銅藻總萜提取物抗抑郁活性及作用機(jī)制

趙東海 李夢(mèng)璐 袁 臻 羅維蕓 顧麗霞

(吉林醫(yī)藥學(xué)院病理學(xué)教研室，吉林 吉林 132013)

銅藻是我國(guó)淺海植被的珍貴物種，主要分布于遼寧、浙江、福建、廣東等地，是藻膠工業(yè)的優(yōu)質(zhì)餌料，因富含有益的生物要素而被廣泛應(yīng)用到醫(yī)藥、食品、飼料和有機(jī)肥料中〔1〕。褐藻中含有大量的萜類(lèi)化合物，主要有倍半萜和二萜類(lèi)化合物〔2～4〕。有研究報(bào)道，從銀杏中分得的萜類(lèi)化合物能夠顯著增加大鼠紋狀體和邊緣系統(tǒng)多巴胺的含量，對(duì)多巴胺(DA)代謝有一定的抑制作用，表明萜類(lèi)化合物具有抗抑郁活性〔5，6〕。銅藻屬于褐藻類(lèi)，具有豐富的資源優(yōu)勢(shì)，但目前有關(guān)銅藻總萜提取物的抗抑郁作用研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文對(duì)總萜提取物抗抑郁活性進(jìn)行研究，為銅藻抗抑郁中藥研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1材料 雄性Balb/c小鼠(18～22 g)，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。自然晝夜光照，自由飲水、攝食，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 銅藻：采集于舟山市海域。鹽酸氟西汀(美國(guó)Lilly公司)用前用2%羧甲基纖維素鈉水溶液配制成1 g/L，備用；乙醇、羧甲基纖維素鈉等為分析純。

1.2檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.2.1銅藻總萜提取物的制備 銅藻總萜提取物由浙江海洋學(xué)院食品與藥學(xué)學(xué)院提供，制備工藝參照文獻(xiàn)〔7～11〕。將干燥的銅藻粉碎過(guò)80目篩，8倍量90%乙醇浸泡2 h后，超聲波輔助萃取30 min，80℃水浴提取2 h，連續(xù)提取3次，合并提取液，回收溶劑至浸膏，過(guò)濾，收集濾液。連續(xù)提取3次，合并濾液，蒸發(fā)至浸膏狀?？傒铺崛∥锝酄钗镔|(zhì)用2%羧甲基纖維素鈉溶液分別配制一定的濃度，備用。

1.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及藥品處理 取雄性小鼠100只，實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，隨機(jī)抽取50只分別納入空白組、鹽酸氟西汀、銅藻總萜提取物低、中、高劑量組(每組10只)。鹽酸氟西汀劑量為30 mg/kg；銅藻總萜提取物低、中、高劑量分別為100、200、400 mg/kg；空白組灌服同體積的2%羧甲基纖維素鈉水溶液，連續(xù)灌胃7 d，1次/d。于末次給藥后1 h進(jìn)行小鼠強(qiáng)迫游泳、懸尾實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠，分離小鼠下丘腦利用高效液相-電化學(xué)法(HPLC-ECD)檢測(cè)下丘腦5-羥色胺(HT)水平。

1.2.3小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 將小鼠放入XSC-小鼠恒溫游泳儀內(nèi)(水深10 cm、直徑34 cm的桶內(nèi)，水溫25℃±2℃)，觀察6 min內(nèi)小鼠游泳情況，統(tǒng)計(jì)小鼠后4 min內(nèi)游泳累積不動(dòng)時(shí)間(即小鼠停止掙扎或小鼠呈漂浮狀態(tài)、四肢有輕微動(dòng)作以保持頭部在水面)〔12〕。

1.2.4小鼠懸尾實(shí)驗(yàn) 距小鼠尾尖部約1 cm處用膠布貼于懸尾箱(30 cm×30 cm×25 cm)支架上，使小鼠呈倒掛狀態(tài)，其頭部離箱底約5 cm，1次懸掛2只小鼠，中間用隔板隔開(kāi)。懸掛時(shí)間為6 min，統(tǒng)計(jì)小鼠后4 min內(nèi)懸尾累積不動(dòng)時(shí)間(即小鼠停止掙扎不動(dòng)或無(wú)任何活動(dòng))〔13〕。

1.2.5小鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn) 于給藥前和末次給藥后1 h檢測(cè)。采用XZC-4小鼠自主活動(dòng)測(cè)定儀，將小鼠放入測(cè)定儀適應(yīng)5 min后開(kāi)始測(cè)定，以10 min 內(nèi)給藥前后的活動(dòng)次數(shù)之差為指標(biāo)，比較各組小鼠自主活動(dòng)強(qiáng)度。

