萬珂對腦缺血再灌注損傷的作用

薛 晶 李 麗 李 淞 戈亞平 牛曉立 付鐵娟

(吉林省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，吉林 長春 130021)

近年來研究發(fā)現(xiàn)蛋白酶體抑制劑可通過多種機制調(diào)控細胞周期、細胞分化、抗原提呈、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和凋亡等〔1～3〕。最近有研究發(fā)現(xiàn)蛋白酶體抑制劑還有明確的抑制炎癥反應(yīng)的作用，而腦缺血再灌注后腦組織局部過度的炎癥反應(yīng)是造成再灌注損傷的主要原因之一〔4，5〕。本實驗欲將其用于腦缺血再灌注方面的研究，探討其是否有腦保護作用。

1 材料與方法

1.1實驗動物模型及取材 選用雄性Wistar大鼠30只, 體重280～300 g,隨機分為假手術(shù)組、生理鹽水組、萬珂組各10只。參照Zea-Longa線栓法〔6〕制作大鼠大腦中動脈缺血模型,腦缺血2 h再灌注即刻給予萬珂0.2 mg/kg尾靜脈注射，對照組以等量生理鹽水尾靜脈注射，再灌注后24 h取材。每組5只大鼠麻醉灌注固定、取材，取視交叉后腦組織2 mm厚層面制作石蠟切片，連續(xù)切取同一層面5張切片，切片厚5 μm，用于檢測神經(jīng)細胞凋亡。每組另外5只動物麻醉后將鼠腦切去嗅腦、額極、小腦和部分低位腦干，剩余部分從前向后切成2 mm厚的腦片，放于2%TTC磷酸鹽緩沖液水浴30 min，正常組織為紅色，梗死組織為白色，用10%甲醛磷酸緩沖液固定。

1.2檢測方法 TUNEL法檢測神經(jīng)細胞凋亡，每只大鼠5張切片顯微鏡下選相同部位計數(shù)細胞核呈褐色的凋亡細胞，Motic Images Advanced 3.2 圖像分析系統(tǒng)測出各腦片正反面梗死面積取平均值，根據(jù)梗死面積和切片厚度計算出梗死體積占全腦體積的百分比。

2 結(jié) 果

2.1腦梗死體積 假手術(shù)組無梗死現(xiàn)象。TTC染色生理鹽水組及萬珂組均可見大腦中動脈供血區(qū)梗死灶,梗死體積百分比分別為(31.908±0.814)%和(24.086±0.823)%，兩者比較萬珂組梗死體積明顯縮小(t=15.10,P<0.01)。

2.2細胞凋亡 假手術(shù)組偶見凋亡細胞〔(2.98±0.37)個〕，生理鹽水組〔(150.95±3.95)個〕及萬珂組〔(31.24±2.52)個〕見大量細胞核呈褐色的凋亡細胞，但萬珂組凋亡細胞明顯減少，與其他兩組指標比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

萬珂具有分子量小、水溶性、高度選擇性、能穿透細胞膜、不能透過血腦屏障等特點〔7〕。本研究發(fā)現(xiàn)萬珂可抑制腦缺血再灌注后后缺血半暗帶的細胞凋亡，從而減少腦梗死體積，對腦缺血再灌注損傷具有保護作用。但萬珂主要因可以明顯誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細胞凋亡〔8，9〕而被批準廣泛用于臨床。

目前相關(guān)的研究表明蛋白酶體抑制劑的應(yīng)用導(dǎo)致細胞凋亡或避免凋亡有賴于不同的細胞及細胞的不同增殖階段，并且蛋白酶體抑制劑對正常細胞及腫瘤細胞誘導(dǎo)凋亡的作用劑量有明顯差異〔10〕。腫瘤細胞較正常細胞對PS-341敏感，且增殖活躍的細胞較靜止期細胞敏感。Drexler等〔11〕的體外實驗證實蛋白酶體抑制劑對于增殖期的血管內(nèi)皮細胞誘導(dǎo)凋亡的劑量是靜止期的340倍，推測對于處于活躍增殖期的細胞蛋白酶體抑制劑主要誘導(dǎo)細胞凋亡，對于已經(jīng)分化并且處于非分裂期的細胞蛋白酶體抑制劑無明顯誘導(dǎo)細胞凋亡的作用，表明蛋白酶體抑制劑很可能對腫瘤細胞具有選擇性，是一種能選擇性誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡而對正常細胞不損傷或損傷較少的抗腫瘤劑。另有實驗證實在前腦缺血中，降低蛋白酶體活性有助于對缺血核心區(qū)保護，可能因為腦缺血核心區(qū)有用的蛋白被降解，而蛋白酶體抑制劑正好可阻止這一過程，顯現(xiàn)出神經(jīng)保護作用〔12〕。有研究〔13〕報道，腦組織中微小管的分解可誘導(dǎo)細胞凋亡或壞死，蛋白酶體抑制劑可阻止體內(nèi)體外組織的華勒氏變性，穩(wěn)定軸突中微管的細胞骨架，減輕凋亡，可能因為腦缺血半暗帶內(nèi)早期有大量的細胞骨架被蛋白酶體水解，蛋白酶體抑制劑正好可對此產(chǎn)生拮抗，對腦缺血損傷有保護作用。

正常細胞中促凋亡和抗凋亡蛋白及其活性應(yīng)當是保持平衡的，當短壽的促凋亡蛋白如P53、Bax、P27由于短暫的蛋白酶體活性抑制而被推遲降解時，它們的絕對水平和活性就會增加；相反一些抗凋亡蛋白如Bcl-2，因有較長的半衰期，它們的水平和活性一般不會明顯受影響，這可能也是研究中發(fā)現(xiàn)應(yīng)用蛋白酶體抑制劑不僅能誘導(dǎo)細胞凋亡，還可以抑制細胞凋亡的原因，故蛋白酶體抑制劑可能是個雙刃劍，如何合理有效地利用是亟需攻關(guān)的課題，蛋白酶體抑制劑有腦保護作用，深入研究其與缺血性腦損傷之間的關(guān)系，有可能為臨床上更有效地干預(yù)缺血性腦損傷提供新的策略。

4 參考文獻

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