基質(zhì)金屬蛋白酶1及其抑制劑在白藜蘆醇治療佐劑性關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)

安 梅，孫和炎，盧錦森，馬中飛，縱何香，葉桂萍，郭利梅，何舒寧，陳曉宇

◇基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究◇

基質(zhì)金屬蛋白酶1及其抑制劑在白藜蘆醇治療佐劑性關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)

安 梅1，2，孫和炎3，盧錦森4，馬中飛4，縱何香4，葉桂萍4，郭利梅4，何舒寧4，陳曉宇1

目的觀察基質(zhì)金屬蛋白酶1（MMP-1）及其抑制劑（TIMP-1）在白藜蘆醇治療佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）的滑膜組織和關(guān)節(jié)軟骨中的表達(dá)，探討MMP-1及TIMP-1的異常表達(dá)是否參與AA的發(fā)病機(jī)制。方法60只SD大鼠隨機(jī)分為2組：正常組（10只），模型組（50只）。模型組弗氏完全佐劑注射誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎12 d后，在其足趾出現(xiàn)繼發(fā)性免疫炎癥反應(yīng)時(shí)，又隨機(jī)分成4組：模型對(duì)照組、白藜蘆醇低劑量組（5 mg／kg）、白藜蘆醇高劑量組（15 mg／kg）、陽(yáng)性對(duì)照雷公藤多苷組（100 mg／kg）。大鼠每天均灌胃給予溶媒或藥物，持續(xù)16 d后處死大鼠；免疫組化法檢測(cè)滑膜組織MMP-1、TIMP-1表達(dá)；滑膜組織勻漿，Western blot法檢測(cè)MMP-1、TIMP-1蛋白含量。結(jié)果白藜蘆醇能明顯抑制模型組大鼠病理?yè)p害程度，模型組滑膜組織MMP-1、TIMP-1高表達(dá)，白藜蘆醇治療組能抑制MMP-1、TIMP-1的高表達(dá)，在抗關(guān)節(jié)炎的作用上有相關(guān)性。結(jié)論白藜蘆醇具有抑制AA大鼠的炎癥作用，防止關(guān)節(jié)退變的病理變化，其機(jī)制與調(diào)節(jié)大鼠的基質(zhì)金屬蛋白酶在滑膜組織和關(guān)節(jié)軟骨的表達(dá)有關(guān)。

佐劑性關(guān)節(jié)炎；白藜蘆醇；基質(zhì)金屬蛋白酶1；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1；免疫印跡；大鼠

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥和關(guān)節(jié)破壞為特征的慢性自身免疫性疾病，其病理特點(diǎn)表現(xiàn)為滑膜細(xì)胞類腫瘤樣增生，引起軟骨及骨的破壞?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）是一族降解幾乎所有細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）為主要功能的酶，若MMPs分泌過(guò)量，或與MMPs抑制劑（tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMPs）比例失衡，將導(dǎo)致滑膜組織和軟骨的ECM過(guò)量降解，在RA的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用［1］。白藜蘆醇是一種天然活性多酚化合物，主要存在于虎杖、葡萄等植物中，白藜蘆醇口服在腸道以葡萄糖醛酸酯形式吸收，其吸收和消除均較快。白藜蘆醇具有抗增殖及調(diào)節(jié)免疫等多重功效，為RA等疾病的治療提供了新的思路，其可能在抗風(fēng)濕的同時(shí)減少免疫抑制劑的使用，降低RA復(fù)發(fā)，改善患者預(yù)后［2］。筆者應(yīng)用免疫組織化學(xué)法、Western blot法檢測(cè)佐劑性關(guān)節(jié)炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠滑膜組織MMP-1、TIMP-1的表達(dá)，以探討其與AA大鼠軟骨和骨的退變之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥

