HPLC測定防風通圣丸中麻黃堿含量的方法

晉 毅，閻愛榮

(山西省人民醫(yī)院，山西 太原 030012)

防風通圣丸出自《宣明論方》，是金代名醫(yī)劉完素著名的代表方之一。古人云“有病無病，防風通圣”，說明了防風通圣丸用途之廣，集防與治于一體［1］。防風通圣丸具有清熱解毒、解表通里的作用，傳統(tǒng)用于治療頭痛、發(fā)熱怕冷、咽喉疼痛、小便短赤等癥。其含有麻黃、防風、連翹等十七味藥。許多含麻黃的中成藥常以麻黃堿作為定性及定量指標，用于評價中成藥、中藥材質(zhì)量、制劑工藝及穩(wěn)定性的優(yōu)劣，便于制訂藥品的質(zhì)量控制標準［2］。多數(shù)學者認為應用麻黃堿不安全，特別是麻黃堿用于非處方藥時可能引起嚴重不良反應;另外，麻黃堿及其制劑具有藥品和易制毒品的雙重屬性，除受到藥品管理法規(guī)的約束外，還受到專項監(jiān)管法規(guī)、藥品類易制毒化學品和含興奮劑藥品等相關法規(guī)和文件的制約。

鑒于含麻黃堿藥物的特殊性，為了體現(xiàn)藥品質(zhì)控指標的專屬性，提高檢查結果的正確性和可靠性，建立一種準確、快速、高靈敏的檢測中藥中麻黃堿含量的方法勢在必行，以便有效地控制中藥中麻黃堿的含量。本研究采用高效液相色譜(HPLC)法，建立了防風通圣丸中麻黃堿的含量測定方法。

1 實驗材料

waters公司510-717-2996高效液相色譜儀;empower液相色譜工作站2996檢測器;色譜柱:Aichrom-Bond-AQ C18(150 mm ×4．6 mm，5 μm);乙腈:色譜純(天津彪仕奇科技發(fā)展有限公司);水:高純水;其余試劑均為分析純;對照品:鹽酸麻黃堿(批號為171241-200404，含量測定用)，由中國藥品生物制品檢定所提供;供試品:防風通圣丸，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠(批號:9081746)。

2 方法

2．1 色譜分析條件

色譜柱:AichromBond-AQ C18(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈 － 水 － 磷酸 － 三乙胺 (3∶97∶0．1∶0．1);檢 測 波 長:205 nm;柱 溫:35℃;流 速:0．80 mL·min－1;理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算，應不低于5000。在此條件下，鹽酸麻黃堿與其他組分均能達到基線分離。

2．2 對照品溶液的制備

取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含8 μg的溶液，即得。

2．3 供試品溶液的制備

取本品粉碎，取1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入酸性甲醇(磷酸1 mL→100 mL)25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(220 kw，44 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用酸性甲醇(磷酸1 mL→100 mL)補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2．4 檢測波長的選擇

取鹽酸麻黃堿對照品，在200～400 nm范圍內(nèi)掃描，結果在205 nm處有最大吸收，故選擇205 nm作為檢測波長。

2．5 實驗條件的選擇

2．5．1 提取溶劑和提取條件的選擇 取本品粉末1 g，分別加入甲醇、酸性甲醇(磷酸1 mL→100 mL)各25 mL，超聲提取30 min，分別制備供試液。另取本品粉末2 g，加入濃氨試液5 mL，乙醚適量，索氏提取至提取液無色，將提取液移至蒸發(fā)皿中，揮干乙醚，加磷酸5 mL酸化后，加甲醇洗置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，作為供試液。照上述色譜條件測定，結果表明，堿性乙醚索氏提取與酸性甲醇超聲提取含量無明顯差異，故選用酸性甲醇超聲提取的方法。見表1。

表1 提取溶劑的選擇Table 1 The Selection of Extraction Solvent

2．5．2 超聲時間的選擇 取本品粉末1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入酸性甲醇(磷酸1 mL→100 mL)25 mL，密塞，稱定重量，分別超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)10、30、60 min，取出，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0．45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試液。照上述色譜條件測定，結果表明:超聲提取30 min后鹽酸麻黃堿已基本提取完全，故選擇超聲時間為30 min。見表2。

