、PGE2水平比較 Hp陽(yáng)性患者中淺表性胃炎12例、糜爛性胃炎38例、出血性胃炎5例、萎縮性胃炎3例。Hp陽(yáng)性不同胃鏡下分型患者血清EGF、PGE2水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表2)。Hp陰性患者中淺表性胃炎4例、糜爛性胃炎14例、出血性胃炎4例、萎縮性胃炎2例。Hp陰性不同胃鏡下分型患者血清EGF、PGE2水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表3)。

2.4 Hp陽(yáng)性和Hp陰性不同病理分級(jí)患者血清EGF、PGE2水平比較 Hp陽(yáng)性患者中輕度炎癥24例、中度炎癥30例、重度炎癥4例。Hp陽(yáng)性不同病理分級(jí)患者血清EGF、PGE2水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中與輕度炎癥患者比較，中度炎癥患者和重度炎癥患者血清EGF水平升高、PGE2水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與中度炎癥患者比較，重度炎癥患者血清EGF水平升高、PGE2水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表4)。

Hp陰性患者中輕度炎癥10例、中度炎癥12例、重度炎癥2例。Hp陰性不同病理分級(jí)患者血清EGF、PGE2水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中與輕度炎癥患者比較，中度炎癥患者和重度炎癥患者血清EGF水平升高、PGE2水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與中度炎癥患者比較，重度炎癥患者血清EGF水平升高、PGE2水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表5)。

Table2 Comparison of serum EGF and PGE2 levels in Hp positive patients with different endoscopic classifications

分型例數(shù)EGFPGE2淺表性胃炎121921±509115±14糜爛性胃炎381753±458118±20出血性胃炎51876±668114±20萎縮性胃炎31919±858134±12F值08270919P值05340438

Table3 Comparison of serum EGF and PGE2 levels in Hp negative patients with different endoscopic classifcations

分型例數(shù)EGFPGE2淺表性胃炎4704±223205±38糜爛性胃炎14668±135231±37出血性胃炎4759±96213±16萎縮性胃炎2619±226192±17F值08770799P值05460509

Table4 Comparison of serum EGF and PGE2 levels in Hp positive patients with different pathological grading

分級(jí)例數(shù)EGFPEG2輕度炎癥241349±206129±18中度炎癥302048±320?112±12?重度炎癥42742±64?△91±04?△F值1432915520P值00000000

注：與輕度炎癥比較，*P<0.05；與中度炎癥比較，△P<0.05

Table5 Comparison of serum EGF and PGE2 levels in Hp negative patients with different pathological grading

分級(jí)例數(shù)EGFPEG2輕度炎癥10545±114219±39中度炎癥12772±44?203±24?重度炎癥2865±106?△197±67?△F值1467512321P值00210038

注：與輕度炎癥比較，*P<0.05；與中度炎癥比較，△P<0.05

3 討論

EGF是一種能刺激或抑制多種細(xì)胞增殖和分化的多肽。EGF可以刺激上皮細(xì)胞中mRNA、 DNA以及蛋白質(zhì)的合成,促進(jìn)黏膜上皮的增生[6-7]。在慢性萎縮性胃炎大鼠中，EGF水平明顯升高，血清PGE2和胃泌素水平明顯降低，同時(shí)慢性萎縮性胃炎大鼠EGF水平的升高與表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)高表達(dá)有關(guān)[8-10]。EGF和EGFR在胃癌中有很強(qiáng)的表達(dá)[11]。EGF基因過(guò)度表達(dá)或拷貝數(shù)增加能促進(jìn)正常細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。癌旁組織或不典型增生細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的過(guò)渡區(qū)有EGF異常表達(dá),腫瘤細(xì)胞分泌因子刺激腫瘤周圍的細(xì)胞表達(dá)EGF,從而使周圍的正常組織,細(xì)胞等逐漸向惡性表型轉(zhuǎn)化[12]。

