嬰幼兒急性下呼吸道感染呼吸道病毒抗原檢測分析

張碧清 李小梅 邵 英 范楚平

湖南省郴州市第一人民醫(yī)院 423000

急性呼吸道感染是兒童的常見病、多發(fā)病。目前已證明，大部分的呼吸道疾病是由細(xì)菌外的病原體引起，其中以呼吸道病毒最常見。并且隨著病毒的不斷變異，新的高致病性病毒還在不斷地被發(fā)現(xiàn)，給臨床工作造成了極大困難。因此呼吸道病毒感染的快速檢測對(duì)臨床及時(shí)診斷和疫情報(bào)告均有重要意義。本文采用直接免疫熒光法檢測常見的七項(xiàng)呼吸道病毒，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2013年因急性下呼吸道感染入我院就診（包括門診和住院病例）的嬰幼兒中隨機(jī)選取男性及女性患兒各1 000例，年齡1個(gè)月～3歲，臨床疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第7版［1］，即喉部以下呼吸道，包括氣管、支氣管、肺部等的急性感染。

1.2 標(biāo)本采集 于患兒就診當(dāng)日或次日取其鼻咽深部刷檢物。在患兒安靜狀態(tài)下，用植絨拭子從鼻孔插入，到達(dá)鼻咽部來回旋轉(zhuǎn)2～3次后抽出，將拭子放入存有PBS溶液的試管中送檢。

1.3 儀器和試劑 D3Ultra DFA Respiratory Virus Screen ＆ID Kit試劑盒，OLYMPUS CX21熒光顯微鏡。

1.4 標(biāo)本涂片制備 將存有植絨拭子的標(biāo)本在漩渦混勻器上混勻后去掉拭子，用2 500r離心棄上清液，洗滌2次后用少量PBS緩沖液調(diào)成略混濁的懸液，制作玻片，置干燥機(jī)干燥后用預(yù)冷的100%丙酮固定。

1.5 判斷結(jié)果 使用存有單克隆抗體的試劑盒分別檢測：呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、流感病毒A型（IFV－A）、流感病毒B型（IFV－B）、副流感病毒1型（PIV－1）、副流感病毒2型（PIV－2）、副流感病毒3型（PIV－3）。熒光顯微鏡下每視野找到≥2個(gè)綠色熒光細(xì)胞即為陽性，否則為陰性。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 呼吸道病毒七項(xiàng)檢出率 在2 000例送檢標(biāo)本中，檢出陽性549例，總檢出率27.45%（549／2 000），各種病毒陽性率見表1。其中，RSV陽性率最高，為10.15%（203／2 000），占總陽性例數(shù)的36.98%（203／549），其次為PIV－1，陽性率為5.1%（102／2 000），占總陽性例數(shù)的18.58%（102／549）。而PIV－3、ADV、IFV－A、PIV－2、IFV－B陽性率分別為4.7%、3.1%、1.65%、1.45%、0.65%?；旌细腥镜年栃月蕿?.65%。

表1 七項(xiàng)呼吸道病毒感染陽性率的情況

2.2 病毒感染與性別的關(guān)系 在呼吸道病毒七項(xiàng)檢測 的 陽 性 病 例 中，RSV、ADV、IFV－A、IFV－B、PIV－1、PIV－2感染的嬰幼兒中男性與女性感染率的比較，兩者均無顯著差異（P＞0.05）。PIV－3感染的嬰幼兒中男57例（占2.85%），女37例（占1.85%），χ2＝4.465，P＝0.035，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 七項(xiàng)呼吸道病毒感染在性別中的分布情況

