寒地草莓幾種脫毒技術(shù)比較研究

龍照春，郭春華，高慶玉，安勝，孫曉春

(1.齊齊哈爾市園藝研究所，黑龍江齊齊哈爾161005；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué))

草莓是寒地特色果樹之一，它種植投資少見效快，是農(nóng)村農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中具有前景的項(xiàng)目。但由于草莓很容易感染多種病毒病，感染了病毒病的草莓果子一年比一年小、畸形，品質(zhì)差，葉子皺，生長緩慢，產(chǎn)量越來越低，并逐年加重，草莓的經(jīng)濟(jì)效益大幅度下降，嚴(yán)重地阻礙了草莓生產(chǎn)的發(fā)展，然而對病毒病目前還沒有藥劑可以防治，只有通過培育無病毒苗木用于栽培生產(chǎn)，因此研究脫毒技術(shù)具有重要意義。

1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)品種為感病嚴(yán)重的圓球品種，材料來源為東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝試驗(yàn)站果園。

2 試驗(yàn)方法

2.1 莖尖培養(yǎng)

6～7月份在田間隨機(jī)選取草莓莖尖，首先用自來水沖洗3～4遍。再用蒸餾水沖洗2～3遍，然后用70%酒精浸泡30s，0.1%的升汞浸泡8min左右，再用無菌水沖洗2遍，即可接種到生長培養(yǎng)基MS+1mg/L BA+0.2mg/L IAA上，培養(yǎng)2～4周，轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基MS+2mg/L BA+0.1mg/L IAA上，分化一定數(shù)量以后即可移到生根培養(yǎng)基MS+ 0.2mg/L IBA上進(jìn)行生根。

(1)不同取材長度的處理。將田間隨機(jī)取回的草莓莖尖，經(jīng)過殺菌處理以后，分別切取0.3、0.5、1、2、3mm 5個(gè)長度，接種到生長培養(yǎng)基上。

(2)不同取材次數(shù)的處理。將1、2、3mm長的莖尖接種以后，待長成試管苗時(shí)，再分別切取1、2、3mm長的莖尖，重復(fù)接種2～3次，比較不同取材次數(shù)對脫毒效果的影響。

(3)藥劑處理。將草莓莖尖切取1mm長，接種在添加不同濃度鹽酸四環(huán)素的生長培養(yǎng)基中。所用四環(huán)素為醫(yī)用鹽酸四環(huán)素，每升培養(yǎng)基分別添加0.5、1、2g藥劑。

2.2 花藥培養(yǎng)

5月末6月初，當(dāng)田間生長的圓球草莓花蕾直徑達(dá)到4～6mm時(shí)，隨機(jī)取回，然后用自來水沖洗2～3次，用70%酒精浸泡30～50s，用升汞浸泡8～9min，然后用無菌水充分沖洗，用鑷子取出花藥接種在添加不同激素濃度的培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，4周左右，將產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)移到添加不同激素濃度的LS培養(yǎng)基上進(jìn)行莖葉分化，整個(gè)培養(yǎng)溫度為25～28℃，光照時(shí)間為8h，光強(qiáng)為2000 lx，分化出莖葉以后，再轉(zhuǎn)移到MS+2mg/L BA+0.1mg/L IAA的分化培養(yǎng)中繼續(xù)分化，達(dá)到一定數(shù)量以后轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基MS +0.2mg/L IAA上進(jìn)行生根。

2.3 幼葉培養(yǎng)

將田間沒有展開的圓球幼葉，隨機(jī)取下后放入盛水的燒杯中，然后用自來水沖洗2～3次，再用蒸餾水沖洗2～3次，用70%酒精沖洗一次，用20倍漂白殺菌7～8min，用無菌水充分沖洗，然后用刀片切成3mm的方塊，接種到添加不同激素濃度的LS培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)和莖葉分化，比較不同激素濃度對愈傷組織的誘導(dǎo)及莖葉分化的影響。