健康雄性SD大鼠，清潔級(jí)，體重160～180 g，購(gòu)自安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。大鼠自由攝食飲水，室溫（25±2）℃，適應(yīng)環(huán)境1周后隨機(jī)分為2組：正常組（10只）、模型組（50只）。模型組以弗氏完全佐劑（freund＇s complete adjuvant，F(xiàn)CA）（卡介苗80℃、1 h滅活后與高壓消毒的液體石蠟充分碾磨混勻，配成10 mg／ml的乳劑）于每鼠右后足趾皮內(nèi)注射0.1 ml致炎。于致炎第12天，模型組大鼠隨機(jī)均分為4組：模型對(duì)照組，白藜蘆醇低、高劑量（5、15 mg／kg）組和陽(yáng)性藥雷公藤多苷（100 mg／kg）對(duì)照組，每周稱體重1次，根據(jù)體重適時(shí)調(diào)整用藥劑量，連續(xù)灌胃（10 ml／kg）給藥16 d，正常組及模型組給予等劑量溶媒的0.5%（m／V）羧甲基纖維素鈉。

1.2 主要儀器與試劑

足跖容積測(cè)量?jī)xYLS-TA購(gòu)自山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院；全自動(dòng)高速冷凍離心機(jī)GL20A購(gòu)自湖南儀器儀表總廠；白藜蘆醇購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，純度＞98%，溶于無(wú)菌0.5%羧甲基纖維素鈉中；兔抗大鼠MMP-1、TIMP-1一抗均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；生物素化山羊抗兔IgG二抗購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；BCA試劑盒、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒購(gòu)自美國(guó)Amersham Life Sciences公司。

1.3 關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)評(píng)分參照課題組先前建立的方法［3］，在AA大鼠致炎后第12天，每4 d進(jìn)行一次關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分，記錄各組大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎病變的發(fā)生和嚴(yán)重程度。每只足爪按以下標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分：0分，正常；1分，踝關(guān)節(jié)紅斑和輕微腫脹；2分，踝關(guān)節(jié)至跖關(guān)節(jié)或掌關(guān)節(jié)紅斑和輕微腫脹；3分，踝關(guān)節(jié)至跖趾關(guān)節(jié)或掌關(guān)節(jié)紅斑和中度腫脹；4分，踝關(guān)節(jié)到趾關(guān)節(jié)紅斑和重度腫脹，最高評(píng)分12分。用排水法測(cè)定大鼠左踝關(guān)節(jié)（非致炎側(cè)）以下的容積變化（Δml），以致炎后－致炎前的差值表示其腫脹度，觀察各組大鼠繼發(fā)性炎癥腫脹情況。第28天麻醉下處死各組大鼠，每組4只進(jìn)行石蠟包埋形態(tài)學(xué)檢查，另6只迅速取踝關(guān)節(jié)滑膜組織，液氮凍存，檢測(cè)MMP-1和TIMP-1蛋白表達(dá)。

1.4 踝關(guān)節(jié)免疫組化SP染色和軟骨細(xì)胞MMP-1和TIMP-1陽(yáng)性細(xì)胞分?jǐn)?shù)計(jì)數(shù)按照SP試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，大鼠踝關(guān)節(jié)以4%多聚甲醛固定，脫鈣，脫水，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片，采用SP法進(jìn)行免疫組化染色：3%過(guò)氧化氫滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，微波行抗原修復(fù)，5%羊血清封閉20 min，分別滴加兔抗大鼠MMP-1和TIMP-1單克隆抗體（濃度1∶200），4℃孵育過(guò)夜，滴加生物素化羊抗兔IgG二抗，37℃孵育20 min，DAB顯色、蘇木精復(fù)染、脫水、透明、封片，光鏡下觀察。每項(xiàng)檢測(cè)均設(shè)陰性對(duì)照，以PBS代替一抗。光鏡下組織切片呈棕黃色顆粒性沉積區(qū)域?yàn)殛?yáng)性染色部位。參照文獻(xiàn)［4］計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞細(xì)胞分?jǐn)?shù)，每張MMP-1、TIMP-1免疫組化切片隨機(jī)選取9個(gè)視野，其中軟骨表層、中層和下層各3個(gè)視野，在400倍光鏡下，計(jì)算每個(gè)視野的MMP-1、TIMP-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，用細(xì)胞分?jǐn)?shù)（%）＝陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／細(xì)胞總數(shù)×100%表示，最大值為100%。由兩位獨(dú)立的觀察者分別對(duì)每張切片進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，評(píng)分誤差率控制在5%以內(nèi)，取兩者均值計(jì)分。

