毛果魚藤化學(xué)成分研究

吳紅果， 婁華勇， 梁光義*， 潘衛(wèi)東*

(1. 貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2. 貴州省、中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550002)

毛果魚藤DerriseriocarpaHow，為豆科Leguminosae魚藤屬Derris植物?；ㄆ?～7月，果期9月至翌年1月。生于山地疏林中，海拔1 200～1 400 m。主要分布在廣西、云南一帶，別名為土甘草、雞血藤、藤甘草等[1]。其根入藥能補(bǔ)血、潤(rùn)腸，用于發(fā)燒胸悶、咳嗽、咽喉痛，藤莖具有利尿除濕、鎮(zhèn)咳化痰之功效，民間常用來(lái)治療腎炎、膀胱炎、尿道炎、咳嗽等癥[2-4]。文獻(xiàn)[5]曾對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行預(yù)試研究，推測(cè)該植物中含有氨基酸、皂苷、黃酮、蒽醌、三萜等化合物。目前毛果魚藤中已報(bào)道的化學(xué)成分僅三萜類化合物[6]，其他類型的化學(xué)成分尚未見報(bào)道。為了進(jìn)一步了解毛果魚藤化學(xué)成分，以及研究其中是否含有抗結(jié)核分枝桿菌活性成分，本實(shí)驗(yàn)對(duì)毛果魚藤化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，從中分離得到9個(gè)化合物，其中除化合物1、6外，其他化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Varian INOVA-400 MHz核磁共振波譜儀(TMS內(nèi)標(biāo))；HP-5973型質(zhì)譜儀(EI)；HP1100-MSD型液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(ESI)；XT-4型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度計(jì)未校正，北京泰克儀器有限公司)。默克反相硅膠，柱層析硅膠(40～80目、200～300目和300～400目)和薄層層析硅膠(GF254)均為青島海洋化工有限公司生產(chǎn)，Sephadex LH-20為瑞典Amersham公司生產(chǎn)。

毛果魚藤藥材采自貴州省興義市，經(jīng)貴陽(yáng)市中醫(yī)學(xué)院陳德媛教授鑒定為豆科魚藤屬植物毛果魚藤DerriseriocarpaHow，樣本保存在貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取分離

36 kg毛果魚藤干燥全草粉碎后，分別用95%乙醇充分浸泡提取1次，75%乙醇充分浸泡提取2次，合并提取液，減壓蒸餾回收乙醇至無(wú)醇味，浸膏加水溶解，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，得到石油醚部位浸膏482 g，乙酸乙酯部位浸膏311 g，正丁醇部位浸膏537 g。

石油醚部位浸膏進(jìn)行硅膠柱色譜(200～300目)分離，用石油醚-乙酸乙酯(100∶1～0∶1)進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同流分，得到7個(gè)組分(Fr.1～Fr.7)。Fr.3經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯 50∶1)分離得到化合物1。Fr.4反復(fù)運(yùn)用硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮系統(tǒng))及Sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇 1∶1)分離純化，得到化合物2～4。

乙酸乙酯部位浸膏進(jìn)行硅膠柱色譜(200～300目)分離，以石油醚-丙酮(50∶1～0∶1)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)合并了相同流分，得到6個(gè)組分(Fr.1～ Fr.6)。Fr.2經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-丙酮系統(tǒng))和重結(jié)晶分離純化，得到化合物5～6。Fr.4以石油醚-丙酮(10∶1)為洗脫劑進(jìn)行硅膠柱層析，分離得到化合物7。Fr.6經(jīng)反相硅膠柱色譜(甲醇-水 5∶95-100∶0)梯度洗脫析出無(wú)色晶體，用Sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇 1∶1)及重結(jié)晶純化，得到化合物8～9。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末 (乙酸乙酯), mp 197～ 199 ℃。EI-MSm/z426 [M]+, 411, 218, 203, 189。1H-NMR (CDCl3, 400 MHz)δ: 5.18 (1H, t,J=3.6 Hz, H-12), 3.21 (1H, t,J=4.8 Hz, H-3), 1.14 (3H, s, H-27), 1.03 (3H, s, H-23), 1.00 (3H, s, H-25), 0.97 (3H, s, H-24), 0.93 (3H, s, H-29), 0.86 (3H, s, H-30), 0.84 (3H, s, H-28), 0.78 (3H, s, H-26)。13C-NMR (CDCl3, 100 MHz),δ: 38.6 (C-1), 28.0 (C-2), 78.6 (C-3), 38.9 (C-4), 53.0 (C-5), 18.6 (C-6), 32.8 (C-7), 40.1 (C-8), 47.8 (C-9), 37.6 (C-10), 23.7 (C-11), 121.9 (C-12), 143.2 (C-13), 42.0 (C-14), 28.4 (C-15), 27.0 (C-16), 32.8 (C-17), 37.3 (C-18), 35.8 (C-19), 31.9 (C-20), 35.2 (C-21), 36.1 (C-22), 28.9 (C-23), 17.5 (C-24), 15.8 (C-25), 17.9 (C-26), 27.6 (C-27), 28.9 (C-28), 33.8 (C-29), 24.6 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的β-香樹脂醇的數(shù)據(jù)基本一致。

