類風(fēng)濕因子免疫吸附血液灌流材料的制備及其性能評價

毛金春 王 翔* 張榮華 靳欣欣 唐福州 熊延連 蔣 毅

1(重慶大學(xué)生物工程學(xué)院生物流變科學(xué)與技術(shù)教育部重點(diǎn)實驗室， 重慶 400044)2(第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科風(fēng)濕病中心， 重慶 400038)

類風(fēng)濕因子免疫吸附血液灌流材料的制備及其性能評價

毛金春1王 翔1*張榮華2*靳欣欣1唐福州1熊延連1蔣 毅2

1(重慶大學(xué)生物工程學(xué)院生物流變科學(xué)與技術(shù)教育部重點(diǎn)實驗室， 重慶 400044)2(第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科風(fēng)濕病中心， 重慶 400038)

制備一種新型的類風(fēng)濕因子(RF)免疫吸附劑并研究其性能。通過在氯甲基聚苯乙烯-二乙烯樹脂(氯球)的表面接枝苯丙氨酸(PHE)，制備出可供臨床應(yīng)用的類風(fēng)濕因子血液灌流吸附劑(PS-PHE)；體外動態(tài)灌流實驗測定吸附劑的吸附率；體外動態(tài)洗脫實驗測定RF的脫落量及脫落率；通過體外灌流模擬實驗，檢測灌流對血液成分的影響來評價吸附劑的選擇性；體外凝血酶原時間(PTs)及凝血酶時間(TTs)檢測實驗驗證材料的血液相容性。免疫吸附劑對類風(fēng)濕因子IgA RF、IgG RF、IgM RF的吸附率分別可以達(dá)到45.21%±1.80%、56.02%±1.36%、52.40%±2.01% (n=5)，洗脫后脫落率分別為22.10%±1.65%、19.23%±1.06%、21.31%±1.35% (n=5)。全血灌流實驗中材料對紅細(xì)胞、血小板、總蛋白的吸附均在10%以下。同時體外凝血酶原時間(PTs)及凝血酶時間(TTs)測定結(jié)果顯示PS-PHE能延緩凝血速度。結(jié)論P(yáng)S-PHE對RF具有較高的吸附率及特異性并且表現(xiàn)出優(yōu)良的血液相容性，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床治療方面具有良好的應(yīng)用前景。

類風(fēng)濕因子；免疫吸附劑；苯丙氨酸

引言

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎為特征的慢性全身性自身免疫性疾病[1]。致病機(jī)理尚不完全清楚，Roitt1977就提出了類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病變機(jī)理，指出類風(fēng)濕因子(RFs)在免疫復(fù)合物反應(yīng)中起主要作用，在細(xì)胞免疫反應(yīng)中起誘發(fā)作用。類風(fēng)濕因子以變性IgG為抗原的一種自身抗體，主要有IgG、IgM類。目前國內(nèi)主要采用激素類藥物治療，但是治療周期長且?guī)в泻艽蟮母弊饔?。近年來，利用血液灌流的方式治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎逐步得到重視。早在1982年，Yamazaki就成功研制出聚乙烯醇凝膠-色氨酸免疫吸附劑(IM-TR)與聚乙烯醇凝膠-苯丙氨酸吸附劑(IM-PH)[2]。1990年,Kold用戊二交聯(lián)IgG,合成lgG聚合體，該吸附劑對RF的清除率達(dá)到94%[3]。但是由于該吸附劑過于細(xì)小，故沒能在臨床上得到應(yīng)用。隨后，A蛋白吸附柱的研究取得一定的成果，吸附柱主要通過吸附免疫球蛋白起到治療的效果，但A蛋白的高價格限制了其在臨床上的應(yīng)用[4]。

