高效液相色譜法同時測定多種殺蟲劑的有效成分

屈天堯，馬莉莉，王德海，吳曉波

（云南省農(nóng)藥檢定所云南昆明 650034）

高效液相色譜法同時測定多種殺蟲劑的有效成分

屈天堯，馬莉莉，王德海，吳曉波

（云南省農(nóng)藥檢定所云南昆明 650034）

建立了用高效液相色譜法測定農(nóng)藥市場上常見的8種殺蟲劑及2種禁限用農(nóng)藥有效成分的分析方法。采用C18柱（150L×4.6mm），以乙腈－水為流動相，紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，樣品的加標(biāo)回收率為90.0%～102.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01%～1.47%。該方法簡單、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可作為單劑、復(fù)配制劑同時測定其有效成分的方法。

高效液相色譜；殺蟲劑；有效成分

高效液相色譜是農(nóng)藥分析定性、定量的有效手段，尤其對熱不穩(wěn)定性、強極性農(nóng)藥及其代謝物的分析有較廣泛的使用，如用高效液相色譜法測定吡蟲啉［1］、阿維菌素［2］等。近年來，在農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)管過程中，農(nóng)藥產(chǎn)品中非法添加其他農(nóng)藥但難以發(fā)現(xiàn)的情況時有發(fā)生，而目前多種農(nóng)藥的分離分析方法報道較少［3－9］。

針對上述問題，作者對蔬菜、糧食生產(chǎn)中常用的8種殺蟲劑以及2種禁限用農(nóng)藥的分析方法進(jìn)行了研究，采用HPLC一次進(jìn)樣同時分析這幾種農(nóng)藥的有效成分，并對方法精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行了驗證。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

島津LC－20A高效液相色譜儀；色譜柱：C18柱，150 L×4.6 mm（Agilent）；HS－20500D型超聲波清洗器；艾科普超純水機；AB104－S電子天平（梅特勒－托利多）。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：毒死蜱、抗蚜威、吡蟲啉、久效磷、啶蟲脒、敵敵畏、辛硫磷、滅多威、溴氰菊酯、克百威，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%，國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心提供。

甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），超純水（1812MΩ·cm）。

1.2 色譜條件

色譜柱ODS－C18柱；柱溫，35℃；進(jìn)樣量10 μL。流動相乙腈和水，流速0.8 mL／min；梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Table 1 The program of gradient elution

1.3 溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：分別準(zhǔn)確稱取農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品0.125 g（精確到0.000 1 g），于25 mL容量瓶中，甲醇定容，配制成5 mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液；各取2.5 mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液于25 mL容量瓶中，甲醇定容，各農(nóng)藥的質(zhì)量濃度均為0.5 mg／mL。

樣品溶液的配制：準(zhǔn)確稱取一定量（精確到0.1 mg）的待測試樣于50 mL容量瓶中，甲醇定容，超聲波振蕩5 min，搖勻備用。

1.4 測定步驟

在1.2色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針相對響應(yīng)值≤1.5%時，按標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的進(jìn)樣順序進(jìn)行測定。

1.5 計算公式

將測得的2針試樣溶液及標(biāo)準(zhǔn)溶液中抗蚜威等10種農(nóng)藥的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中待測物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w按下式計算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中目標(biāo)農(nóng)藥峰面積的平均值；A2為試樣溶液中目標(biāo)農(nóng)藥峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；w0為標(biāo)樣中目標(biāo)農(nóng)藥的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 流動相的選擇

實驗考察了采用梯度洗脫，甲醇－水和乙腈－水為流動相時10種農(nóng)藥的分離效果，發(fā)現(xiàn)以乙腈－水為流動相時，10種農(nóng)藥有較好的分離，確定了1.2的梯度洗脫條件。

2.1.2 流速的影響

采用上述優(yōu)化的梯度洗脫條件分別考察了不同流動相流速對10種農(nóng)藥分離度的影響（固定柱溫為35℃），發(fā)現(xiàn)流速為0.6 mL／min時，各色譜峰出峰時間延長，色譜峰變寬，不利于色譜定性；隨著流速的增加，分離度增大，流速為0.8 mL／min時分離情況良好，但繼續(xù)增大流速，流速為1.0 mL／min時，克百威、抗蚜威分離度的分離度達(dá)不到要求，綜合考慮分離效果和流動相的用量，選擇流動相流速為0.8 mL／min。

2.1.3 檢測波長的選擇

分別對10種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液在190～370 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，得到各農(nóng)藥的紫外－可見吸收光譜圖，綜合考慮相鄰譜峰的分離情況、基線穩(wěn)定性和背景干擾情況等，確定了1.2的檢測波長的切換程序。

