石河子地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)主要疫病血清流行病學(xué)調(diào)查

楊 莉，歐 都，龔子桓，齊亞銀

（石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 傳染病實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832000)

隨著養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)性發(fā)展，養(yǎng)殖方式也由傳統(tǒng)的散養(yǎng)逐步轉(zhuǎn)變?yōu)橐?guī)模化集約化的養(yǎng)殖方式。但由于規(guī)模化養(yǎng)殖的飼養(yǎng)密度較高，豬群活動(dòng)量少而導(dǎo)致抗病力下降。在規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的疾病防治當(dāng)中傳染病的防治顯得尤為重要，傳染病不僅會(huì)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，又有著波及范圍廣、撲滅困難、診斷與治療復(fù)雜、 隱性帶毒、易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)[1]。同時(shí)新的病毒感染性疫病日漸增多，一些傳染病的免疫失敗時(shí)有發(fā)生，引起獸醫(yī)工作者極大的關(guān)注。豬藍(lán)耳病、豬瘟以及豬O型口蹄疫是目前對(duì)中國養(yǎng)豬業(yè)危害最大的3種重要傳染病。而通過抗體水平監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，了解豬場(chǎng)免疫抗體和感染抗體水平，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)群體免疫狀況，可為豬場(chǎng)制定更為科學(xué)合理的免疫程序提供依據(jù)，減少養(yǎng)殖戶的損失。

1 材料和試劑

1.1 血清樣品

來自A、B、C、D 4個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)豬只的620份血清均做了豬瘟檢測(cè)；對(duì)其中587份血清又做了豬藍(lán)耳病檢測(cè)；對(duì)620份血清中344份做了口蹄疫檢測(cè)。無菌采集豬前腔靜脈血液樣品3～5 mL，室溫靜置3～6 h待析出血清，取上清置于滅菌的離心管內(nèi)，逐份進(jìn)行編號(hào)，置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要器材與儀器設(shè)備

采血器、微量移液器、1次性微量移液器使用的吸頭、蒸餾水或去離子水、溫箱、TGL-16G高速臺(tái)式離心機(jī)、DNM-9602型酶標(biāo)分析儀。

1.3 試劑

ELISA試劑：豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒；豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒；豬O型口蹄疫ELISA抗體檢測(cè)試劑盒均由武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司提供。

ELISA試劑盒包括：96孔抗原包被板（2塊）、血清稀釋板（2塊）、20倍濃縮洗滌液（30 mL）、樣品稀釋液（50 mL）、陽性對(duì)照血清（1 mL）、陰性對(duì)照血清（1 mL）、羊抗豬酶標(biāo)二抗（20 mL）、底物液A（10 mL）、底物液B（10 mL）、終止液（10 mL）、說明書 1 份。

2 方法與結(jié)果判定

2.1 操作步驟

2.1.1 加樣 取抗原包被板，將稀釋好的樣品血清和對(duì)照血清分別按照100μL對(duì)應(yīng)從稀釋板轉(zhuǎn)入抗原包被板中，待檢樣品每份加一個(gè)孔，對(duì)照樣品每份加2個(gè)孔，在振蕩器上微微振勻孔中的樣品，然后置37 ℃溫育30 min。

2.1.2 洗板 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置3 min倒掉，再在吸水紙上拍干，共計(jì)洗滌5次。

2.1.3 加酶 每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100 μL，置37 ℃再溫育30 min。

2.1.4 洗滌 做法同2.1.2。

2.1.5 顯色 每個(gè)孔分別加入底物A和B（50μL）混勻，室溫避光顯色10 min。

2.1.6 終止反應(yīng) 加終止液50μL利用酶標(biāo)儀檢測(cè)。

2.2 判斷標(biāo)準(zhǔn)

豬瘟：樣品OD630nm值＞0.35，判為抗體陽性；樣品OD630nm值＜0.35，判為抗體陰性。

豬藍(lán)耳病：樣品KQ≥20，判為藍(lán)耳病抗體陽性，若KQ＜20，判為藍(lán)耳病抗體陰性。

豬口蹄疫病毒：樣品OD630nm值＞0.4，判為抗體陽性，樣品OD630nm值≤0.4，判為抗體陰性。

3 結(jié)果與分析

3.1 豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)結(jié)果與分析

4個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)共送檢620份血清樣品中有587份血清檢測(cè)了豬藍(lán)耳病毒抗體水平，總陽性率為88.42%（詳見表1）。不同年齡豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)結(jié)果存在差異（詳見表2）。

3.2 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果與分析

4個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)共送檢620份血清檢測(cè)豬瘟抗體水平，總陽性率為81.77%（詳見表3）。不同年齡豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果不同（詳見表4）。

3.3 豬O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果與分析

對(duì)石河子地區(qū)共4個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)送檢的344份血清樣品進(jìn)行豬O型口蹄疫抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，4個(gè)豬場(chǎng)抗體陽性率從84%～93%不等（詳見表5）。不同年齡段的豬只血清抗體陽性率在81%～100%之間（詳見表6）。