有研究顯示Hp感染和高鹽飲食為GIN的致病因素，這與胃癌的發(fā)病機(jī)制和腫瘤演進(jìn)過(guò)程是一致的[13-14]。Hp感染可使上皮細(xì)胞增生活躍，其增殖超出正常水平1倍以上。根除Hp后，其增殖水平恢復(fù)正常。新近研究也表明Hp可通過(guò)促進(jìn)上皮細(xì)胞的凋亡而刺激代償增生過(guò)程[15-16]。本研究中，Hp陽(yáng)性率達(dá)70.7%(58/82)，推測(cè)Hp可能參與GIN的發(fā)病。Hp陽(yáng)性患者EGF水平高于Hp陰性患者，且隨著炎癥程度的加重，EGF水平逐漸上升。Hp感染引起GIN患者EGF 水平升高與胃黏膜炎癥程度有一定的關(guān)系，Hp對(duì)胃黏膜的損傷，引起的炎癥越重，對(duì)EGF的促分泌作用越明顯。合并Hp感染GIN患者EGF參與胃黏膜炎癥的發(fā)生，可能由于Hp引起局部黏膜反復(fù)炎癥，刺激血清中EGF分泌增加，從而刺激胃黏膜上皮細(xì)胞的分裂、增殖，進(jìn)而導(dǎo)致胃黏膜上皮增生產(chǎn)生GIN。

PGE2為目前公認(rèn)的細(xì)胞保護(hù)因子，能通過(guò)抑制胃酸分泌，增加黏膜血流，使已受損的胃黏膜修復(fù)[17-18]。本研究中Hp陽(yáng)性患者PGE2水平低于Hp陰性患者，隨著內(nèi)鏡下炎癥程度加重，PGE2水平逐漸下降。Hp可以引起較重的炎性反應(yīng)，Hp對(duì)黏膜上皮的直接作用,使胃黏膜炎性細(xì)胞數(shù)量增加,同時(shí)產(chǎn)生大量的炎性遞質(zhì)，損傷細(xì)胞免疫功能,同時(shí)也影響胃黏膜的分泌功能,這可能是本研究所見Hp陽(yáng)性GIN患者PGE2減少的原因之一。

本研究所有病例的初次胃鏡診斷中，糜爛性胃炎占慢性胃炎的63.4%(52/82)，淺表性胃炎、出血性胃炎和萎縮性胃炎共占36.6%(30/82)，說(shuō)明多種類型的胃炎均可能發(fā)生GIN，以糜爛性胃炎居多，但是在不同類型的胃炎中，EGF及PGE2水平?jīng)]有差異。而隨著炎癥程度加重，EGF及PGE2水平差異顯著，胃鏡下分型與炎癥程度的進(jìn)展不是一定相伴發(fā)生，其機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

因血液中EGF水平過(guò)度升高，而主要作為局部激素的PGE2水平升高相對(duì)不足，從而引起胃黏膜上皮細(xì)胞的過(guò)度增生導(dǎo)致GIN。在合并Hp感染的情況下EGF參與二次打擊，造成胃黏膜損害加重，存在矯枉過(guò)正現(xiàn)象，這種矯枉過(guò)正也可能是合并Hp感染胃炎容易發(fā)生GIN的重要機(jī)制之一。GIN患者胃黏膜慢性炎癥程度與EGF分泌升高和PGE2分泌相對(duì)不足有關(guān)。血清EGF和PGE2在合并Hp感染的GIN患者胃黏膜損傷中起一定作用，為預(yù)防Hp感染造成胃黏膜損傷加重應(yīng)盡早根除Hp。HGIN具備與腫瘤細(xì)胞相類似的生物學(xué)特征，有發(fā)展為腫瘤細(xì)胞的潛在趨勢(shì),臨床上多采取手術(shù)或內(nèi)鏡下切除等方式從而達(dá)到治療目的。而LGIN經(jīng)過(guò)藥物及保守治療，部分可以逆轉(zhuǎn)。因此，本研究將LGIN作為研究對(duì)象，研究EGF和PGE2在合并Hp感染的GIN患者中的作用，為GIN癌變的預(yù)防提供了參考依據(jù)。

1 Fassan M,Pizzi M,Farinati F,et al.Lesions indefinite for intraepithelial neoplasia and OLGA staging for gastric atrophy[J].Am J Clin Pathol,2012，37(5):727-732.

