痛風(fēng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模研究進(jìn)展※

李 洋 萬 毅 池建淮

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)，合肥 230038）

痛風(fēng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模研究進(jìn)展※

李 洋 萬 毅 池建淮

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)，合肥 230038）

痛風(fēng)；動(dòng)物模型；綜述

痛風(fēng)是嘌呤代謝障礙引起的代謝性疾病，難治愈，易反復(fù)發(fā)作。其臨床特點(diǎn)是高尿酸血癥、急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石沉積和關(guān)節(jié)畸形，常累及腎引起慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸性腎石病。近年來，流行病學(xué)研究提示痛風(fēng)的患病率正在逐漸上升，日益成為一個(gè)重要的致殘性疾?。?］。為研究痛風(fēng)的診斷治療，學(xué)者們?cè)诓粩嗵剿饕环N與人類痛風(fēng)的發(fā)病特點(diǎn)接近，科學(xué)、合理、穩(wěn)定持久的動(dòng)物模型，取得了一定進(jìn)展。收集目前有關(guān)痛風(fēng)動(dòng)物模型的構(gòu)造情況，綜述如下。

1 高尿酸血癥模型

高尿酸血癥是痛風(fēng)的早期階段，雖無明顯臨床癥狀，但升高的血尿酸會(huì)激活腎素－血管緊張素系統(tǒng)，抑制一氧化氮合酶－1，引發(fā)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖，促進(jìn)腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展。據(jù)統(tǒng)計(jì)約5%～12%高尿酸血癥可轉(zhuǎn)化為痛風(fēng)［2］。故建立實(shí)驗(yàn)性高尿酸血癥模型，對(duì)痛風(fēng)的治療研究意義重大。

1.1 禽類動(dòng)物模型 黃麗霞［3］等用100日齡蛋雞造模，于產(chǎn)蛋前喂蛋白質(zhì)含量大于20%、鈣含量大于4%的飼料，同時(shí)控制每日進(jìn)水量100ml，7d后蛋雞表現(xiàn)惡動(dòng)、排稀白糞便，關(guān)節(jié)腫大為正常的1～1.5倍，靜脈血尿酸較對(duì)照組顯著升高 （P＜0.05）?？锛t艷［4］等用同法造模指出高尿酸血癥雞模型成功的重要因素是高蛋白高鈣飼料和限水。楊紅蓮［5］等用摻有酵母干粉的飼料喂鵪鶉，7d時(shí)鵪鶉尿酸水平、鳥嘌呤脫氨酶水平升高 （P＜0.05），28d時(shí)黃嘌呤氧化酶、腺苷脫氨酶水平也顯著升高 （P＜0.01），且高尿酸水平持續(xù)。趙恒立［6］用高鈣飼料配合300mg/kg腺嘌呤混懸液喂鵪鶉，1次/d，連續(xù)2w后，血尿酸含量顯著升高 （P＜0.01）。

與人類相似，禽類體內(nèi)缺乏尿酸酶，直接灌喂高嘌呤飼料，增加尿酸的生成，即可形成高尿酸血癥模型。雞腎臟排尿酸的能力強(qiáng)，體溫較人高約2～3℃，尿酸鹽在體內(nèi)溶解性較好，故嚴(yán)格限水利于制備雞高尿酸血癥模型［4］。