采用上述色譜條件對標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行分離，譜圖見圖1。

2.2 精密度實驗

將試樣按照優(yōu)化的色譜操作條件，平行測定5次，結(jié)果表明，測定結(jié)果及標(biāo)準(zhǔn)偏差、精密度良好，符合農(nóng)藥分析的要求。實驗結(jié)果見表2。

2.3 準(zhǔn)確度實驗

2.3.1 加標(biāo)回收實驗

各取50 mg已知含量的農(nóng)藥單劑試樣，分別添加0.5 mg的農(nóng)藥標(biāo)樣，測定其回收率，結(jié)果顯示幾種農(nóng)藥的添加回收率都在90.0%～102.0%之間，符合農(nóng)藥分析的要求。加標(biāo)回收實驗結(jié)果見表3。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖Figure 1 Chromatograms of standard samples

表2 精密度實驗結(jié)果Table 2 The result of the precision

2.3.2 樣品分析

收集含上述各組分的農(nóng)藥制劑樣品10份，用產(chǎn)品包裝上明示的標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法檢驗，并與本方法檢驗結(jié)果作一對照，結(jié)果表明，方法的檢測結(jié)果是可靠的，與標(biāo)準(zhǔn)方法檢測結(jié)果十分接近，完全滿足了分析的要求。對照實驗結(jié)果見表4。

表3 加標(biāo)回收實驗結(jié)果Table 3 Spiked recovery experiments results

表4 對照檢測實驗結(jié)果Table 4 The comparison of the quantitative result

3 結(jié)論

實際樣品分析表明，本方法可同時測定毒死蜱等多種農(nóng)藥，樣品的加標(biāo)回收率為90.0%～102.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01%～1.47%，該方法簡單、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可作為測定單劑、復(fù)配制劑同時測定其有效成分的方法。

［1］ 中化化工標(biāo)準(zhǔn)化研究所.農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)匯編（產(chǎn)品卷）HG3671－2000［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006

［2］ 中化化工標(biāo)準(zhǔn)化研究所.農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)匯編（產(chǎn)品卷）GB19336－2003［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006

［3］ 李英，周艷明，牛森.蔬菜、水果中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留分析方法的研究［J］.現(xiàn)代科學(xué)儀器，2005 （6）：68－70.

［4］ 黃惠玲，張薇君.毛細(xì)管氣相色譜法測定12種農(nóng)藥的有效成分［J］.色譜，2001，19（4）：347－349

［5］ 畢富春，吳國旭.20%馬拉硫磷·辛硫磷乳油液相色譜分析方法研究［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2007 （7）：8－11.

［6］ 鄧叢蕊，劉思全，楊秀利.液相色譜法同時測定辛硫磷和氯氰菊酯［J］.光譜實驗室，2003（1）：59－61.

［7］ 林波，李東芹.高效液相色譜法檢測26%辛·高效氯氟氰菊酯乳油含量［J］.化工技術(shù)與開發(fā)，2005 （3）：40－41.

［8］ 徐廣通，鄭樹學(xué)，許崇娟.滅多威及其合成中間體的高效液相色譜分析測試研究［J］.山東化工，1995（4）：38－40.

［9］ 周琴，吳永鳳.吡蟲啉的高效液相色譜法分析［J］.廣東化工，2004（1）：28－29.

Simultaneous Determination of Some Pesticides by HPLC

QU Tian－yao，MA Li－li，WANG De－h(huán)ai，WU Xiao－bo

（Agrichemical Examination Section of Yunnan，Kunming 650034，China）

The method for the determination of the active ingredients of 10 pesticides by HPLC has been developed with UV detector.Using C18 column for the purification.Taking water－acetonitrile as flowing phase and the pesticides were quantified by external standard calibration curve method.The result indicates the average recoveries were 90.0%－102.0%，while the relative standard deviations were within the range of 0.01%－1.47%.The method is simple，practical and accurate for the determination of the active ingredients of individual pesticide.

HPLC；pesticides quality；active ingredients

TQ45

A

1004-275X（2014）04-0034-03

12.3969／j.issn.1004-275X.2014.04.009

收稿：2014-04-11

屈天堯（1980－）男，云南迪慶人，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)藥市場監(jiān)管和農(nóng)藥質(zhì)量分析

*通信聯(lián)系人：馬莉莉（1979－）女，云南麗江人，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)藥質(zhì)量分析和農(nóng)藥市場監(jiān)管，E－mail：ynmalili＠126.com。