1.5 Western blot法檢測(cè)MMP-1和TIMP-1蛋白表達(dá)將液氮中凍存的各組滑膜組織分別取樣，按BCA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，測(cè)定總蛋白含量后分裝，置－80℃冰箱備用。各組蛋白分別取50 μg，煮沸變性，進(jìn)行SDS-PAGE分離，將蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移法至硝酸纖維素膜。硝酸纖維素膜在10%脫脂奶粉的PBST緩沖液中4℃封閉過(guò)夜，分別加兔抗鼠MMP-1（1∶1 500）和TIMP-1（1∶1 500）和兔抗鼠β-actin抗體（1∶1 000），37℃孵育2 h，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG（1∶1 000），37℃孵育2 h，ECL試劑盒化學(xué)熒光法顯色，利用Image J灰度分析軟件Western blot結(jié)果作半定量分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 白藜蘆醇對(duì)大鼠繼發(fā)炎癥的影響

致炎后模型組大鼠右足（注射測(cè)）開(kāi)始腫脹，出現(xiàn)繼發(fā)性炎癥病變（對(duì)側(cè)）出現(xiàn)于致炎后的第12天左右，表現(xiàn)為左側(cè)和前足腫脹，呈進(jìn)行性加重，行動(dòng)不便，站立不穩(wěn)。模型組大鼠左足較相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的正常組足爪關(guān)節(jié)明顯腫脹，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；白藜蘆醇治療組和雷公藤多苷組降低了AA大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)，白藜蘆醇大劑量治療組較小劑量組更為明顯，見(jiàn)表1。

2.2 白藜蘆醇對(duì)AA大鼠繼發(fā)性足腫脹的影響

表1 白藜蘆醇對(duì)AA大鼠繼發(fā)炎癥的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分的影響（n＝10，±s）

表1 白藜蘆醇對(duì)AA大鼠繼發(fā)炎癥的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分的影響（n＝10，±s）

與正常組比較：ΔΔP＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

組別多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)第12天第16天第20天第24天第28天正常0.58±0.820.79±1.060.91±1.120.97±1.220.96±1.42模型5.8±2.2ΔΔ6.9±2.6ΔΔ8.3±2.8ΔΔ9.2±2.7ΔΔ7.52±2.27ΔΔ白藜蘆醇（5 mg／kg）5.7±1.65.9±2.26.2±2.3*6.9±2.7*4.9±1.7**白藜蘆醇（15 mg／kg）5.3±1.85.7±1.95.5±1.8**5.4±1.9**3.7±1.4**雷公藤多苷（100 mg／kg）5.6±1.75.8±2.25.4±1.9**4.9±1.8**3.9±1.5**

通過(guò)足趾排水法測(cè)定大鼠非致炎側(cè)足趾踝關(guān)節(jié)容積變化（Δml），以致炎后－致炎前的差值表示其腫脹度，自致炎第12天起，連續(xù)灌胃給藥16 d，并在不同時(shí)間測(cè)定AA大鼠非致炎側(cè)足爪容積，觀察白藜蘆醇對(duì)AA大鼠繼發(fā)性足腫脹的影響。見(jiàn)表2。與AA模型組比較，白藜蘆醇自用藥8 d后開(kāi)始發(fā)揮療效，白藜蘆醇（5、15 mg／kg）和陽(yáng)性藥雷公藤多苷可明顯抑制AA大鼠的繼發(fā)性足腫脹，以15 mg／kg白藜蘆醇組作用更為顯著。

表2 白藜蘆醇對(duì)AA大鼠繼發(fā)性足腫脹病變的影響（n＝10，±s）

表2 白藜蘆醇對(duì)AA大鼠繼發(fā)性足腫脹病變的影響（n＝10，±s）

與正常組比較：ΔΔP＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

組別足腫脹度（Δml）第12天第16天第20天第24天第28天正常0.09±0.080.12±0.050.15±0.050.22±0.080.24±0.07模型0.47±0.17ΔΔ0.55±0.17ΔΔ0.73±0.27ΔΔ0.91±0.31ΔΔ0.74±0.26ΔΔ白藜蘆醇（5 mg／kg）0.41±0.160.48±0.130.56±0.18*0.73±0.24*0.57±0.18*白藜蘆醇（15 mg／kg）0.42±0.170.47±0.210.53±0.17*0.62±0.25**0.41±0.20**雷公藤多苷（100 mg／kg）0.39±0.160.45±0.180.47±0.14**0.58±0.21**0.47±0.21**

