黃酮類化合物的含量測(cè)定方法

吳婷妮

安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，安徽合肥 230032

黃酮類化合物是廣泛分布于自然界中的一類化合物，生活中常見的食品茶葉、豆類、蔬菜、蜂蜜等都含有大量的黃酮類化合物。黃酮類化合物具有C6-C3-C6 的基本骨架，是許多植物成分的活性化合物，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用。該文綜述了近年黃酮類化合物分析中主要應(yīng)用的方法，為廣大同行提供一些參考。

1 分光光度法

分光光度法主要適用于總黃酮的測(cè)定，具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確度及精密度較好的特點(diǎn)。目前黃酮類化合物測(cè)定法有直接測(cè)定法和比色法。直接測(cè)定法直接以黃酮類化合物為對(duì)照物測(cè)定樣品中的此成分的含量，比色法是將化合物加入顯色劑后測(cè)定吸光度再進(jìn)行換算測(cè)定，其中常用的顯色劑有Al (NO3)3和AlCl3。直接測(cè)定法和比色法的選擇要綜合考慮，樣品中成分是否會(huì)與顯色劑發(fā)生沉淀反應(yīng)、 樣品成分的復(fù)雜性等都會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，在NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 體系中, 堿性條件經(jīng)常會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性, 只有物質(zhì)中含有鄰二酚羥基, 并且鄰二酚羥基的鄰位沒有取代時(shí), Al(NO3)3比色法才在510 nm 左右有最大吸收[1]。

王東升等[2]、李春紅等[3]采用紫外分光光度法分別測(cè)定了淫羊藿、黃芪中總黃酮的含量。呂凜等[4]比較了直接測(cè)定法和NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 顯色法測(cè)定桔皮中總黃酮含量，結(jié)果表明顯色法檢測(cè)，會(huì)出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象；直接法檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。時(shí)維靜等[5]研究直接測(cè)定法和NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法測(cè)定中藥復(fù)方總黃酮含量，結(jié)果表明NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法測(cè)定中藥復(fù)方總黃酮含量穩(wěn)定可靠，快速準(zhǔn)確。徐靈源等[6]采用AlCl3-HAc-NaAc(pH 5.5)為顯色劑，建立一種青天葵藥材中總黃酮檢測(cè)的方法，并考察14 批青天葵藥材中總黃酮的含量。

2 薄層色譜法（TLC）

薄層色譜法是一種進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法，薄層色譜法主要用于黃酮類化合物的定性和半定量分析，可同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品，跟高效液相色譜法相比，薄層色譜法儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，但由于其影響因素較多，靈敏度和精確度方面不如高效液相色譜法。

陳乃東等[7]采用薄層色譜法檢測(cè)酸水解過的蕨菜黃酮苷元的組成，發(fā)現(xiàn)其主要成分為山奈酚。徐穎等[8]建立一種薄層色譜分離鑒定、定量異黃酮的方法，結(jié)果表明，薄層色譜法具有操作簡(jiǎn)便，取樣量少，檢出靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。劉德勝等[9]采用薄層色譜法定性檢測(cè)了落地生根藥材水解液中的槲皮素和山奈酚，實(shí)驗(yàn)同時(shí)建立了紫外分光光度法測(cè)定水解液的總黃酮含量和高效液相色譜法測(cè)定水解液中槲皮素、山奈酚的含量，這些定性定量方法簡(jiǎn)便、靈敏，可作為落地生根藥材的質(zhì)量控制方法。

3 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法適用于極性大、沸點(diǎn)高、分子量大、熱穩(wěn)定性差的化合物分析，是黃酮類化合物分離檢測(cè)中使用非常廣泛的一種方法，具有效率高、靈敏度高、分離效率高等優(yōu)點(diǎn)。高效液相色譜法采用液體為流動(dòng)相，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。黃酮類化合物的分離中常用的色譜柱是C18 柱，對(duì)復(fù)雜化合物的分析經(jīng)常采用梯度洗脫系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)高效率的分離，紫外檢測(cè)器、 二極管陣列檢測(cè)器是黃酮類化合物分析中最常用的檢測(cè)器，具有靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫的特點(diǎn)。