化合物2：淡黃色油狀物 (乙酸乙酯), ESI-MSm/z319 [M+Na]+。1H-NMR (CDCl3, 400 MHz)δ: 10.60 (1H, brs, -OH), 5.35-5.45 (2H, m, H-10,11), 2.35 (2H, t,J=7.6 Hz, H-2), 2.00 (4H, m, H-9,12), 1.63 (2H, m, H-3), 1.25-1.30 (22H, m, H-4, 5, 6, 7, 8, 13, 14, 15, 16, 17, 18), 0.88 (3H, t,J=6.4 Hz, H-19)。13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)δ: 179.7 (C-1), 34.0 (C-2), 24.7 (C-3), 29.1 (C-4), 29.1 (C-5), 29.5 (C-6), 29.7 (C-7), 29.4 (C-8), 27.2 (C-9), 129.7 (C-10), 130.0 (C-11), 27.2 (C-12), 29.4 (C-13), 29.8 (C-14), 29.6 (C-15), 29.2 (C-16), 31.9 (C-17), 22.7 (C-18), 14.1 (C-19)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的順式-10-十九碳烯酸的數(shù)據(jù)一致。

化合物3：無(wú)色針晶 (丙酮), mp 166～168 ℃。EI-MSm/z412 [M]+, 398, 370, 289, 271, 245, 229, 124, 107, 95, 69, 65。1H-NMR (CDCl3, 400 MHz)δ: 5.72 (1H, s, H-4), 2.44～2.23 (4H, m, H-2,6), 2.06～1.98 (3H, m, H-1, 12), 1.88～1.80 (2H, m, H-7, 15), 1.74～1.65 (2H, m, H-1, 24), 1.65～1.46 (3H, m, H-8, 11, 16), 1.39～1.09 (10H, m, H-11, 15, 16, 17, 20, 22, 23, 28), 1.05～0.98 (3H, m, H-7, 14, 22), 0.98～0.88 (2H, m, H-9, 25), 1.18 (3H, s, 19-CH3), 0.93 (3H, d,J=6.4 Hz, 21-CH3), 0.84 (3H, t,J=7.2 Hz, 29-CH3), 0.82 (3H, d,J=1.6 Hz, 26-CH3), 0.80 (3H, d,J=7.6 Hz, 27-CH3), 0.71 (3H, s, 18-CH3)。13C-NMR (CDCl3, 100 MHz).δ: 35.6 (C-1), 33.9 (C-2), 199.7 (C-3), 123.7 (C-4), 171.7 (C-5), 32.9 (C-6), 32.0 (C-7), 35.6 (C-8), 53.8 (C-9), 38.6 (C-10), 21.0 (C-11), 39.6 (C-12), 42.3 (C-13), 55.8 (C-14), 28.2 (C-15), 24.1 (C-16), 55.9 (C-17), 11.9 (C-18), 17.3 (C-19), 36.1 (C-20), 18.7 (C-21), 33.8 (C-22), 26.0 (C-23), 29.1 (C-24), 45.8 (C-25), 19.8 (C-26), 19.0 (C-27), 23.0 (C-28), 11.9 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的豆甾-4-烯-3-酮的數(shù)據(jù)基本一致。