2.3 免疫組織化學(xué)法觀察白藜蘆醇對(duì)AA大鼠踝關(guān)節(jié)的MMP-1、TIMP-1蛋白表達(dá)和軟骨細(xì)胞分?jǐn)?shù)的影響MMP-1、TIMP-1蛋白陽(yáng)性反應(yīng)為黃色或棕黃色顆粒，主要定位于滑膜組織及軟骨的胞核和胞質(zhì)中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在AA大鼠滑膜襯里層細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)MMP-1、TIMP-1亞基呈高表達(dá)狀態(tài)；而不同濃度的白藜蘆醇明顯降低了MMP-1、TIMP-1在滑膜組織及軟骨組織中的表達(dá)，且隨著白藜蘆醇治療濃度的增加，MMP-1、TIMP-1蛋白陽(yáng)性反應(yīng)逐漸減弱，見(jiàn)圖1，提示白藜蘆醇可能通過(guò)影響MMP-1、TIMP-1的活性而改善AA模型大鼠的基質(zhì)的失衡狀態(tài)。每張MMP-1、TIMP-1免疫組化切片隨機(jī)選取9個(gè)視野，計(jì)算MMP-1、TIMP-1陽(yáng)性細(xì)胞分?jǐn)?shù)，AA模型大鼠軟骨細(xì)胞MMP-1、TIMP-1陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯高于正常組，而雷公藤多苷和不同濃度的白藜蘆醇明顯降低了AA大鼠MMP-1、TIMP-1的軟骨細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)，且隨著白藜蘆醇治療濃度的增加，MMP-1、TIMP-1軟骨細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)越小，提示白藜蘆醇能改善AA模型大鼠的軟骨細(xì)胞的失衡功能狀態(tài)，見(jiàn)表3。

2.4 白藜蘆醇對(duì)關(guān)節(jié)滑膜組織中MMP-1、TIMP-1蛋白表達(dá)的影響與正常組比較，模型組關(guān)節(jié)滑膜組織中MMP-1、TIMP-1的表達(dá)明顯上調(diào)，而白藜蘆醇各劑量組滑膜組織中MMP-1、TIMP-1蛋白表達(dá)水平遠(yuǎn)低于模型組，但仍高于正常組。與模型組比較，雷公藤多苷治療組兩蛋白表達(dá)也降低。凝膠成像系統(tǒng)分析表明，白藜蘆醇對(duì)AA大鼠滑膜組織MMP-1、TIMP-1蛋白表達(dá)，經(jīng)5、15 mg／kg白藜蘆醇治療AA模型大鼠滑膜組織MMP-1、TIMP-1蛋白較AA模型滑膜組織明顯降低，見(jiàn)圖2。

圖1 大鼠踝關(guān)節(jié)免疫組化結(jié)果 SP×400A：正常組；B：模型組；C：白藜蘆醇（5 mg／kg）組；D：白藜蘆醇（15 mg／kg）組；E：雷公藤多苷（100 mg／kg）組；1：MMP-1；2：TIMP-1

表3 MMP-1、TIMP-1在各組動(dòng)物模型軟骨中表達(dá)的細(xì)胞分?jǐn)?shù)（n＝24，±s）

表3 MMP-1、TIMP-1在各組動(dòng)物模型軟骨中表達(dá)的細(xì)胞分?jǐn)?shù)（n＝24，±s）

與正常組比較：ΔΔP＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

項(xiàng)目正常組模型組白藜蘆醇（5 mg／kg）組白藜蘆醇（15 mg／kg）組雷公藤多苷（100 mg／kg）組MMP-17.26±0.8359.82±9.26ΔΔ26.12±7.31*14.90±1.75**15.70±1.82**TIMP-12.42±0.877.58±1.66ΔΔ4.54±1.87*3.42±1.43**4.09±1.27*