2.4 莖尖愈傷組織的誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)

將莖尖切取0.5mm左右的長度接種在MS+2mg/L BA+0.5mg/L IAA的培養(yǎng)基上，4～6天在基部便產(chǎn)生大量的愈傷組織，再把愈傷組織切下來，重新接種到MS+2mg/L BA+0.5mg/L IAA的培養(yǎng)基上，即可分化出大量植株，最后轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基MS +0.2mg/L IBA上進(jìn)行生根。

2.5 加熱處理

將圓球的莖尖切取3mm長接種到生長培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成試管苗以后，再放在JT75-2型隔水式恒溫培養(yǎng)箱中，溫度分別為35±1℃和38±1℃，光照用日光臺燈，每天光照10h，光強(qiáng)為1000 lx，分別處理2～4周，每一處理取出后再分成兩組，一組直接轉(zhuǎn)移到生長培養(yǎng)基中，另一組再切取1mm長的莖尖接種到生長培養(yǎng)基上，成苗以后進(jìn)行脫毒效果的比較。

2.6 試管苗的移栽與管理

2月份，當(dāng)試管苗在生根培養(yǎng)基中生出大量白色新根時(shí)，栽植在溫室的播種箱中，箱的下部放上肥沃的土壤，上覆1cm左右的細(xì)沙，15～20℃的溫度下生長30～40天，即可移栽在花盆中，4月份，當(dāng)苗在花盆中長到具有5～6片成熟葉片時(shí)，進(jìn)行嫁接鑒定，檢驗(yàn)脫毒效果。

3 結(jié)論

經(jīng)過幾種脫毒方法的比較，結(jié)論為草莓脫毒最好的方法為花藥培養(yǎng)，因?yàn)榛ㄋ幣囵B(yǎng)可以100%脫毒，所以可以省去病毒鑒定的工序。其培養(yǎng)基為，愈傷組織誘導(dǎo)：LS+2mg/L BA+0.5mg/L NAA，誘導(dǎo)率可達(dá)92.8%，不定芽的誘導(dǎo)LS+2mg/L BA+0.3mg/L NAA，分化率10%，生根培養(yǎng)：MS+0.2mg/L IBA，生根率100%。

通過莖尖培養(yǎng)可以脫掉病毒，獲得無毒植株，但不是一般的莖尖培養(yǎng)都能脫毒，只有接種的莖尖小于0.5mm時(shí)，才能達(dá)到20%以上的脫毒效果。而且接種的莖尖牙越小脫毒效果越好，重復(fù)切取莖尖的次數(shù)越多，脫毒效果越好，莖尖培養(yǎng)與藥劑處理相結(jié)合對脫毒有一定效果，每升培養(yǎng)基添加0.5～2g鹽酸四環(huán)素均可達(dá)到20%的脫毒效果，莖尖培養(yǎng)與熱處理相結(jié)合比單獨(dú)莖尖培養(yǎng)脫毒效果好，單獨(dú)接種3mm長的莖尖沒有脫毒效果，但如果用38±1℃的溫度處理2周，即有20%脫毒，處理3周脫毒率可達(dá)60%，而且用38±1℃處理2周，再切取1mm長的莖尖接種脫毒率可達(dá)40%，而用35±1℃的溫度處理3～4周均沒有脫毒效果。因此，如果采用莖尖培養(yǎng)脫毒我們認(rèn)為應(yīng)切取0.3～0.5mm長的草莓莖尖接種，或者是用較大的材料接種培養(yǎng)成試管苗，再用38±1℃的溫度處理2周，然后再切取1mm長的莖尖培養(yǎng)，兩者均能達(dá)到一定的脫毒效果，但必須經(jīng)過病毒鑒定后，獲得無毒母株，才能用于生產(chǎn)。幼葉培養(yǎng)和莖尖愈傷組織途徑脫毒效果均為20%，與0.5mm長的莖尖培養(yǎng)效果差不多。