強(qiáng)直性脊柱炎患者血清白介素9的表達(dá)及其意義

王倩倩，魏 平，孟景紅

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一種慢性進(jìn)行性炎癥性脊柱關(guān)節(jié)病，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，多種炎性細(xì)胞因子在疾病發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用。Th9細(xì)胞主要分泌白介素9(interleukin-9，IL-9)[1-2]，該因子通過其受體IL-9R介導(dǎo)連接蛋白/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(JAK/STAT)信號(hào)通路，是參與免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞因子，在自身免疫疾病中的作用受到廣泛關(guān)注。已有研究表明，Th9細(xì)胞及IL-9在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化癥等風(fēng)濕性疾病中均表達(dá)異常[3-5]。本研究旨在測(cè)定AS患者血清中IL-9的表達(dá)水平，初步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年10月—2013年4月在河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院免疫風(fēng)濕科住院及門診治療的AS患者40例為AS組，診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2010年國(guó)際脊柱關(guān)節(jié)病評(píng)價(jià)工作組(ASAS)脊柱關(guān)節(jié)炎新分類標(biāo)準(zhǔn)，其中男33例，女7例；年齡19～56歲，平均(31±9)歲；病程1個(gè)月～40年，平均(8.2±8.0)年。記錄患者的病程、C反應(yīng)蛋白(CRP)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、Bath強(qiáng)直性脊柱炎活動(dòng)性指數(shù)(BASDAI)等臨床指標(biāo)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他結(jié)締組織病；妊娠或哺乳期婦女；合并心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病；以前接受腫瘤壞死因子α(TNF-α)藥物治療；精神病患者；正處于急慢性感染期間；惡性腫瘤患者。將患者根據(jù)BASDAI分為(BASDAI≤4)穩(wěn)定組12例、(BASDAI>4)活動(dòng)組28例。另選擇同時(shí)期門診體檢的健康者24例為對(duì)照組，其中男18例，女6例；年齡23～41歲，平均(28±4)歲。兩組年齡及性別具有均衡性。

1.2 主要試劑和儀器 人IL-9酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒購于RD生物科學(xué)公司。主要儀器：全自動(dòng)定量酶標(biāo)儀(芬蘭Labsystems Multiskan MS 352型)、臺(tái)式離心機(jī)(北京離心機(jī)廠LDZ5-2)、電熱恒溫水溫箱(成都賽可隆機(jī)械設(shè)備有限公司HH-501)、加樣器槍頭、加樣器、計(jì)時(shí)器、紙巾、蒸餾水等。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本收集 AS組、對(duì)照組均于夜間禁食8 h以上，于清晨空腹坐位時(shí)經(jīng)肘靜脈采血約3 ml，室溫靜置20 min后離心分離血清,3 000 r/min,20 min(離心半徑135 mm)，收集上清液，放置于-20 ℃冰箱內(nèi)凍存待測(cè)。

1.3.2 ELISA法檢測(cè)血清IL-9水平 取上述凍存待測(cè)樣本放置于室溫下復(fù)融，通過ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)IL-9水平。具體操作步驟嚴(yán)格按照ELISA說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 血清IL-9水平比較 穩(wěn)定組和活動(dòng)組患者血清IL-9水平高于對(duì)照組，活動(dòng)組患者血清IL-9水平高于穩(wěn)定組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

2.2 AS患者血清IL-9水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性 AS患者IL-9水平與CRP(r=0.529，P=0.000)、ESR(r=0.339，P=0.033)、BASDAI(r=0.623，P=0.000)均呈正相關(guān)，與病程無相關(guān)性(r=0.233,P=0.148)。