圖2 Western blot分析不同濃度白藜蘆醇作用AA大鼠滑膜組織MMP-1、TIMP-1蛋白表達(dá)（n＝3，±s）1：正常組；2：模型組；3：白藜蘆醇（5 mg／kg）組；4：白藜蘆醇（15 mg／kg）組；5：雷公藤多苷（100 mg／kg）組；與正常組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

3 討論

TIMPs是MMPs的特異性抑制物，對(duì)維持軟骨基質(zhì)合成與降解的平衡有重要的生理意義，MMPs異常表達(dá)和其抑制劑TIMP間動(dòng)態(tài)平衡的失調(diào)是目前RA發(fā)病機(jī)制研究熱點(diǎn)之一。膠原酶亞族MMP-1可降解基質(zhì)的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅷ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖等，對(duì)軟骨基質(zhì)中含量最多的Ⅱ型膠原的降解起關(guān)鍵的作用［5］。故MMP-1與TIMP-1的表達(dá)變化反映RA關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)Ⅱ型膠原代謝變化。本研究結(jié)果表明，在AA模型組大鼠的病變發(fā)展過(guò)程中，滑膜組織、軟骨中MMP-1、TIMP-1的表達(dá)呈逐漸升高趨勢(shì)，且MMP-1的表達(dá)升高幅度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于TIMP-1的表達(dá)，故MMP-1的表達(dá)升高可能是RA病理性發(fā)展的原因之一。滑膜組織、軟骨中MMP-1／TIMP-1的表達(dá)失衡導(dǎo)致Ⅱ型膠原結(jié)構(gòu)破壞及蛋白多糖過(guò)度降解，使軟骨基質(zhì)成分降解，軟骨細(xì)胞失去保護(hù)屏障，炎性因子更易于攻擊軟骨細(xì)胞，導(dǎo)致軟骨失去正常的彈性及變形能力，加重使關(guān)節(jié)軟骨功能惡化，進(jìn)一步加重軟骨破壞［6］。本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠左足較相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的正常組繼發(fā)性足腫脹、足爪關(guān)節(jié)炎指數(shù)明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明AA大鼠模型建立。

目前RA治療上主要依賴激素及免疫抑制劑等，其毒副作用較大；而生物制劑的價(jià)格昂貴，患者依從性差。白藜蘆醇存在于21科、31屬的72種食用或藥用植物中，尤以葡萄、虎杖和花生含量高。體外試驗(yàn)［7］表明白藜蘆醇通過(guò)抑制核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）活性，進(jìn)而抑制白介素-1（interleukin-1，IL-1）β、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）產(chǎn)生、阻滯細(xì)胞周期、阻斷疾病的發(fā)展；其抑制環(huán)氧合酶（cyclooxygenase，Cox-2）、抗氧化、抗血小板聚集的作用可改善病情和癥狀，對(duì)RA具有標(biāo)本兼治的獨(dú)特藥理作用。田靜等［7］證實(shí)白藜蘆醇呈劑量依賴性阻滯RA成纖維樣滑膜細(xì)胞（fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS）細(xì)胞周期、降低磷脂酰肌醇3（PI3K-Akt）信號(hào)通路Akt磷酸化水平，發(fā)揮抑制FLS增殖、誘導(dǎo)FLS凋亡作用，具有治療RA的潛在價(jià)值。本課題組也顯示白藜蘆醇能在體外通過(guò)磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（phospho-extracellular signal-regulated kinase，p-ERK）通路抑制滑膜細(xì)胞生長(zhǎng)，從而治療AA大鼠關(guān)節(jié)炎癥狀［8］。但白藜蘆醇治療RA的整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的報(bào)道較少，杜金烽等［9］研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇能夠通過(guò)降低實(shí)驗(yàn)大鼠血清抗CⅡ抗體水平對(duì)膠原誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎有抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)復(fù)制的大鼠AA模型，肉眼及鏡下觀察到滑膜組織充血、水腫、增厚，滑膜細(xì)胞呈增生狀態(tài)，并有明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)；軟骨表面有不同程度的糜爛、缺損，軟骨細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞減少，與RA的病理形態(tài)學(xué)變化相似，表明模型復(fù)制成功。本研究表明白藜蘆醇能明顯抑制AA大鼠繼發(fā)炎癥，對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)有很好的保護(hù)作用。免疫組化結(jié)果顯示AA大鼠軟骨細(xì)胞大量表達(dá)的MMP-1、TIMP-1雖增加，但相對(duì)于MMP-1表達(dá)甚少，呈現(xiàn)MMPs／TIMPs的失衡，不能抑制MMP-1對(duì)ECM的過(guò)度降解。關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，其基質(zhì)主要由蛋白多糖和膠原原纖維等組成，其特殊結(jié)構(gòu)和生化特性使軟骨具有彈性、張力及吸收和分散負(fù)荷的能力。關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)和功能維持有賴于軟骨細(xì)胞和基質(zhì)成分在形態(tài)與代謝方面的正常與穩(wěn)定［10］。