Yang 等[10]采用C18 柱、梯度洗脫系統(tǒng)同時(shí)分離16 個(gè)酚類化合物，并將建立的分析方法成功應(yīng)用于35 批魚腥草樣品。張群林等[11]采用ODS 色譜柱，高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法同時(shí)測(cè)定了羅布麻葉中的6 種黃酮類化合物的含量。章弘揚(yáng)等[12]采用高效液相色譜-質(zhì)譜法 鑒定了山楂中的綠原酸、原花青素B2、表兒茶素、金絲桃苷、異槲皮苷，采用反相色譜-二極管陣列檢測(cè)法同時(shí)定量測(cè)定了其含量。楊必成等[13]采用C18 色譜柱高效液相色譜-紫外分光光度法測(cè)定了油菜花粉的滲濾液中的槲皮素、山奈酚、異鼠李素的含量，為油菜花粉原料及其提取物的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供了理論和數(shù)據(jù)支持。

4 毛細(xì)管電泳法（CE）

毛細(xì)管電泳是以毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的微分離分析技術(shù)，有多種分離模式，毛細(xì)管區(qū)帶電泳，膠束毛細(xì)管電泳，毛細(xì)管等速電泳，毛細(xì)管凝膠電泳等。黃酮類化合物分離中經(jīng)常應(yīng)用毛細(xì)管區(qū)帶電泳和膠束毛細(xì)管電泳。分離中常用的緩沖溶液是硼砂，常用的緩沖體系有硼砂-氫氧化鈉，硼砂-磷酸二氫鈉，硼砂-硼酸體系，少量報(bào)道也采用過中性磷酸鹽的體系。在堿性條件下，黃酮類化合物中的順式二羥基與硼酸形成帶負(fù)電荷的硼酸類配合物，在電場(chǎng)作用下發(fā)生移動(dòng)。

海平等[14]采用0.25 mol/L 硼砂30%乙腈緩沖溶液分離了三種黃酮，用建立的方法比較了不同產(chǎn)地多葉棘豆中的此類化合物的含量。吳婷妮等[15]對(duì)電泳緩沖液的pH、濃度等條件進(jìn)行優(yōu)化，建立測(cè)定野菊花中的9 種黃酮類化合物的方法。Shi 等[16]采用膠束毛細(xì)管電泳法測(cè)定了枳殼槐花中染料木苷、 染料木素、 山奈酚、槲皮素和蘆丁的含量。葉靜等[17]采用膠束毛細(xì)管電泳法測(cè)定豆粕及發(fā)酵豆粕中大豆異黃酮含量,緩沖液是15 mmol/L 十二烷基硫酸鈉、5%甲醇的10 mmol/L 硼砂溶液( pH 9.4)。周逸芝等[18]采用膠束毛細(xì)管電泳測(cè)定龍柴方及其組方藥材黃芩中4 種黃酮的含量，緩沖液是40 mmol/L 磷酸氫二鈉-15 mmol/L 硼砂-40 mmol/L十二烷基硫酸鈉-15%乙腈-7.5%丙醇(pH 8.6)。

毛細(xì)管電泳法和高效液相色譜法均適用于單體黃酮類成分的分析，與高效液相色譜法相比，毛細(xì)管電泳法具有樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單、分析更快速的優(yōu)點(diǎn)，但在分析的準(zhǔn)確度和靈敏度方便較高效液相色譜法稍差，也是目前黃酮類化合物分析中應(yīng)用非常廣泛的一種方法。

5 其他方法

陳墨等[19]采用差分脈沖伏安法同時(shí)測(cè)定а-山竹黃酮和γ-山竹黃酮，研究了pH 和靜置時(shí)間等因素對(duì)黃酮分離的影響。鄒節(jié)明等[20]研究了舒血寧片中總黃酮的共振散射光譜分析方法，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便靈敏。孫仕萍等[21]采用單掃示波極譜法測(cè)定了保健食品中總黃酮的含量。黃倩倩等[22]采用近紅外漫反射光譜法測(cè)定黃芩中總黃酮及黃芩苷的含量，胡鋼亮等[23]采用近紅外漫反射光譜法直接測(cè)定銀杏葉提取物粉末中總黃酮的含量。

6 結(jié)語

黃酮類化合物是藥理活性非常廣泛的一類化合物，人體的黃酮類化合物均從食物獲得，研究食物和人體液中黃酮類化合物的含量測(cè)定方法非常重要，如何快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的測(cè)定黃酮類化合物的含量成為分析工作者的重要任務(wù)。鑒于目前的發(fā)展現(xiàn)狀，改善儀器的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性方面值得更進(jìn)一步的研究。

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