妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中miR-185的表達(dá)及臨床意義

王淑芬

（南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,湖南 衡陽 421002）

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中miR-185的表達(dá)及臨床意義

王淑芬

（南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,湖南 衡陽 421002）

目的研究miR-185在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中的表達(dá)及其在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥中的作用。方法提取42例妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者及42例同期正常妊娠婦女外周血RNA，qRT-PCR檢測表達(dá)。結(jié)果miR-185在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中明顯高于正常妊娠婦女。血清miR-185水平與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者的年齡、孕周、經(jīng)產(chǎn)與否無關(guān)，但是與圍生兒預(yù)后相關(guān)。結(jié)論血清miR-185在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的診斷和圍生兒預(yù)后預(yù)測中發(fā)揮重要作用。

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥；miR-185；臨床意義

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥是發(fā)生在晚期妊娠的肝臟疾病,產(chǎn)后可治愈。發(fā)病最初伴有瘙癢,有時(shí)出現(xiàn)黃疸,血膽汁酸、膽紅素、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高。妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥有家族遺傳性,可能與種族、地理位置相關(guān)以及體內(nèi)雌激素和孕激素也發(fā)揮重要作用[1-2]。自從lin-4 and let-7這兩個(gè)miRNA被人們發(fā)現(xiàn),隨后又有很多miRNA被成功地鑒定出來。在人類疾病中,miRNA表達(dá)譜表現(xiàn)出獨(dú)特的疾病特性并能分類不同疾病類型。miRNA的獨(dú)特分類特性與很多疾病的結(jié)局也有明顯聯(lián)系,包括對治療的反應(yīng)、復(fù)發(fā)以及總體生存率的預(yù)測。研究發(fā)現(xiàn),miR-185在肺癌、膠質(zhì)瘤以及結(jié)腸癌等多種腫瘤和疾病中表達(dá)下調(diào),且抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長增殖與侵襲[3-5]。本研究旨在探討miR-185在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中的表達(dá)及在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥中的臨床作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

以2010年5月至2012年12月在我院診斷為妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的孕婦42例為研究組,年齡21～41歲。配對同期住院42例正常產(chǎn)婦作為對照,年齡20～42歲。

1.2 妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的診斷依據(jù)[2,3]

①中晚期妊娠有全身瘙癢,伴或不伴有黃疸,排除其他皮膚疾病或藥敏性皮炎；②血清膽汁酸≥16 μmol/L,或者血清丙氨酸和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶＞31 U/L；③分娩后癥狀及體征消失；④排除其他肝臟疾病。

1.3 外周血RNA提取及miRNA檢測

利用RNA抽提試劑盒提取5ml外周血的RNA存于-80 ℃。逆轉(zhuǎn)錄RNA 1μg。16 ℃30 min,42 ℃ 30 min,85 ℃ 10 min,4 ℃ 10 min,-20 ℃保存。qRT-PCR檢測,置于qRT-PCR儀內(nèi),95.0 ℃,3 min；95.0 ℃, 12 s；62.0 ℃,35 s,40個(gè)循環(huán)；熔解曲線分析從62.0 ℃開始至95.0℃停止。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS13.0軟件,采用t檢驗(yàn),P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 miR-185在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者及正常妊娠婦女外周血的表達(dá)

qRT-PCR結(jié)果表明,42例妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血清中miR-185的表達(dá)為對照組的（0.62±0.14）倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 血清miR-185水平與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者臨床參數(shù)的關(guān)系

血清miR-185在孕周≥35的患者miR-185表達(dá)為（0.56±0.14）倍,＜35的患者表達(dá)為0.77±0.24倍；年齡≥28歲妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中的表達(dá)為對照組的（0.71±0.11）倍,＜28歲患者miR-185的表達(dá)為（0.59±0.14）倍；經(jīng)產(chǎn)婦及未產(chǎn)婦中的表達(dá)分別為（0.66±0.13）倍和（0.58±0.14）倍,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示血清miR-185與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者的年齡、孕周、經(jīng)產(chǎn)與否及胎數(shù)無關(guān)（P＞0.05）。血清miR-185在圍生兒正常的妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中表達(dá)為（0.72±0.15）倍,在有圍生兒早產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)的妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中的表達(dá)為（0.24±0.08）倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討 論

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥在不同國家對圍生兒的影響不一樣。妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥發(fā)病機(jī)制研究已取得了一定進(jìn)展,但是仍不十分明確。miRNAs包含19-25個(gè)核苷酸,它是一類非編碼的小分子單鏈RNAs,具有高度保守性、時(shí)間和組織特異性。通過與靶基因mRNA完全或不完全地堿基配對,RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物可降解靶mRNA或抑制翻譯,并且在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。miRNAs廣泛存在于真核生物中,調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和凋亡。特定的miRNAs在不同的腫瘤和不同的階段高表達(dá)或低表達(dá),這意味著與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后具有一定相關(guān)性[6]。但無研究表明miRNA與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥發(fā)病相關(guān)。本研究通過檢測血清中miR-185的表達(dá)分析其在正常妊娠婦女和妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中的表達(dá)差異。結(jié)果表明,血清miR-185水平在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中明顯下調(diào)。隨后我們分析了miR-185與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者臨床參數(shù)的關(guān)系。miR-185與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者的年齡、孕周、經(jīng)產(chǎn)與否無關(guān),但與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者圍生兒預(yù)后相關(guān),圍生兒正常的妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者miR-185的水平明顯低于圍生兒早產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)的妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者的表達(dá)。因此,血清miR-185的表達(dá)可作為妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥圍生兒預(yù)后預(yù)測的潛在靶點(diǎn)。

[1] Hand NJ,Horner AM,Master ZR,et al.MicroRNA profiling identifies miR-185 as a regulator of disease-associated pathways in experimental biliary atresia[J].J Pediatr Gastroenterol Nutr,2012,54(2):186-192.

[2] Pathak B,Sheibani L,Lee RH.Cholestasis of pregnancy[J].ObstetGynecol Clin North Am,2010,37:269-82.

[3] Tang H,Wang Z,Liu X,et al.LRRC4 inhibits glioma cells growth and invasion by miR-185 mediating pathway[J].Curr Cancer Drug Targets,2012,12(8):103210-42.

[4] Zhang Z,Tang H,Wang Z,et al. MiR-185 Targets the DNA Methyltransferases 1 and Regulates Global DNA Methylation in Human Glioma[J].Mol Cancer,2011,10(1):124.

[5] 唐海林,鄧敏,廖前進(jìn),等.結(jié)腸癌組織中miR-185的表達(dá)及其臨床意義[J].中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志,2011,39(5):17-18.

[6] Ghanta KS,Li DQ,Eswaran J,et al.Gene profiling of MTA1 identifies novel gene targets and functions[J].PLoS One.2011,6(2): e17135.

R714.7

B

1671-8194（2014）25-0253-02