本實驗室近幾年來主要研究的方向是血液相容性良好的特異性吸附柱，肝素分子因其肝素具有抗凝血作用，并具有強(qiáng)親水性，減少對紅細(xì)胞、血小板的吸附，生物相容性良好；同時含有較多的化學(xué)活性官能團(tuán)，而一直被采用作為載體材料及配基之間的連接臂，以期加強(qiáng)基底材料的親水性，減少對紅細(xì)胞、血小板等有形成分的吸附；并使灌流材料自身具備抗凝能力，減少凝血。前期制備的吸附材料有：聚苯乙烯接枝肝素的低密度脂蛋白特異性吸附材料[5]；以肝素為連接臂、多粘菌素為配基的針對內(nèi)毒素特異性吸附樹脂[6]；以肝素為連接臂、氨基酸為配基的針對內(nèi)毒素的吸附樹脂[7]。幾種吸附劑均已完成吸附性能檢測及全血灌流實驗，在抗凝血及血液相容性方面表現(xiàn)出良好的性能。但還沒有研制出針對類風(fēng)濕因子(RF)的吸附劑，并且肝素及配基的接枝率較低。本研究如圖1所示，以氯甲基聚苯乙烯(PS-Cl)為載體，肝素(HEP)為連接臂，苯丙氨酸為配基制備高肝素及配基接枝率的特異性吸附RF的吸附劑。本研究沿用肝素作為分子臂，以解決目前RF吸附劑基底材料親水性不足的問題，同時增強(qiáng)吸附材料自身抗凝效果。苯丙氨酸由于其強(qiáng)疏水性、帶有官能團(tuán)-COOH的特點(diǎn)，因此對體內(nèi)抗體及其抗抗體有很強(qiáng)的親和作用[8]，主要的吸附原理是疏水作用及離子鍵作用[9]。該吸附劑HEP及PHE的接枝率較之前實驗室所制吸附劑要高，同時通過反應(yīng)方式的改變保留了PHE上的負(fù)電性基團(tuán)-COOH，加強(qiáng)與RF的親和能力。通過吸附效率、選擇性及血液相容性的檢測表明，該吸附劑都表現(xiàn)出良好的性能，有望應(yīng)用于臨床難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療。

1 材料與方法

1.1主要儀器與材料

儀器：紫外-可見分光光度計(TU-1901)(北京普析通用儀器設(shè)備有限責(zé)任公司，中國)、數(shù)顯智能控溫磁力攪拌器SZCL-2型(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司，中國)、血液細(xì)胞分析儀(BC-2000，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，中國)、恒流泵(HL-2，上海青浦滬西儀器廠，中國)全自動免疫分析儀傅里葉變換紅外光譜儀(Spectrum GX型、Perkin Elmer公司，美國)、真空干燥箱(DZX-3型 上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司，中國)、全自動血液生化分析儀(BS-200,深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司,中國)。

試劑：類風(fēng)濕因子ELISA試劑盒(德波生物試劑有限公司,中國)、氯甲基樹脂(天津南開合成科技有限公司，中國)、肝素鈉(百萃生物科技有限公司，中國)、乙二胺，EDC(1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl) carbodiimid)，Sigma公司，美國)、NHS(N-hydroxy-succinimide，Sigma公司，美國),檸檬酸緩沖液,甲苯胺藍(lán)(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，中國)、L-苯丙氨酸(PHE)、正己烷、磷酸緩沖液(pH=7.4，北京鼎國生物技術(shù)有限公司)、所用試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1氨基化氯球的制備

將5 g氯球與40 mL乙二胺加入到DMF溶液中，氯甲基與乙二胺的摩爾比小于1∶2。體系在500 mL三角燒瓶中75℃反應(yīng)7 h。用乙醇與蒸餾水交替沖洗至中性，烘干得到淡黃色的氨基化氯球(EDR)紅外檢測氨基。

1.2.2在氨基化氯球上接枝肝素

以0.02 M Na2HPO4，0.01 M檸檬酸，0.17 gEDC與0.2 gNHS(質(zhì)量比為5∶6)配制檸檬酸緩沖液100 mL，用0.1 M NaOH調(diào)節(jié)pH至4.7。在100 mL檸檬酸緩沖液中加入0.6 g的肝素，在0℃下超聲10 min后將5 g氨基化氯球加入到反應(yīng)體系中，常溫下震蕩反應(yīng)24 h。蒸餾水沖洗數(shù)遍，干燥得到肝素化氯球(PS-HEP)。

1.2.3PS-HEP接枝苯丙氨酸(PHE)

圖2是EDC-NHS的催化酰胺縮合反應(yīng)的機(jī)理[10]，EDC通過與-COOH反應(yīng)形成水溶液中不穩(wěn)定O-酰基異硫脲中間體，O-?；惲螂逯虚g體在NHS存在的情況下，可以轉(zhuǎn)變?yōu)榘敕€(wěn)定的胺活性NHS酯，可以將縮合反應(yīng)分解成兩步進(jìn)行。在PS-HEP連接PHE的反應(yīng)中，肝素和苯丙氨酸都存在-NH2與-COOH，-COOH是負(fù)電性基團(tuán)，能與類風(fēng)濕因子產(chǎn)生靜電吸附作用力，因此希望盡量使用肝素-COOH與苯丙氨酸的-NH2反應(yīng)，這樣能最大限度地保留氨基酸-COOH的比例。所以按以下步驟進(jìn)行，在含有5 g PS-HEP 100 mL檸檬酸的緩沖液中0℃超聲10 min后加入0.6 g PHE,室溫下反應(yīng)24 h。蒸餾水沖洗數(shù)遍，抽濾后干燥得到PS-PHE,濾液收集以供檢測苯丙氨酸的接枝量用。

