老年乳腺癌患者癌組織活化型基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達(dá)

郭玉芳 蘇興利 霍 健 王 湘 王 爽

(西安醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，陜西 西安 710021)

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2是MMP家族(MMPs)中的一種，屬于明膠酶類〔1〕，能夠特異性地降解基底膜中的Ⅳ型膠原，在惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中具有重要作用〔2〕。MMP-2以酶原形式分泌，在細(xì)胞外被活化，只有活化型的MMP-2才能發(fā)揮其降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的作用〔3〕。本研究分析的方法分析老年及非老年乳腺癌患者癌組織中活化型MMP-2的分布。

1 材料和方法

1.1標(biāo)本來源 正常乳腺組織11例；乳腺癌標(biāo)本54例，未分型，分為老年組(≥65歲)21例，非老年組(<65歲)33例。標(biāo)本均來自西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科。

1.2備樣 取組織50 mg勻漿，加入0.2 ml提取緩沖液(1% Triton X-100，50 mmol/L Tris-HCl pH7.6,200 mmol/L NaCl，10 mmol/L CaCl2)，4℃過夜，離心10 000 r/min，10 min；取上清10 μl與上樣緩沖液5 μl混合備用。

1.3DQ明膠原位酶譜(美國Sigma公司)分析 新鮮乳腺癌標(biāo)本，切6 μm厚冰凍切片，空氣干燥30 min，在切片上加入含50 μg/ml的DQ明膠〔明膠帶有異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記，當(dāng)明膠被降解時發(fā)出綠色熒光〕，4℃孵育過夜，甘油封片，熒光顯微鏡下觀察。觀察后再將此切片做HE染色，用圖像分析儀掃描同一部位。熒光的強弱通過明膠酶分析試劑盒中提供的膠原酶進(jìn)行對比，分別用0.02 U/ml和2 U/ml的膠原酶及1×反應(yīng)緩沖液與50 μg/ml的DQ明膠混合，2 h后，在熒光顯微鏡下觀察到不同的熒光強度。以此為標(biāo)準(zhǔn)，加入1×反應(yīng)緩沖液不出現(xiàn)綠色熒光作為-，加入0.02 U/ml膠原酶的不完全降解DQ明膠出現(xiàn)較弱的熒光為+，加入2 U/ml膠原酶的完全降解DQ明膠出現(xiàn)較強的熒光為。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS12.0軟件進(jìn)行χ2檢驗。

2 結(jié) 果

綠色熒光出現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞，在乳腺癌癌組織中，癌巢部位均有較強的綠色熒光出現(xiàn)，在腫瘤邊緣癌組織中，也均有綠色熒光的表達(dá)，但是熒光表達(dá)的強弱不同。正常乳腺組織中2例熒光表達(dá)為+，9例為-；非老年組乳腺癌組織中29例熒光表達(dá)為，4例為+，與正常乳腺組比較顯著升高(P<0.001)；老年組乳腺癌組織中1例熒光表達(dá)為，5例為+，15例為-，與正常乳腺組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.69)。

3 討 論

MMP-2蛋白被認(rèn)為在腫瘤細(xì)胞侵襲穿過基底膜的過程中起關(guān)鍵作用。最近研究證明MMP-2的激活機制是由于酶原型的MMP-2(分子量72 kD)與無活性的MMP抑制因子(TIMP)-2、膜型MMP(MT-MMP)后形成MTl-MMP/TIMP-2/MMP-2三聚體復(fù)合物，通過細(xì)胞表面的MT-MMP對MMP-2進(jìn)行活化，它為癌瘤周圍基底膜的降解提供關(guān)鍵而有效的條件〔4，5〕。盡管大多數(shù)腫瘤細(xì)胞并非持續(xù)表達(dá)MMP-2的酶原，但可以利用宿主的間質(zhì)組織合成分泌的MMP-2酶原。MMP-2的活化與癌細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移相關(guān)，并在腫瘤細(xì)胞表面導(dǎo)致其活化〔6〕。其次，與青年人乳腺癌相比，老年人乳腺癌腫瘤的侵襲性較低,疾病發(fā)展較慢。從檢測腫瘤的生物學(xué)指標(biāo)看，雌激素受體(ER)陽性率較高，組織學(xué)分級和細(xì)胞周期中S-時相比值較低，人類表皮生長因子受體2(HER2/neu)表達(dá)下降。腫瘤的組織學(xué)類型中，黏液腺癌、乳頭狀癌的比例相對較高。老年人乳腺癌發(fā)展較年輕人緩慢，區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也較晚。這些都反映了老年人乳腺癌的生物學(xué)特性，惡性程度較青年人乳腺癌低，疾病發(fā)展較慢，侵襲性較低，腫瘤屬惰性的多。這對于臨床治療老年組乳腺癌有很強的指導(dǎo)意義。

4 參考文獻(xiàn)

1Kleiner DE，Stetler-Stevenson WG.Matrix metalloproteinases and metastasis〔J〕.Cancer Chemother Pharmacol，1999；43：S42-51.

2Chambers AF，Matrisian LM.Changing views of the role of matrix metalloproteinases in metastasis〔J〕.J Natl Cancer Inst，1997；89：1260-70.

3Kaori K，Taketoshi S，Takashi S，etal.Activation of pro-MMP-2 mediated by MT1-MMP in human salivary gland carcinomas：possible regulation of pro-MMP-2 activation by TIMP-2〔J〕.J Pathol，2004；202：403-11.

4Mook ORF，Van Overbeek C，Ackema EG，etal. In situ localization of gelatinolytic activity in the extracellular matrix of metastases of colon cancer in rat liver using quenched fluorogenic DQ-gelatin〔J〕.Histochemi Cytochem，2003；51(6)：821-9.

5Annette L，Claudia M-A，Clarissa A，etal.Cellular protein and mRNA expression patterns of matrix metalloproteinases-2，-3 and -9 in human breast cancer：correlation with tumour growth〔J〕.J Mol Histol，2004；35：443-55.

6Yoshifumi L，Akiko T，Noriko L，etal.Homophilic complex formation of MT1-MMP facilitates proMMP-2 activation on the cell surface and promotes tumor cell invasion〔J〕.EMBO J，2001；20(17)：4782-93.