1.2 鼠高尿酸血癥模型 潘志［7］等建立小鼠高尿酸血癥模型時(shí)，腹腔注射次黃嘌呤，30min后血清尿酸值達(dá)到高峰，8h內(nèi)仍處于高水平。鄭志平［8］等也用此法建模，小鼠血尿酸水平45min后最高。侯氏［9］用腹腔注射氧嗪酸鉀300mg/kg造成小鼠高尿酸血癥，1h后小鼠血尿酸值顯著升高 （P＜0.01）。時(shí)樂［10］等用不同劑量的次黃嘌呤靜脈注射配合氧嗪酸鉀皮下注射，制備代謝性大鼠高尿酸血癥模型。其中次黃嘌呤500mg/kg和氧嗪酸鉀100mg/kg是最佳劑量，使大鼠血清尿酸在造模后3h升高到600umol/L，可維持12h左右，最高至900umol/L。葉勇［11］等給小鼠灌胃酵母30g/（kg·d），連續(xù)8d后，模型組小鼠尿酸含量較空白對(duì)照組顯著提高 （P＜0.01）。侯建平［9］等給模型大鼠灌胃腺嘌呤200mg/kg和乙胺丁醇250mg/kg，14d后血尿酸值明顯升高 （P＜0.05），模型組黃嘌呤氧化酶水平高于對(duì)照組 （P＜0.01）。徐立［12］等用含次黃嘌呤50g/kg飼料喂大鼠并皮下注射尿酸酶抑制劑200mg/kg致大鼠尿酸持續(xù)升高48h。楊桂梅［13］等用氧嗪酸鉀灌胃建立的大鼠高尿酸血癥模型，10d后血尿酸水平明顯升高，20d后更高，腎功能無顯著損害，大鼠健康狀態(tài)良好。

鼠類高尿酸血癥模型方法：①促進(jìn)尿酸產(chǎn)生：直接給模型動(dòng)物攝入高嘌呤飲食，如酵母；或給予尿酸前體物質(zhì)，如次黃嘌呤，提高黃嘌呤氧化酶的活性，促進(jìn)尿酸的產(chǎn)生。②抑制尿酸排泄法：用腺嘌呤、煙酸、乙胺丁醇等藥物，抑制腎臟排泄尿酸，增加血尿酸濃度，形成高尿酸血癥。③抑制尿酸酶活性：常用氧嗪酸鹽，利用其與尿酸的嘌呤環(huán)競(jìng)爭(zhēng)來結(jié)合尿酸酶，從而增加血尿酸。

2 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹疼痛甚至關(guān)節(jié)畸形，其關(guān)節(jié)腔內(nèi)提取的滑囊液中可發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞和尿酸鈉結(jié)晶。

此類實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ投嘤貌溉閯?dòng)物，僅有王圣瑾［14］用高鈣高蛋白飼料飼喂50日齡雞造模，17d雞關(guān)節(jié)腫大，輕捏即躲閃哀鳴、跛行、站立不穩(wěn)、糞便稀白。19世紀(jì)80年代就有采用尿酸鈉鹽注射法制作急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的模型［15］。王新亞［16］用4.5號(hào)注射器在大鼠右側(cè)距小腿踝關(guān)節(jié)背側(cè)，以45度方向插入至脛骨內(nèi)側(cè)，注入2.5%尿酸鈉溶液，致炎6～48h內(nèi)，大鼠足腫脹率持續(xù)升高。呂婧［17］等將50uL的50g/L尿酸鈉溶液注入大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)腔，伸曲、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)5min后，關(guān)節(jié)腫脹，活動(dòng)受限，8～12h達(dá)到高峰。李揚(yáng)［18］等將0.25ml尿酸鈉溶液注入大鼠踝關(guān)節(jié)腔，1h后大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹，可持續(xù)48h以上，病理檢查見大量中性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞浸潤，滑膜組織明顯增生，毛細(xì)血管明顯擴(kuò)張。劉仕軍［19］等用20%烏拉坦 （按5ml/kg）麻醉家兔，雙側(cè)膝關(guān)節(jié)周圍剃毛，皮膚消毒，輕輕彎曲膝關(guān)節(jié)，于關(guān)節(jié)正中或側(cè)位用6號(hào)注射針將尿酸鈉溶液0.5ml通過髕上韌帶注入膝關(guān)節(jié)腔，關(guān)節(jié)紅腫，皮溫升高。病理可查滑膜組織區(qū)水腫、毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、炎性細(xì)胞浸潤、纖維組織及滑膜細(xì)胞增生。夏隆江［20］等向大鼠右后趾皮下注射0.1ml尿酸鈉混懸液，用足爪容積測(cè)定法測(cè)其腫脹程度，4h達(dá)到腫脹高峰，可持續(xù)10h。徐熠［21］向大鼠左后肢足底皮下注射尿酸鈉混懸液0.2mL/只，2h達(dá)腫脹高峰。有人［21，22］改良大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，腹腔內(nèi)注射氧嗪酸鉀溶液，15min后將0.2ml尿酸鈉溶液注入到踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)，1h后見關(guān)節(jié)腫脹明顯，4h達(dá)高峰，血尿酸水平顯著升高。姚麗［23］等采用尿酸鈉溶液關(guān)節(jié)腔注射結(jié)合次黃嘌呤腹腔注射建立大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。