1.2.4氯球表面氨基表征

將制備好的氨基化氯球真空干燥后，采用傅立葉紅外光譜儀對其進(jìn)行表面分析，通過觀察氯球與氨基化氯球的吸收峰來確定氯球經(jīng)乙二胺活化前后所發(fā)生的變化。

1.2.5肝素接枝量的測定[11]

甲苯胺藍(lán)比色法檢測肝素的固載量，在肝素鈉與甲苯胺藍(lán)的混合溶液中，肝素鈉能與甲苯胺藍(lán)緊密結(jié)合，之后將其用正己烷萃取去除；用紫外分光光度計測定630 nm處溶液的吸光值，濃度在40 μg/mL以下的肝素鈉的溶度呈很好的線性關(guān)系，所以能先繪制出吸光值關(guān)于肝素鈉濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在試管中加入1 g PS-HEP、4 mL 0.2%NaCl溶液、1 mL 0.005%的甲苯胺藍(lán)溶液混合均勻，于恒溫振蕩箱37℃反應(yīng)2 h。離心取樣品試管上層液體2 mL，加入分液漏斗中，然后各加入2 mL正己烷，劇烈振蕩，萃取一定時間后在紫外分光光度計630 nm處測其吸光度，并比照標(biāo)準(zhǔn)曲線計算肝素固定量。通過改變肝素初始濃度確定最佳反應(yīng)濃度。

用材料與甲苯胺藍(lán)溶液混合、離心后測定溶液吸光值，再根據(jù)已經(jīng)繪制的吸光值關(guān)于肝素量的標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以計算出材料表面肝素接枝量。

1.2.6氨基酸固載量的測定

首先配制氨基酸溶液，在紫外可見分光光度計上掃描，選取紫外最強(qiáng)吸收峰處為測定波長，然后配制一定濃度的氨基酸梯度溶液，在設(shè)定的波長下測定其紫外吸收，制作出吸光度對氨基酸濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。沖洗載體至紫外吸收為0，檢測洗脫液的紫外吸收，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算洗脫液中的濃度。再根據(jù)反應(yīng)前后氨基酸量的變化計算氨基酸的接枝量。按式(1)計算苯丙氨酸固載量

(1)

式中,W:苯丙氨酸的接枝量(μg/g)；m:苯丙氨酸初始質(zhì)量(g)；c:洗脫液中氨基酸的濃度(mg/mL)；v:洗脫液體積(mL)；M：PS-HEP的質(zhì)量(g)。

1.2.7體外類風(fēng)濕因子動態(tài)吸附實驗

取類風(fēng)濕因子陽性患者的血清做體外類風(fēng)濕因子的吸附實驗，將5 mL血清加入到自制血液灌流系統(tǒng)中分別在0.5、1.0、2.0 mL/min流速下進(jìn)行灌流，灌流柱中材料為1 g。每隔0.5 h取樣用ELISA試劑盒測定各個時間血清中IgA RF、IgG RF、IgM RF的含量，測定吸附量。進(jìn)行5組重復(fù)實驗。根據(jù)式(2)及式(3)計算吸附率及吸附量：

(2)

(3)

式中，ARt(adsorption rate)為吸附率；ACt(adsorption capacity)為吸附量(IU/g)；C0與Ct分別為吸附前后類風(fēng)濕因子的濃度(IU/mL)，V為實驗中血漿用量(mL)。

1.2.8體外類風(fēng)濕因子動態(tài)洗脫實驗

動態(tài)吸附兩小時后用5 mL0.9%的生理鹽水在2 mL/min流速下進(jìn)行循環(huán)沖洗，每隔15 min對沖洗液進(jìn)行檢測，計算脫落含量，確定吸附材料上RF殘余吸附量。進(jìn)行5組重復(fù)實驗。按照式(4)和式(5)計算剩余吸附量及剩余吸附率

RCt=ACm-ECt

(4)

(5)