1.2.6HPLC-ECD測(cè)定小鼠小腦(5-HT)水平 每100 mg 腦組織中加入200 μl 冰冷HClO4(0.4 mol/L)，冰浴超聲勻漿，避光4℃靜置60 min，離心20 min(4℃，4 500 r/min)，取上清，加入上清半量體積的混合液(檸檬酸鉀0.2 mol/L，K2HPO40.3 mol/L和 EDTA 0.2 mol/L)，震蕩混勻10 min，避光4℃靜置60 min，再次離心20 min(4℃，4 500 r/min)，取上清，HPLC-ECD測(cè)定5-HT水平。

2 結(jié) 果

2.1銅藻總萜提取物對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響 與空白組〔(147.6±14.8)s〕相對(duì)比，銅藻總萜類(lèi)提取物中、高劑量(400 mg/kg)能降低小鼠強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間〔(118.3±10.7)、(109.4±9.9)s〕(P<0.05)。低劑量組〔(135.7±13.4)s〕未顯示降低；鹽酸氟西汀組小鼠不動(dòng)時(shí)間〔(78.5±4.9)s〕明顯縮短(P<0.001)。

2.2銅藻總萜提取物對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響 與空白組〔(135.7±15.2)s〕比較，銅藻總萜提取物高、中、低劑量均能夠降低小鼠懸尾的不動(dòng)時(shí)間〔(98.7±8.6)、(107.8±9.4)、(109.4±10.4)s〕，并且隨著劑量增大，不動(dòng)時(shí)間減少越明顯，其中高劑量組，小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間減少最明顯。而對(duì)照藥鹽酸氟西汀組小鼠不動(dòng)時(shí)間〔(65.2±5.6)s〕明顯縮短(P<0.001)。

2.3銅藻總萜提取物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 與空白組〔(28±64)次〕比較，鹽酸氟西汀組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)〔(123±59)次〕顯著減少(P<0.001)，銅藻總萜提取物高劑量組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)〔(114±86)次〕明顯減少(P<0.01)，低中劑量組〔(46±74)、(88±39)次〕略減少(P<0.05)。

2.4銅藻總萜提取物對(duì)小鼠小腦5-HT含量的影響 與空白組〔(84±11.28)ng/g〕相比，銅藻總萜提取物高、中、低劑量組均能提高小鼠小腦5-HT水平〔(127±4.23)、(112±6.34)、(96±78.52)ng/g〕，并呈劑量依賴(lài)關(guān)系，其中銅藻總萜提取物中、高劑量組作用更顯著(P<0.01)，鹽酸氟西汀組也能明顯提高5-HT水平〔(158±9.65)ng/g〕(P<0.001)。

3 討 論

小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)〔12～14〕模型提供了一個(gè)無(wú)法回避的壓迫環(huán)境，實(shí)驗(yàn)中小鼠表現(xiàn)出來(lái)的不動(dòng)狀態(tài)，反映了一種被稱(chēng)之為“行為絕望和扭曲”或“對(duì)強(qiáng)壓環(huán)境適應(yīng)的失敗”狀態(tài)〔15〕。這兩種行為絕望模型對(duì)絕大多數(shù)抗抑郁藥敏感，被廣泛用于篩選和觀察抗抑郁藥物的。動(dòng)物在強(qiáng)迫這一應(yīng)激條件下，掙扎后出現(xiàn)絕望表現(xiàn)即不動(dòng)狀態(tài)，而抗抑郁劑可以減少動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間，提高對(duì)應(yīng)激的耐受性。隨著競(jìng)爭(zhēng)的加劇，抑郁癥發(fā)生與患病頻率已經(jīng)變得越來(lái)越高。而抑郁癥的病理生理機(jī)制迄今不明確，病理改變涉及神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫等多個(gè)系統(tǒng)，是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果。因此，從天然植物藥中尋找與研制具有良好抗抑郁作用的藥物已越來(lái)越受到學(xué)術(shù)界的關(guān)注。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明銅藻中總二萜能夠增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)激耐受性，減少絕望動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間，具有明顯的抗小鼠實(shí)驗(yàn)性抑郁作用。5-HT是腦內(nèi)重要的神經(jīng)遞質(zhì)，參與情感、睡眠、記憶及食欲等代謝活動(dòng)的調(diào)節(jié)〔16〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)銅藻總萜提取物各劑量組均能提高小鼠小腦5-HT水平，并呈劑量依賴(lài)關(guān)系。初步證實(shí)銅藻總萜提取物可能通過(guò)提高腦內(nèi)5-HT水平而發(fā)揮抗抑郁作用。

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