本實(shí)驗(yàn)中白藜蘆醇明顯改善了AA關(guān)節(jié)癥狀及病理變化，其機(jī)制可能與其抑制滑膜組織和軟骨基質(zhì)的降解作用有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)為將白藜蘆醇進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用成為治療RA的藥物提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對(duì)將其研制成安全、高效、經(jīng)濟(jì)、有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的RA新型藥物具有一定潛在的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)僅從一方面探討MMP-1及TIMP-1與AA的關(guān)系，MMPS家族中其他亞型間的相互作用在RA的發(fā)病中亦起著重要的作用，這些都有待于今后進(jìn)一步研究。

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Effect of MMP-1，TIMP-1 of resveratrol on rats with adjuvant arthritis

An Mei1，2，Sun Heyan3，Lu Jinsen4，et al
（1Dept of Tissue Embryology，4Dept of Clinical Medicine，Anhui Medical University，Hefei 230032；2Dept of Human Anatomy，Anhui Medical College，Hefei 230601；3Dept of Orthopedic，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230022）

ObjectiveTo investigate the expression of matrix metalloproteinases 1（MMP-1）and tissue matrix metalloproteinases inhibitor-1（TIMP-1）of synovial tissues and articular cartilage in rats with adjuvant arthritis（AA），to explore whether there is a relation between pathogenesis of AA and expression of MMP-1 and TIMP-1.Methods60 SD rats were randomly divided into 2 groups：normal control group（n＝10）and model group（n＝50）.The model group was injected freund＇s complete adjuvant induced arthritis.When the right paw was induced after 12 days and secondary immune-inflammatory feet were swelled，the rats were randomly divided into 4 groups，and each group had 10 rats：model，resveratrol low dose group（5 mg／kg），resveratrol high dose group（15 mg／kg），positive control tripterygium wilfordii glycoside（TWG，100 mg／kg），qd×18 day；after inducing inflammatory paw，the expressions of MMP-1 and TIMP-1 in synovial tissue and articular cartilage were detected by immunohistoehemistry.MMP-1 and TIMP-1 protein content in synovial tissue was detected by Western blot.ResultsResveratrol could inhibit model group rats pathological damage，compared with the AA model group，synovial tissue expression of MMP-1 was significantly higher in resveratrol-treated groups（P＜0.05，P＜0.01），the expression of TIMP-1 was also higher（P＜0.05）.There was a correlation in the role of the anti-inflammation.ConclusionResveratrol inhibits the inflammation of AA rats and prevents the pathological changes of the joint degeneration，its mechanism is related to regulation of matrix metalloproteinases in synovial tissue of rats and the expression of articular cartilage.

adjuvant arthritis；resveratrol；matrix metalloproteinases 1；matrix metalloproteinases inhibitor-1；Western blot；rats

R-332

A

1000－1492（2014）06－0701－05

2014－02－17接收

國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：81373421）；國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：201310366007）；安徽省自然科學(xué)基金（編號(hào)：1208085MC53）

安徽醫(yī)科大學(xué)1組織胚胎學(xué)教研室、4臨床醫(yī)學(xué)系，合肥2300322安徽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校解剖教研室，合肥 2306013安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科，合肥 230022

安 梅，女，講師，碩士研究生；陳曉宇，男，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：cxyayd＠163.com孫和炎，男，副主任醫(yī)師，責(zé)任作者，E-mail：sunyu20055＠sohu.com