表2 超聲時間影響Table 2 The Influence of Ultrasonic Time

2．5．3 溶劑量的選擇 取本品粉末1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入酸性甲醇(磷酸1 mL→100 mL)10、25、50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，取出，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0．45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試液。照上述色譜條件測定，結果表明:溶劑量為25 mL時，鹽酸麻黃堿已基本提取完全，故選擇樣品量為1 g，溶劑量為25 mL。見表3。

表3 溶劑量的選擇Table 3 The Selection of Solvent Quantity

2．6 線性關系考察

精密吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液(0．016 256 mg/mL)1、3、5、7、9、15 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，鹽酸麻黃堿進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程:y=3 204 469．77x+7 050．91，r=0．999 9。結果表明鹽酸麻黃堿在0．016～0．244 μg范圍內(nèi)具良好的線性關系。見表4。

表4 線性關系考察Table 4 Results of Linear Relationship

2．7 空白試驗

按處方中藥味比例，自配不含鹽酸麻黃堿的群藥，按其制法制成空白制劑，照供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液，依法測定，結果陰性對照溶液在與鹽酸麻黃堿對照品相同保留時間處未顯色譜峰，故認為無干擾。見圖1。

圖1 對照品(a)、樣品(b)、陰性樣品(c)的HPLC色譜圖Fig1． HPLC Chromatograms of Reference Substances(a)，Sample(b)and Negative Sample(c)

2．8 樣品穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于配制后0、2、4、8、16、24 h，依法測定。結果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。結果見表5。

表5 穩(wěn)定性考察Table 5 Results of Stability Test

2．9 重復性試驗

精密稱定防風通圣丸(批號:9081746)1 g，平行6份，按上述色譜條件進行測定，求得相對標準偏差分別為1．47%。結果表明，本方法重現(xiàn)性良好，見表6。

表6 重復性試驗結果(n=6)Table 6 Results of Repeatability Tests(n=6)

2．10 回收率試驗

采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同一批號(含量0．186 mg/g)樣品0．5 g，平行制樣 6 份，分別精密加入鹽酸麻黃堿對照品0．097 5 mg，依法測定，按下式計算回收率，結果表明本法具有 良 好的回收率，見表7。

表7 鹽酸麻黃堿加樣回收率Table 7 Revovery Rates of Ephedrine Hydrochloride

3 結果

取防風通圣丸樣品，按照上述方法測定樣品含量，以下列公式計算鹽酸麻黃堿含量，結果見表8。

Cs:對照品溶液的濃度(mg/mL);

Vs:對照品溶液的進樣體積(μL);

Ai:樣品中被測物的峰面積;

As:對照品的峰面積;

Vi:樣品的進樣體積;

Wi:樣品的稱樣量(g)。

表8 樣品測定結果Table 8 The Results of Sample Determination

4 討論

中藥具有良好的實踐經(jīng)驗，但同時也缺乏明確的、可操作性強的質(zhì)量標準與控制方法。提高中藥質(zhì)量控制標準，形成現(xiàn)代化的質(zhì)量控制方法體系勢在必行。本研究對比了不同的提取方法對麻黃堿提取效率的影響，采用HPLC法測定防風通圣丸中麻黃堿的含量。結果表明采用酸水－超聲波方法提取麻黃堿，操作便捷，數(shù)據(jù)穩(wěn)定，提取效率高，可以作為其質(zhì)量控制的分析方法。同時，也為麻黃藥材及其他含麻黃堿的中藥材的進一步研究提供了可參考的測定方法。

［1］ 藏海洋．防風通圣丸臨床妙用［J］．家庭中醫(yī)藥，2010，17(1):51．

［2］ 何 群，周朝輝，劉學瓊，等．含麻黃中成藥及生物體液中麻黃堿定量方法研究概況［J］．中成藥，1999，21(2):90-91．