化合物4：無(wú)色針晶 (丙酮), mp 165～167 ℃。EI-MSm/z: 424 [M]+, 409, 313, 245, 218, 205, 189, 149, 109, 95。1H-NMR (CDCl3, 400 MHz)δ: 4.69 (1H, d,J=2.4 Hz, H-20α), 4.57 (1H, d,J=2.4 Hz, H-20β), 1.71 (3H, s, H-30), 1.07 (3H, s, H-28), 1.07 (3H, s, H-27), 1.03 (3H, s, H-26), 0.96 (3H, s, H-25), 0.93 (3H, s, H-24), 0.80 (3H, s, H-23)。13C-NMR (CDCl3, 100 MHz),δ: 38.1 (C-1), 35.5 (C-2), 218.3 (C-3), 47.9 (C-4), 54.9 (C-5), 19.6 (C-6), 33.5 (C-7), 43.0 (C-8),48.2 (C-9), 36.9 (C-10), 21.4 (C-11), 25.1 (C-12), 39.6 (C-13), 40.7 (C-14), 27.4 (C-15), 34.1 (C-16), 42.9 (C-17), 49.8 (C-18), 47.3 (C-19), 150.9 (C-20), 29.8 (C-21), 40.0 (C-22), 26.6 (C-23), 21.0 (C-24), 18.0 (C-25), 15.8 (C-26), 14.5 (C-27), 16.0 (C-28), 109.4 (C-29), 19.3 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的羽扇-20 (29)-烯-3-酮的數(shù)據(jù)一致。

化合物5：白色針晶 (三氯甲烷), mp 284～286 ℃。EI-MSm/z: 456 [M]+, 423, 248, 189, 175。1H-NMR (CDCl3, 400 MHz)δ: 12.08 (1H, s, brs, 28-COOH), 4.69 (1H, d,J=2.8 Hz, H-29a), 4.56 (1H, d,J=2.8 Hz, H-29b), 3.13 (1H, dd,J=1.6, 2.0 Hz, H-3), 3.02 (1H, dd,J=5.2, 9.6 Hz, H-19), 1.66 (3H, s, H-30), 0.97 (3H, s, H-27), 0.96 (3H, s, H-26), 0.93 (3H, s, H-25), 0.83 (3H, s, H-24), 0.72 (3H, s, H-23)。13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)δ: 37.6 (C-1), 28.0 (C-2), 79.5 (C-3), 39.0 (C-4), 56.1 (C-5), 19.0 (C-6), 35.2 (C-7), 41.8 (C-8), 51.8 (C-9), 38.1 (C-10), 21.4 (C-11), 26.4 (C-12), 37.0 (C-13), 42.8 (C-14), 28.9 (C-15), 33.3 (C-16), 56.9 (C-17), 48.6 (C-18), 47.8 (C-19), 152.7 (C-20), 31.8 (C-21), 38.6 (C-22), 28.2 (C-23), 15.6 (C-24), 16.6 (C-25), 16.5 (C-26), 15.4 (C-27), 181.8 (C-28), 108.5 (C-29), 19.5 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的白樺脂酸的數(shù)據(jù)一致。

化合物6：白色針晶 (丙酮), mp 138～140 ℃。與β-谷甾醇對(duì)照品TLC對(duì)比，Rf值一致，且混合溶點(diǎn)不降低，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物7：無(wú)色針晶 (丙酮), mp 254～256 ℃。ESI-MSm/z: 481 [M+Na]+。1H-NMR (CDCl3, 400 MHz)δ: 5.25 (1H, brs, H-12), 4.21 (1H, d,J=11.2 Hz, H-24a), 3.44 (2H, m, H-3, 22), 3.35 (1H, d,J=10.4 Hz, H-24b), 1.25 (3H, s, H-27), 1.11 (3H, s, H-23), 1.04 (3H, s, H-28), 0.95 (3H, s, H-), 0.90 (3H, s, H-), 0.87 (3H, s, H-29), 0.84 (3H, s, H-30)。13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)δ: 38.4 (C-1), 27.6 (C-2), 80.8 (C-3), 41.4 (C-4), 55.8 (C-5), 18.4 (C-6), 33.1 (C-7), 39.6 (C-8), 47.7 (C-9), 37.4 (C-10), 23.7 (C-11), 122.3 (C-12), 143.9 (C-13), 42.0 (C-14), 25.8 (C-15), 28.2 (C-16), 36.6 (C-17), 44.7 (C-18), 46.1 (C-19), 30.5 (C-20), 42.7 (C-21), 76.6 (C-22), 22.4 (C-23), 64.5 (C-24), 16.1 (C-25), 16.8 (C-26), 25.4 (C-27), 29.7 (C-28), 32.8 (C-29), 20.0 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12-13]報(bào)道的soyasapogenol B 的數(shù)據(jù)基本一致。