3 討論

病原體的分離培養(yǎng)常被作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但由于其培養(yǎng)時(shí)間長、操作繁瑣、技術(shù)難度大、陽性率低等缺點(diǎn)，已逐漸被取代［2］，熒光免疫技術(shù)已發(fā)展了二十多年，是一種快速而準(zhǔn)確的方法，直接免疫熒光法特異性達(dá)86%，敏感性達(dá)95%。且需時(shí)較短，標(biāo)本在送到實(shí)驗(yàn)室2h內(nèi)就可得出結(jié)果，而設(shè)備僅需熒光顯微鏡，在普通實(shí)驗(yàn)室即可開展［3］，本研究中隨機(jī)抽取了采用直接免疫熒光法檢測呼吸道病毒七項(xiàng)的嬰幼兒急性下呼吸道感染者2 000例，陽性率27.45%，所檢測的七種呼吸道病毒中RSV的陽性檢出率最高，共檢測出203例，占陽性病例的36.98%，與錢雄杰、黃凌等的報(bào)道相近［4］。其他病毒的陽性檢出率由高到低依次為PIV－1、PIV－3、ADV、IFV－A、PIV－2、IFV－B。從此病毒譜中可以看出PIV－1與PIV－3也是嬰幼兒急性下呼吸道感染的重要致病原，應(yīng)引起重視。本研究顯示在RSV、ADV、IFV－A、IFV－B、PIV－1、PIV－2感染的下呼吸道嬰幼兒中，男女不同性別感染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而僅PIV－3男57例（占2.85%），女37例（占1.85%），P＜0.05，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明男性嬰幼兒易感。與章愛蓮等報(bào)道有差異［5］，可能與觀察對(duì)象年齡、各地區(qū)病毒流行強(qiáng)度、疾病譜構(gòu)成、病原譜構(gòu)成不同有關(guān)。

綜上所述，因小嬰兒呼吸系統(tǒng)生理及解剖特點(diǎn)、全身器官及免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟，尤其是細(xì)胞免疫功能的不完善等因素［6］，導(dǎo)致其易患呼吸道病毒感染。而其高致死率很大程度上是由于病情救治不及時(shí)和臨床診斷失誤等的原因，了解呼吸道感染病原體的檢測手段和開展快速檢測手段，已成為當(dāng)務(wù)之急［7］，直接免疫熒光法是一種快速、簡便、特異性及敏感性高的診斷呼吸道病毒感染的方法。早期進(jìn)行抗病毒治療還可以減少抗生素使用和縮短患者住院時(shí)間［8］，因此，在急性呼吸道感染患兒中進(jìn)行直接免疫熒光法檢測呼吸道病毒七項(xiàng)具有較大的臨床意義，值得推廣。

［1］ 胡亞美，江載芳.諸福堂實(shí)用兒科學(xué)〔M〕.第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1163－1199.

［2］ 秦茵茵，吳國鋒，秦笙.九項(xiàng)呼吸道聯(lián)檢試劑對(duì)多種呼吸道感染病原體檢測的臨床意義〔J〕.中華生物醫(yī)學(xué)工程雜志，2012，18（2）：124－127.

［3］ 黃蓉，段榮.呼吸道病毒檢測方法進(jìn)展與臨床意義〔J〕.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，27（4）：393－395.

［4］ 黃凌，安邦權(quán)，周燕明，等.直接免疫熒光法對(duì)七種呼吸道病毒檢測的臨床應(yīng)用〔J〕.貴州醫(yī)學(xué)，2009，33（5）：422－423.

［5］ 章愛蓮，吳鳴，張旭，等.住院兒童常見呼吸道病毒檢測結(jié)果〔J〕.浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，25（4）：62－64.

［6］ 丁小芳，張兵，鐘禮立，等.100例重癥社區(qū)獲得性肺炎住院兒童的病毒病原學(xué)分析〔J〕.臨床兒科雜志，2012，30（9）：857－861.

［7］ 徐軍，趙敏，李伯安，等.不明原因呼吸道感染疫情病原學(xué)分析〔J〕.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2010，35（3）：252－255.

［8］ 錢雄杰，沈昊.急性呼吸道感染患兒呼吸道病毒檢測結(jié)果臨床分析〔J〕.吉林醫(yī)學(xué)，2013，34（19）：3808－3809.