RP-HPLC法測定創(chuàng)灼膏中延胡索乙素的含量

周春華 白 冰 張 穎 趙 俞 馬 莉

（吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司，吉林 長春 130012）

RP-HPLC法測定創(chuàng)灼膏中延胡索乙素的含量

周春華 白 冰 張 穎 趙 俞 馬 莉

（吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司，吉林 長春 130012）

目的建立以高效液相色譜法測定創(chuàng)灼膏中延胡索乙素含量的方法。方法色譜柱為Khim-pack shimadzu C18柱，流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液（20∶80），流速為1 mL/min，檢測波長為280 nm。結(jié)果延胡索乙素濃度在5～50 μg/mL范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為98.0%（RSD=1.07%）。結(jié)論方法簡便易行，準(zhǔn)確率高，重現(xiàn)性好，為本品的質(zhì)量控制提供了可靠的方法。

高效液相色譜法；創(chuàng)灼膏；延胡索乙素；含量測定

創(chuàng)灼膏是以爐甘石，石膏、白及、冰片、蒼術(shù)、延胡索、防己、郁金、虎杖、地榆等藥材組成的中成藥，方中延胡索為本品的主要成分之一，具有活血、行氣、止痛等作用。本品以延胡索乙素為測定指標(biāo)，建立以高效液相色譜（HPLC）法測定延胡索中有效成分延胡索乙素的含量[1-3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：①高效液相色譜儀LC-2010A紫外檢測器（日本島津）；②高效液相色譜儀Agilent Technologies 1200 Series；③紫外分光光度計(jì)UV-2401PC（日本島津）；④Meltter AE240雙量程電子天平（梅特勒—托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥：對照品來源：延胡索乙素對照品（批號：110726-200711，規(guī)格：約20 mg）從中國藥品生物制品檢定研究院購入。試劑：乙腈、甲醇為色譜純；磷酸、氨水為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.2%磷酸溶液（20∶80）為流動相；檢測波長為280 nm，柱溫30 ℃，流速1 mL/min，理論板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備：精密稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每1 mL約含延胡索乙素20 μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備：取本品2 g，精密稱定，精密加甲醇-氨試液（20∶1）的混合溶液50 mL，稱定重量，冷浸1 h后加熱回流1 h，放冷，再濾過精密稱定，用甲醇-氨試液（20∶1）的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芤航猓D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.4 檢測波長選擇：精密稱取延胡索乙素對照品10.22 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，另取上述對照品溶液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。于200～400 nm波長下測定光譜圖，結(jié)果在280 nm處有最大吸收峰，故檢測波長選定為280 nm。

2.5 線性關(guān)系考察：分別量取對照品溶液適量，加甲醇分別制成每1 mL含5、10、20、30、50 μg的溶液，分別精密吸取上述對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程（960.73x-3.5698）和r值（r=0.9999），結(jié)果表明：延胡索乙素在5～50 μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系

2.6 專屬性試驗(yàn)：取按處方比例缺延胡索的陰性對照樣品，按含量測定項(xiàng)下方法測定HPLC色譜圖。同法測定延胡索乙素對照品及供試品的HPLC色譜圖。結(jié)果陰性對照樣品的色譜圖中，在延胡索乙素保留時間的相應(yīng)位置上無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾，此方法專屬性強(qiáng)。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，以供試品溶液中延胡索乙素的吸收峰面積的變化，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果峰面積值的RSD=1.18%，表明供試品溶液中延胡索乙素在12 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性：取本品同一批號樣品6份，按含量測定項(xiàng)下方法測定延胡索乙素的含量，結(jié)果延胡索乙素的平均含量為52.15 μg/g，RSD=1.16%，表明該含量測定方法重復(fù)性較好。

2.9 中間精密度試驗(yàn)：取同一批供試品，由不同人員，不同時間，使用不同高效液相色譜儀，按含量測定項(xiàng)下方法測定延胡索乙素含量。結(jié)果延胡索乙素的平均含量為52.06 μg/g RSD=1.26%，表明樣品含量測定方法具有良好的精密度。

2.10 回收率試驗(yàn)：取已知含量供試品6份，約1.0 g，分別置于6只錐形瓶中，按低、中、高濃度分別加入延胡索乙素對照品溶液，每一濃度2份，按含量測定項(xiàng)下方法測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果樣品中延胡索乙素的回收率平均可達(dá)98.0%以上，RSD＝1.07%，表明此方法準(zhǔn)確、可行。

2.11 樣品含量測定：取供試品5批，按含量測定項(xiàng)下方法操作，測定樣品中的延胡索乙素含量，結(jié)果含量分別為52.16、52.08、53.16、55.28、53.76 μg/g，平均含量為53.28 μg/g。

3 討 論

3.1 流動相的選擇

通過對甲醇-0.1%的磷酸（用三乙胺調(diào)PH6）（55∶45）、與乙腈-0.2%磷酸（用三乙胺調(diào)PH6）（20∶80）兩種流動相進(jìn)行比較，結(jié)果以乙腈-0.2%磷酸（用三乙胺調(diào)PH6）（20∶80）為流動相分析的樣品，有機(jī)溶劑用量少，分離度好，理論塔板數(shù)高。

3.2 提取方法的選擇

采用以下兩種方法對本品進(jìn)行提?。悍椒?：取本品，加甲醇-氨試液（20∶1）的混合溶液加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液；方法2：取本品，加甲醇-氨試液（20∶1）的混合溶液超聲處理1 h，放冷，濾過，濾液，作為供試品溶液，分別取上述兩種供試液測定含量，結(jié)果超聲提取的含量明顯低于回流提取樣品的含量，故回流提取方法作為本品的提取方法。

[1] 邱穎.RP-HPLC法測定十味活血丸中含量測定胡索乙素的含量[J].海峽藥學(xué),2012,24(2):41-42.

[2] 黃明立,黃東萍.RP-HPLC法測定復(fù)方金蒲片中延胡索乙素的含量[J].中國醫(yī)藥信息雜志,2010,17(8):45-46.

[3] 趙輝,方步武.高效液相色譜法測定金鈴子散中延胡索乙素的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2009,29(21):1886-1887.

R284；R917

B

1671-8194（2014）22-0089-01