化合物8：無(wú)色針晶 (丙酮), mp 212～213 ℃。EI-MSm/z198 [M]+, 183, 127, 109。1H-NMR (CDCl3, 400 MHz)δ: 12.61 (1H, s, -COOH), 9.21 (1H, s, -OH), 7.20 (2H, s, H-2, 6), 3.80 (6H, s, -OCH3×2)。13C-NMR (CDCl3, 100 MHz)δ: 120.4 (C-1), 106.9 (C-2), 147.5 (C-3), 140.3 (C-4), 147.5 (C-5), 106.9 (C-6), 167.3 (-COOH), 56.1 (-OCH3×2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的丁香酸的數(shù)據(jù)基本一致。

化合物9：無(wú)色針晶 (甲醇), mp 151 ℃。ESI-MSm/z: 533 [M+Na]+。1H-NMR (CD3OD, 400 MHz)δ: 7.71～7.73 (2H, m, H-2,6), 7.50 (1H, tt,J=2.4, 1.6 Hz, H-4), 7.40～7.42 (2H, m, H-3, 5), 7.23～7.30 (4H, m, H-12,13,15,16), 7.14～7.18 (1H, m, H-14), 4.32～4.37 (1H, m, H-8), 3.64 (2H, d, J=5.6 Hz, H-9), 3.02 (1H, dd,J=6.4, 6.0 Hz, H-10b), 2.85 (1H, dd,J=8.8, 8.4 Hz, H-10a)。13C-NMR (CD3OD, 100 MHz)δ: 136.0 (C-1), 128.3 (C-2), 129.4 (C-3), 132.5 (C-4), 129.4 (C-5), 128.3 (C-6), 170.4 (C-7), 55.0 (C-8), 64.3 (C-9), 38.0 (C-10), 140.0 (C-11), 130.3 (C-12), 129.4 (C-13), 127.3 (C-14), 129.4 (C-15), 130.3 (C-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道的N-苯甲?；?L-苯丙氨醇的數(shù)據(jù)一致。

致謝：質(zhì)譜和核磁數(shù)據(jù)分別由貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室王道平副研究員與張建新副研究員測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國(guó)植物志編委會(huì). 中國(guó)植物志：第40卷[M].北京: 科學(xué)出版社, 1994：195.

[2] 陳少鋒, 余勝民, 黃琳蕓, 等. 土甘草止咳祛痰作用研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2009, 20(11): 2691-2692.

[3] 郭力城, 楊東愛, 余勝民, 等. 土甘草藥理作用研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2010，21(1): 154-155.

[4] 楊立芳, 于 偉, 楊東愛, 等. 毛果魚藤藤莖的性狀與顯微鑒別[J]. 中藥材, 2006, 29(11): 1162-1164.

[5] 田 輝, 崔 健, 蔣嫦月, 等. 壯藥土甘草化學(xué)成分預(yù)試研究[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 15(2): 68-69.

[6] 張憲民, 李忠榮, 邱明華, 等. 魚藤的三個(gè)新三萜化合物[J]. 云南植物研究, 2002, 24(6): 787-791.

[7] 王 玎, 陳 剛, 喬 莉, 等. 地梢瓜果實(shí)化學(xué)成分的研究[J]. 中國(guó)藥物化學(xué)雜志, 2007, 17(2): 101-103.

[8] Wube A A, Hüfner A, Thomaschitz C,etal. Design, synthesis and antimycobacterial activities of 1-methyl-2-alkenyl-4(1H)-quinolones[J].BioorgMedChem, 2011, 19(1): 567-579.

[9] 季 改, 余 姝, 胡 文, 等. 緋紅南五味子莖的化學(xué)成分研究[J]. 中草藥, 2012, 43(5): 873-876.

[10] 張 龍, 張前軍, 康文藝, 等. 波葉山螞蝗化學(xué)成分研究[J]. 中成藥, 2012, 34(10): 1943-1945.

[11] 李傳寬, 張前軍, 黃鐘碧, 等. 餓螞蝗化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2010, 35(18): 2420-2423.

[12] 孫 琳, 李占林, 彭靜波, 等. 白車軸草化學(xué)成分的分離與鑒定[J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 27(1): 40-43.

[13] Ding P L, Hou A J, Chen D F. Three new isoprenylated flavonoids from the roots ofSophoraflavescens[J].JournalofAsianNaturalProductsResearch, 2005, 7(3): 237-243.

[14] 李 微, 陳發(fā)奎, 尹相武, 等. 大青葉的化學(xué)成分[J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2005, 22(1): 15-16.

[15] Zhang W W, Kong L Y. Chemical constituents in the introducedColeusforskohlii[J].ChinaJournalofChineseMateriaMedica, 2009, 34(16): 2060-2062.