式中，RCt(Remaining capacity)為剩余吸附量(IU/g)；ACm為吸附平衡時最大吸附量(IU/g);ECt(elution capacity)表示脫落量(IU)；AbRt(abscission rate)表示脫落率。

1.2.9吸附選擇性檢測

高選擇性是衡量灌流材料是否安全的重要指標(biāo)，所以進(jìn)行了選擇性的檢測。用自制血液灌流器，裝入1 g 吸附劑，灌流前使用肝素鈉生理鹽水沖管3次，進(jìn)行離體血液灌流實驗。取5 mL健康人的血樣灌入到灌流器中循環(huán)吸附2 h，分別附取血樣用血液細(xì)胞分析儀和常規(guī)全自動生化分析儀測定血細(xì)胞及血液生化指標(biāo)變化。

1.2.10血液相容性檢測

凝血酶時間及凝血酶原時間能反應(yīng)PS-PHE對凝血機(jī)制的影響[12]，鑒于此進(jìn)行了凝血酶時間及凝血時間測定實驗，操作步驟按照說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1紅外檢測氨基化氯球

圖3為氯甲基樹脂氨基化前后的的紅外光譜。發(fā)現(xiàn)氨基化反應(yīng)之后，個別特征峰出現(xiàn)明顯變化，3 300～3 377 cm-1之間出現(xiàn)了氨基(-NH2)的伸縮振動峰，而表征了氯甲基強(qiáng)化的=C-H的面內(nèi)彎曲振動峰1 265 cm-1消失了，說明乙二胺與苯環(huán)上的氯甲基發(fā)生了反應(yīng)，將氨基成功引入到了氯甲基樹脂上[13]。

2.2肝素的固定量

肝素的固定量直接影響著苯丙氨酸配基的固定及肝素抗凝效果的發(fā)揮，應(yīng)尋找肝素最佳起始用量及反應(yīng)條件，使肝素的固定量最大。在之前研究基礎(chǔ)上本實驗考慮了肝素的起始濃度對肝素固定量的影響。圖4是肝素的固定量受肝素起始用量的曲線，可見接枝肝素所需的最佳肝素濃度為6 mg/mL，肝素的最大接枝量為(33.80±1.02)μg/g。

2.3苯丙氨酸的固載量

苯丙氨酸作為PS-PHE的配基，它的固載量直接關(guān)系到對RF的吸附效率，本研究的目標(biāo)是在肝素分子臂上接枝上盡可能多的苯丙氨酸，以便于其吸附作用的發(fā)揮。由此，本實驗測定了不同的苯丙氨酸的初始用量對苯丙氨酸固定量的影響，如圖5所示。由圖5可知，接枝苯丙氨酸的所需的最佳苯丙氨酸濃度為6 mg/mL，苯丙氨酸的接枝量為(8.00±0.25) mg/g。

2.4吸附量檢測

吸附量檢測能直接反應(yīng)PS-PHE對RF的吸附能力，吸附前后RF的濃度用酶聯(lián)法試劑盒(二步法)測定。圖6～圖8為在不同流速下的PS-PHE對RF的吸附動力學(xué)曲線。筆者發(fā)現(xiàn)，隨著流速的加大，相同時間PS-PHE對RF的吸附率也隨之下降，這是由于低流速下吸附材料與RF的作用時間延長，RF能很好地滲進(jìn)材料的內(nèi)部與配基發(fā)生結(jié)合，使吸附更加充分導(dǎo)致的，考慮到臨床實際的灌流流速，采用2 mL/min作為灌流流速。在1 h后基本能達(dá)到總吸附量的80%以上，2 h后均能達(dá)到吸附平衡，對IgA RF、IgG RF、IgM RF的平均吸附率分別為 45.21%±1.80%、56.02%±1.36%、52.40%±2.01%。圖9是在2 mL/min的流速下RF吸附率隨時間的變化曲線，結(jié)合洗脫曲線發(fā)現(xiàn)材料對IgG RF的親和力最強(qiáng)，IgM RF其次，IgA RF最弱。

2.5吸附穩(wěn)定性檢測

PS-PHE吸附劑對RFs的吸附性能在實驗中已經(jīng)得到初步的探究，但是吸附量測定實驗僅能檢測到RFs在吸附劑表面的沉積量，可能包括疏水性結(jié)合、靜電性結(jié)合、由于空間限制而導(dǎo)致的物理性的堆積。物理性的堆積量容易受血液流動的影響，從吸附劑上脫落，又重新回到血液中。鑒于此，本實驗設(shè)計中又加入吸附穩(wěn)定性實驗，以檢測吸附劑對RFs的疏水、靜電吸附等強(qiáng)吸附作用的量，考察RFs在吸附劑上的結(jié)合穩(wěn)定性。