此類模型適于局部關(guān)節(jié)癥狀的觀察，常將一定量的尿酸鹽注射到關(guān)節(jié)腔內(nèi)以及皮膚下，引起暫時(shí)的非特異性的炎癥反應(yīng)。在此基礎(chǔ)上聯(lián)合使用尿酸酶抑制劑，不僅可觀察關(guān)節(jié)腫脹程度，檢測(cè)炎細(xì)胞水平，還可同時(shí)檢測(cè)尿酸水平。

3 痛風(fēng)性腎病模型

痛風(fēng)性腎病是由于持續(xù)的高尿酸血癥狀增加了腎臟的負(fù)擔(dān)，致使大量尿酸鹽結(jié)晶沉積于腎臟，造成腎臟的損害。

侯建平［24］等給大鼠灌胃腺嘌呤200mg/kg和乙胺丁醇250mg/kg，結(jié)果大鼠尿素氮值和血肌酐值均有所升高，解剖見大鼠腎臟增大，色蒼白，肉眼可見大量白色結(jié)晶，腎小管近、遠(yuǎn)曲小管均見棕黃色尿酸鹽結(jié)晶，灶狀分布的小管壞死，部分小管腔內(nèi)有成團(tuán)的中性粒細(xì)胞，間質(zhì)充血，炎細(xì)胞浸潤。邢儒伶［25］等用10%高酵母飼料喂大鼠，每日攝入量為10g/kg，同時(shí)予以100mg/kg·d腺嘌呤灌胃。第5w末，大鼠尿素氮、血肌酐、血尿酸增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。解剖可察，造模第3～5w，腎病體積逐漸增大，腎臟表面被膜下乳白色顆粒逐漸增多，皮質(zhì)變薄，切面皮髓質(zhì)充血，水腫加重。王瑾［26］等給予大鼠高嘌呤飼料，酵母10g/kg，腺嘌呤100mg/kg，21d后腎小管和間質(zhì)內(nèi)大量的棕褐色尿酸鹽結(jié)晶，炎細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管充血水腫。

痛風(fēng)性腎病模型多用大鼠，通過灌胃法以促尿酸生成和抑制尿酸排泄，腎臟損傷在疾病過程的末期較明顯，故造模時(shí)間長。

4 結(jié)語

由于實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)禽類困難，造價(jià)又過高，高尿酸血癥模型多用鼠類，其中腹腔注射比灌胃法建模成功快，但高尿酸水平持續(xù)時(shí)間較后者短。灌胃與腹腔注射聯(lián)合法持續(xù)時(shí)間也較長。通過模擬局部關(guān)節(jié)癥狀，痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎造模迅速成功，但維持時(shí)間不足，不適合長期觀察，聯(lián)合尿酸酶抑制劑法可同步復(fù)制高尿酸代謝模型。痛風(fēng)性腎病和高尿酸血癥造模方法相似，偏重于腎臟的病理觀察，故常用高嘌呤灌胃法，以便尿酸指標(biāo)及腎臟解剖的長期觀察。

綜上，各種模型對(duì)痛風(fēng)的研究各有特色，但其癥狀較單一，與人體內(nèi)病理變化差距仍有一定差距，故如何建立同人體異常尿酸代謝一致的，穩(wěn)定持久的動(dòng)物模型，仍值得不斷的理論研究和實(shí)驗(yàn)探索。

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10.3969/j.issn.1672－2779.2014.10.098

1672－2779（2014）－10－0162－02

安徽省省級(jí)基金資助［No：12070403073］

楊 杰 本文校對(duì)：蘇 玲

2014－01－03）