表1 各組血清IL-9水平比較

注：IL-9=白介素9；與對(duì)照組比較，*P<0.05；與穩(wěn)定組比較，△P<0.05

3 討論

目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于IL-9的研究主要集中在過敏性疾病、系統(tǒng)性硬化癥等自身免疫疾病，與AS的臨床相關(guān)性研究報(bào)道較少。最初研究認(rèn)為，IL-9是Th2類細(xì)胞因子，但其調(diào)節(jié)作用和生物活性不同于白介素4(IL-4)、白介素5(IL-5)、白介素13(IL-13)等Th2細(xì)胞因子。其受體IL-9R，主要分布在肥大細(xì)胞、T或B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞等，因此IL-9在免疫系統(tǒng)里是一個(gè)多效的細(xì)胞因子，如感染時(shí)可與IL-13協(xié)同促進(jìn)肥大細(xì)胞的募集和增殖，加重炎性反應(yīng)[6]；誘導(dǎo)原始CD4+T細(xì)胞分化為Th17細(xì)胞[7]；與IL-4共同作用刺激B淋巴細(xì)胞分泌IgG和IgE型抗體等，在過敏性疾病(尤其是過敏性哮喘)中發(fā)揮著重要作用[8-9]。2008年12月，Veldhoen等[1]和Dardalhon等[2]兩個(gè)研究小組同時(shí)報(bào)道，CD4+初始T細(xì)胞在IL-4和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)的共同刺激作用下分化為IL-9+白介素10(IL-10)+Foxp3-效應(yīng)性T細(xì)胞，因此類細(xì)胞主要分泌IL-9，將其命名為Th9，之后研究證實(shí)，Th9細(xì)胞也可由TGF-β誘導(dǎo)分化的Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來。Dardalhon等[2]研究小鼠腸炎模型發(fā)現(xiàn)，Th9細(xì)胞不具有抑制炎癥功能，而是通過IL-9與各類效應(yīng)性T細(xì)胞和細(xì)胞因子相互作用發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫作用，使炎性細(xì)胞的數(shù)量上升并分泌一些炎性遞質(zhì)促進(jìn)炎癥反應(yīng)。目前IL-9與自身免疫疾病的發(fā)病機(jī)制關(guān)系尚不明確，本研究通過檢測(cè)AS患者外周血中IL-9的表達(dá)水平，初步探討其在AS疾病進(jìn)展中可能發(fā)揮的作用，并分析該細(xì)胞因子與疾病活動(dòng)及臨床指標(biāo)的相關(guān)性。

本研究發(fā)現(xiàn)，AS患者血清IL-9水平明顯高于對(duì)照組，且AS活動(dòng)組IL-9水平高于穩(wěn)定組，故推測(cè)IL-9水平的上調(diào)可能與AS的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，并且能促進(jìn)疾病炎癥進(jìn)展。Tan等[10]試驗(yàn)證實(shí)，過敏性哮喘患者體內(nèi)IL-9的表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組，提出IL-9促進(jìn)過敏炎癥反應(yīng)，與哮喘呼吸道炎癥、氣道高反應(yīng)性等特征有關(guān)。Sato等[3]研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠模型提出，在TGF-β存在的條件下，IL-9可以促進(jìn)原始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，致Th17細(xì)胞顯著升高，推測(cè)IL-9可能通過對(duì)Th17細(xì)胞的調(diào)節(jié)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用，之后Yanaba等[4]研究表明，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血中IL-9的表達(dá)水平是增高的，但其與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的免疫學(xué)機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。崔冉等[5]研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中Th9細(xì)胞的表達(dá)率及IL-9的表達(dá)水平時(shí)發(fā)現(xiàn)，患者體內(nèi)的含量明顯高于健康對(duì)照組，且隨著疾病的活動(dòng)度增強(qiáng)而升高，推測(cè)Th9細(xì)胞的增多可能是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病的一個(gè)重要原因，并與疾病活動(dòng)度一致，本研究得出的結(jié)果與之一致。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，IL-9水平與AS患者的BASDAI及CRP、ESR等炎性指標(biāo)呈正相關(guān)，說明IL-9水平的上調(diào)可能導(dǎo)致病情活動(dòng)，這也證實(shí)了IL-9具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)的功能。而IL-9水平與病程無明顯相關(guān)性，表明該細(xì)胞因子參與了AS的整個(gè)疾病發(fā)展過程。Khan等[11]研究表明，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者在基線和不同時(shí)間點(diǎn)(3、6、9個(gè)月)接受利妥昔單抗治療后，對(duì)其血清樣本進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示利妥昔單抗可以顯著下調(diào)IL-9的表達(dá)水平，減輕炎癥，緩解疾病進(jìn)展，這一結(jié)論可以解釋IL-9不僅參與了疾病的炎癥反應(yīng)，而且貫穿疾病的始終，推測(cè)IL-9是調(diào)節(jié)自身免疫疾病炎癥和高反應(yīng)性的一種新的治療靶向。

綜上所述，AS患者外周血中IL-9水平明顯高于對(duì)照組，提示IL-9是一個(gè)與AS免疫發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)的致炎細(xì)胞因子，且該細(xì)胞因子在AS患者中的表達(dá)水平與疾病活動(dòng)度及臨床炎性指標(biāo)呈正相關(guān)，表明IL-9在促進(jìn)AS疾病炎癥進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用。

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