圖10～圖12是洗脫時間對RF吸附的影響，已經(jīng)達(dá)到吸附平衡的材料洗脫后剩余吸附量在半小時內(nèi)下降到穩(wěn)定的水平，IgA RF、IgG RF、IgM RF脫落率分別占各自總吸附量的22.10%±1.65%、19.23%±1.06%、21.31%±1.35%，洗脫實驗表明PS-PHE對IgGRF的疏水及離子鍵作用力較強(qiáng)，具有較大的吸附能力。

2.6吸附選擇性檢測

吸附選擇性是評價生物醫(yī)用材料的重要指標(biāo)之一[14]。本實驗對正常人血液進(jìn)行了體外血液動態(tài)灌流實驗，表1是體外模擬灌流后血液成分的變化。灌流2 h后，白細(xì)胞、紅細(xì)胞及其血小板的量有所減少，下降率分別為5.26%±1.02%、4.44%±0.98%、5.61%±1.23%；血漿蛋白的下降率也在10%以下，但都在臨床可接受范圍內(nèi)[14]。但對球蛋白的吸附也較大，因為球蛋白與RF具有相似的結(jié)構(gòu)，故吸附率也會達(dá)到較高的水平。由此表明該材料的選擇性良好，可滿足臨床應(yīng)用的要求。

2.7血液相容性的檢測結(jié)果

醫(yī)用血液灌流材料不僅要具備高吸附率、高選擇性，還應(yīng)具有一定的抗凝血功能。這樣不僅能在灌流過程中減少凝血，還能減少在灌流過程中外加抗凝劑的量，使灌流過程對血液的不利影響得到減弱[12]。所以我們進(jìn)一步對過程中所涉及材料及吸附劑進(jìn)行抗凝血的評價，表2是材料的凝血酶原時間(PTs)及凝血酶時間(TTs)測定結(jié)果，由表2我們可以看出PS-HEP由于表面接枝的肝素分子，PTs及TTs值較大,表明具有很強(qiáng)的抗凝血效果；PS-PHE由于在肝素分子鏈上進(jìn)一步接枝了苯丙氨酸，但肝素分子內(nèi)的硫酸根離子得到保留，PTs及TTs比空白組大，材料依然具有抗凝效果，但較PS-HEP有所減弱。

3 討論與結(jié)論

理想的免疫吸附劑需要首先具備生物醫(yī)用材料的一般特性如：良好的力學(xué)性能，易于滅菌；不會有配基的脫落，良好的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性；無毒，不會引起機(jī)體的免疫反應(yīng)，不會加速凝血，不引起溶血等良好的血液相容性。除此之外，吸附材料需對目標(biāo)物質(zhì)具有高吸附率及高選擇性和特異性。