4 討論

疫苗接種被規(guī)模化豬場(chǎng)作為防控傳染病的主要方式，是通過免疫使易感豬變?yōu)閷?duì)傳染病具有抵抗力的非易感豬。只有在接種疫苗后機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫應(yīng)答后才會(huì)起到預(yù)防傳染病的作用，而免疫應(yīng)答是一種復(fù)雜的生物學(xué)過程，易受多種因素的影響。因此想要達(dá)到理想的免疫效果，需要監(jiān)測(cè)豬群抗體水平的消長，掌握豬群免疫狀態(tài)，判斷動(dòng)物對(duì)某傳染病的抵抗力或某疫苗的免疫效果至關(guān)重要[2]，抗體水平的高低可直接反映出免疫效果以及未免疫的豬群是否存在野毒感染。

豬藍(lán)耳病是由一種動(dòng)脈炎病毒引發(fā)豬呼吸道疾病和繁殖障礙的傳染病[3]。我國于1995年首次在北京郊區(qū)豬群發(fā)現(xiàn)有該病的流行[4]，近年來該病傳播范圍日漸廣泛，成為危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一。從抗體檢測(cè)結(jié)果中不難看出，按照抗體陽性率大于75%為豬群免疫合格，石河子地區(qū)A豬場(chǎng)的豬藍(lán)耳病的免疫效果差，防疫體系脆弱，極易受藍(lán)耳病病毒強(qiáng)度攻擊，從而暴發(fā)藍(lán)耳病。因豬藍(lán)耳病是以病豬和帶毒豬為主要傳染源，傳播途徑以胎盤、精液等垂直傳播和水平傳播。而母豬的抗體陽性率較低，導(dǎo)致其哺乳仔豬的血清抗體陽性率也相對(duì)較低，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)藍(lán)耳病的積極預(yù)防。因此建議在哺乳母豬的生產(chǎn)周期再加一次藍(lán)耳病疫苗的免疫，實(shí)行全進(jìn)全出制，嚴(yán)格隔離、檢疫、消毒工作，逐步淘汰陽性豬。

表1 4個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)送檢血清的豬藍(lán)耳病毒抗體陽性率

表2 不同年齡豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 4個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)送檢血清的豬瘟抗體陽性率

表4 不同年齡豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

表5 4個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)送檢血清的豬O型口蹄疫抗體陽性率

表6 不同年齡豬口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果

我國豬瘟的流行現(xiàn)狀是長期持續(xù)存在并呈多點(diǎn)散發(fā)，臨床上呈現(xiàn)了典型豬瘟的病豬數(shù)量減少，而非典型豬瘟病例增多以及免疫失敗現(xiàn)象，其主要特征是持續(xù)感染及隱性感染和免疫耐受，豬死亡率下降，嚴(yán)重地影響了我國豬瘟的防控效果[5]。而通過對(duì)豬瘟血清抗體檢測(cè)結(jié)果說明豬場(chǎng)的抗體陽性率參差不齊，A豬場(chǎng)的疫苗免疫效價(jià)較低，容易導(dǎo)致豬群處于易感狀態(tài)不足以抵抗強(qiáng)毒侵襲而發(fā)病或成為隱性帶毒者，威脅易感豬群。同時(shí)不同年齡段的豬群豬瘟血清抗體水平差異較大，公豬的抗體陽性率最高，育肥豬的血清抗體陽性率最低，引起這一現(xiàn)象的原因可能是由于公豬的抗體水平的高低直接影響到母豬的配種，進(jìn)而影響仔豬的生長發(fā)育及其對(duì)病原的抵抗力，因此豬場(chǎng)對(duì)公豬尤為關(guān)注。而育肥豬的飼養(yǎng)時(shí)間較短且重復(fù)利用率低，因此養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)其不夠重視。

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄動(dòng)物共患的急性、熱性、接觸性傳染病[6]，由于其血清型多，傳播迅速且傳播途徑廣，國際獸疫局(OIE)一直將本病列為發(fā)病必須報(bào)告的A類動(dòng)物疫病名單之首。ELISA試驗(yàn)結(jié)果顯示各豬場(chǎng)的抗體陽性率均較高，說明石河子地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)的口蹄疫免疫效果較好；保育豬的抗體陽性率較低，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行免疫補(bǔ)充。

從4個(gè)豬場(chǎng)的3種傳染病的檢測(cè)結(jié)果來看，A豬場(chǎng)整體的免疫效果不理想，而B豬場(chǎng)3種傳染病的抗體陽性率均達(dá)到90%以上，可能原因是由于A豬場(chǎng)的免疫程序不科學(xué)、免疫時(shí)機(jī)不適宜，不能產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答而導(dǎo)致的免疫失敗。建議A豬場(chǎng)調(diào)整免疫程序同時(shí)加強(qiáng)豬場(chǎng)的隔離消毒，減少環(huán)境中的病毒及加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。3種傳染病中豬瘟的抗體陽性率最低，口蹄疫的血清抗體陽性率最高，說明石河子地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)豬瘟的預(yù)防接種，防止豬瘟的暴發(fā)。

[1] 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M]. 第5 版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.

[2] 楊漢春.動(dòng)物免疫學(xué)[M].第2版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2003：255-258.

[3] 吳清明.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2001.

[4] 郭寶清,陳章水,劉文興,等.從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J].中國畜禽傳染病,1996,18(2)：1-41．

[5] 李智麗,馬靜云,曾喜多,等.高致病性豬藍(lán)耳病綜合防控體會(huì)[J].中國動(dòng)物保健, 2011(11): 44-47.

[6] 蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2001：149-156.