豬圓環(huán)病毒與偽狂犬病毒混合感染的檢測

章春燕 （遼寧省朝陽市動物疫病預防控制中心122000）

圓環(huán)病毒2型（Porcine Circovirus2，PCV2）屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，為環(huán)狀、單股DNA病毒。偽狂犬病病毒屬于皰疹病毒科甲皰疹病毒亞科，該亞科病毒的主要特征是宿主范圍寬廣，有高度的細胞致病性，復制周期短，常在神經(jīng)節(jié)內形成潛伏感染。豬是唯一感染后可以存活的物種。這兩種病是目前對養(yǎng)豬業(yè)危害極大的病毒性傳染病，單獨引起的疾病造成的豬群死亡率不是很高，但并發(fā)或繼發(fā)其他細菌或病毒感染能引起豬群的死亡率大大增加，對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，應當引起廣大養(yǎng)豬戶的重視。

2013年1月，我市某規(guī)?；i場仔豬出生3～5天時發(fā)生嘔吐現(xiàn)象和神經(jīng)癥狀，其中1月份生產(chǎn)的50頭母豬產(chǎn)下的小豬死亡率達50%，存活下來的仔豬在2月份生長緩慢、漸進性消瘦，皮膚發(fā)白，毛雜亂無光澤，精神沉郁，個別發(fā)病豬體溫升高到40℃左右，皮膚出現(xiàn)大面積紅色，有腹瀉癥狀，糞便呈黑色，有神經(jīng)癥狀，死亡率為7%～8%。3月初對該場進行了樣品采集與檢測，現(xiàn)總結如下。

1 豬場概況及免疫程序

該豬場現(xiàn)有生產(chǎn)母豬1000頭，設施良好，遠離交通要道。此次發(fā)病持續(xù)3個月左右，該場仔豬在1～3日齡進行了某進口豬偽狂犬活疫苗的滴鼻，20日齡同時進行支原體和豬瘟疫苗的免疫，保育豬45日齡進行高致病性豬藍耳病活疫苗的免疫，60日齡進行豬瘟疫苗的二次免疫，育肥豬90日齡進行豬偽狂犬疫苗的第二次免疫。

2 樣品采集及檢測

隨機采集該場的發(fā)病豬同舍豬群血清20份。分別采集腦、脾臟、肝臟、肺臟和腎臟等組織進行病原學檢測。

對20份豬血清用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）的方法檢測了高致病性豬藍耳病、豬2型圓環(huán)病毒和豬偽狂犬病的野毒抗體，所用的檢測試劑盒分別來自美國愛德士元亨和武漢科前，均為國家認可診斷試劑廠家。

對組織病料采用熒光RT-PCR的方法檢測了豬圓環(huán)病毒和偽狂犬病毒的病原，所用試劑盒均來自北京生科尚儀。試驗中RNA的提取采用了Trazol提取法，擴增試劑采用每份15微升RT-PCR反應液，0.25微升Tag酶，10微升RNA溶液，反應體系為25微升。

對20份血清樣品也采用了熒光RT-PCR的方法檢測了高致病性豬藍耳病病原。所用試劑盒來自中山科技。試驗中RNA的提取采用了硅膠膜-離心柱法，擴增試劑采用每份17微升的PCR反應液A，3微升PCR反應液B，5微升RNA溶液，反應體系為25微升。

3 檢測結果及分析

抗體檢測結果。從表1可以看出，該豬場高致病性豬藍耳病免疫抗體陽性率達100%，疫苗免疫效果良好，能起到對高致病性豬藍耳病很好的保護。豬偽狂犬野毒抗體陽性率達95%，且陽性判定結果離散度較大，檢測結果表明該群體感染了偽狂犬野毒。豬圓環(huán)病毒抗體免疫抗體合格率剛達到70%，免疫效果不理想。

表1 ELISA抗體檢測結果

病原檢測結果。對20份血清提取RNA，進行了豬高致病性藍耳病病毒變異株的核酸檢測，沒有從血清中檢測到豬高致病性藍耳病病毒變異毒株。從剖殺豬的不同組織病料中均發(fā)現(xiàn)了豬圓環(huán)病毒的存在，卻未檢出豬偽狂犬病病毒。

4 討論

在對該場的流調中我們發(fā)現(xiàn)，該場未進行豬圓環(huán)病毒滅活疫苗的免疫工作，但其豬群中圓環(huán)病毒的抗體陽性率達70%，且不同個體之間差異較大，離散度達77。同時，從病豬的腦、心臟、肝臟和肺臟等組織中均檢測到了圓環(huán)病毒存在，由此我們可以將該場為圓環(huán)病毒的不穩(wěn)定場。從檢測結果可以看出，豬偽狂犬野毒抗體的離散度最高，達到121，該場偽狂犬病也是生產(chǎn)不穩(wěn)定存在的原因?？梢钥闯?，此次豬群的不穩(wěn)定是由于存在圓環(huán)病毒與偽狂犬病毒的混合感染。