本實驗室研制的吸附材料PS-PHE是以氯甲基樹脂作為基底材料，乙二胺活化后嫁接肝素分子，發(fā)揮其空間結(jié)構(gòu)效應(yīng)與生物學(xué)功能，作為分子臂以固定PHE配基，以期通過化學(xué)放大效應(yīng)來增強(qiáng)苯丙氨酸對RF去除效率，同時肝素作為良好的抗凝劑能增強(qiáng)材料的血液相容性。PHE能對RF起到離子吸附及疏水吸附效果。經(jīng)過對接枝肝素及苯丙氨酸的條件摸索，肝素的接枝率達(dá)到(33.80±1.02) μg/g，苯丙氨酸的接枝率最高達(dá)到(8.00±0.25) mg/g。肝素接枝量的提高能有效增加吸附率的生物相容性，較比之前本實驗室研制的產(chǎn)品在血液相容性方面有所改善。實驗結(jié)果表明PS-PHE對RF具有較高的吸附效率，對IgG RF的吸附率最高達(dá)到56%。吸附實驗表明吸附劑對于RFs具有較高的吸附率及吸附通量。但是吸附量檢測僅能檢測到RFs在吸附劑表面的沉積量，可能包括疏水性結(jié)合、靜電性結(jié)合、由于空間限制而導(dǎo)致的物理性的堆積。本課題所關(guān)注的親和作用是疏水作用及靜電作用這兩類強(qiáng)吸附作用力，物理性的堆積量容易受血液流動的影響，從吸附劑上脫落，又重新回到血液中。鑒于此，本課題設(shè)計中又加入吸附穩(wěn)定性實驗，以檢測吸附劑對RFs的疏水、靜電吸附等強(qiáng)吸附作用的量，考察RFs在吸附劑上的結(jié)合穩(wěn)定性。我們發(fā)現(xiàn)將吸附上RF的材料進(jìn)行洗脫1 h后，脫落率穩(wěn)定在20%左右，IgG RF的洗脫率為19%，說明材料對RF的吸附較牢固，血液沖刷對吸附率的影響較小。吸附選擇性實驗測定了灌流前后血液成分的變化。灌流2 h后，白細(xì)胞、紅細(xì)胞及其血小板的量有所減少，下降率分別為5.26%±1.02%、4.44%±0.98%、5.61%±1.23%；血漿蛋白的下降率也在10%以下，但都在臨床可接受范圍內(nèi)[14]。由此表明該材料的選擇性良好，滿足臨床應(yīng)用的要求。為了表征材料對凝血的影響，進(jìn)行了PTs及TTs的檢測，結(jié)果顯示吸附材料有適度延緩凝血的作用，并且不會造成凝血異常，表明吸附材料具有良好的血液相容性。綜上所述，PS-PHE對RF的吸附率達(dá)到50%以上，吸附前后對血液其他成分的影響不大，并且表現(xiàn)出較佳的血液相容性。目前特異高血液相容性的吸附劑仍在探索中，從實驗數(shù)據(jù)上分析，本課題所用肝素連接臂在增加吸附劑的血液相容性方面確有比較好的效果，但仍需進(jìn)一步的研究，找到更加有力的理論支撐。同時，以氨基酸作為配基吸附RF的具體作用機(jī)理尚沒有完全研究清楚，這也一定程度影響著針對RF的特應(yīng)性吸附劑的研制，所以對PS-PHE分子結(jié)構(gòu)的解析及吸附機(jī)理的研究需要更加深入的研究。

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StudyonPreparationandPropertiesofImmuneAdsorbentforRheumatoidFactorremovalinHemoperfusion

MAO Jin-Chun1WANG Xiang1*ZHANG Rong-Hua2*JIN Xin-Xin1TANG Fu-Zhou1XIOG Yan-Lian1JIANG Yi2

1(KeyLaboratoryofBiorheologicalScienceandTechnology,MinistryofEducation,BioengineeringCollege,ChongqingUniversity,Chongqing400044,China)2(ThirdMilitaryMedicalUniversity,TheFirstAffiliatedHospital,IntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,DepartmentofRheumatologyCentre,Chongqing400038,China)

In this work we prepared an adsorbent (PS-PHE) aiming to remove rheumatoid factors and studied its performance. In the PS-PHE, the chloromethyl resin acted as carrier grafting with the linker of heparin, to which phenylalanine was connected. The adsorption rate of adsorbent was investigated byinvitroRF dynamic perfusion. We conductedinvitroelution experiment to measure the abscission rate of RF. Selectivity of adsorbent was evaluated by blood components before and after perfusion. The prothrombin time (PTs) and thrombin time (TTs) detection in vitro verify the blood compatibility of adsorbent. The adsorption equilibrium was reached in less than two hours, and 90% of the maximum adsorption capacity was reached only under 1 hour, while the adsorption rate of IgA RF, IgG RF and IgM RF in serum was 45.21%±1.80%、56.02%±1.36%、52.40%±2.01% (n=5). After elution, the abscission rate of IgA RF, IgG RF and IgM RF was 22.10%±1.65%、19.23%±1.06%、21.31%±1.35% (n=5). After perfusion experiment, the variation rates of albumen and red blood cell were both less than 10%. The detection results of PTs and TTs showed PS-PHE delayed the coagulation rate. In conclusion, PS-PHE has higher absorption rate to RF and good blood compatibility, showing good application prospects.

rheumatoid factor; immune adsorbent; phenylalanine

10.3969/j.issn.0258-8021. 2014. 03.011

2013-11-25， 錄用日期:2014-04-09

重慶市科委科技計劃攻關(guān)項目(cstc2011ac5193)；重慶市科委基地建設(shè)費(fèi)(cstc2011pt-gc0030)

R318

A

0258-8021(2014) 03-0335-08

*通信作者(Corresponding author)，E-mail: xwangchn@vip.sina.com.cn; zhrhlggg@163.com