2 陳思杰，鄒清云，黃中華，等.食管鱗狀上皮低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變的隨訪研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2010,13(2)：531.

3 Kato M,Asaka M.Recent development of gastric cancer prevention[J].Jpn J Clin Oncol，2012，42(11):987-994.

4 Takeuchi T,Umegaki E,Takeuchi N,et al.Strategies for peptic ulcer healing after 1 week proton pump inhibitor-based triple Helicobacter pylori eradication therapy in Japanese patients:differences of gastric ulcers and duodenal ulcers[J].J Clin Biochem Nutr,2012,51(3):189-195.

5 郝英霞，喬占濤，孫璐，等. Hp相關(guān)胃炎患者血清表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和β-微球蛋白(β-MG) 水平研究[J]. 河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，20(1):1-4.

6 Jiang L,Lan T,Chen Y,et al.PKG Ⅱ inhibits EGF/EGFR-induced migration of gastric cancer Cells[J].PLoS One,2013,8(4):e61674.

7 張志勇，孫公凱，楊世忠.表皮生長(zhǎng)因子在消化性潰瘍中的研究進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，16(3)：388-390.

8 Lin HY,Zhao Y,Yu JN,et al.Effects of traditional Chinese medicine Wei-Wei-Kang-Granule on the expression of EGFR and NF-κB in chronicatrophic gastritis rats[J].Afr J Tradit Complement Altern Med,2011,9(1):1-7.

9 Fujiyama S,Matsubara H,Nozawa Y,et al.Angiotensin AT(1) and AT(2) receptors differentially regulate angiopoietin-2 and vascular endothelial growth factorexpression and angiogenesis by modulating heparin binding-epidermal growth factor(EGF)-mediated EGF receptor transactivation[J].Circ Res,2001,88(1):22-29.

10 任守忠,何書華，郭建生,等.胃泌素、生長(zhǎng)抑素、表皮生長(zhǎng)因子及炎性細(xì)胞因子與大鼠慢性胃炎相關(guān)性研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，17(2)：165-168.

11 田云霄，張小輝.表皮生長(zhǎng)因子受體及其與胃癌的關(guān)系研究[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志,2012，20(5)：920.

12 Baek MK,Kim MH,Jang HJ,et al.EGF stimulates uPAR expression and cell invasiveness through ERK,AP-1,and NF-kappaB signaling in human gastric carcinoma cells[J].Oncol Rep,2008,20(6):1569-1575.

13 Okumura T,Ericksen RE,Takaishi S,et al.K-ras mutation targeted to gastric tissue progenitor cells results in chronic inflammation,an altered microenvironment,and progression to intraepithelial neoplasia[J].Cancer Res,2010,70(21):8435-8445.

14 Lofgren JL,Whary MT,Ge Z,et al.Lack of commensal flora in Helicobacter pylori-infected INS-GAS mice reduces gastritis and delays intraepithelial neoplasia[J].Gastroenterology,2011,140(1):210-220.

16 Song MY,Su HJ,Zhang L,et al.Genetic polymorphisms of miR-146a and miR-27a,H.pylori infection,and risk of gastric lesions in a Chinese population[J].PLoS One,2013,8(4):e61250.

17 Slomiany BL,Slomiany A.Induction in gastric mucosal prostaglandin and nitric oxide by Helicobacter pylori is dependent on MAPK/ERK-mediated activation of IKK-β and cPLA2:modulatory effect of ghrelin[J].Inflammopharmacology,2013，21(3):241-251.

18 Gyires K,Németh J,Zádori ZS.Gastric mucosal protection and central nervous system[J].Curr Pharm Des,2013,19(1):34-39.