支原體肺炎補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)測(cè)定及臨床意義

劉方鶴 曹珍珍 張海雁 張祎

支原體肺炎是由肺炎支原體引起的一種常見(jiàn)病，多發(fā)于秋冬季，受累人群主要是18歲以下的兒童和青少年。支原體肺炎有時(shí)臨床癥狀十分嚴(yán)重，甚至出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀或造血功能障礙，及時(shí)做出診斷并給予大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素治療療效甚佳。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)應(yīng)用最為廣泛，但其敏感性與采血時(shí)機(jī)的早晚有關(guān)，通常發(fā)病10 d以后才會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。選取支原體肺炎患者30例補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)臨床分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 30例肺炎支原體肺炎患者男20例，女18例。年齡7個(gè)月～43歲，平均19歲，發(fā)熱6例，咳嗽21例，胸痛2例，乏力、懶動(dòng)、心慌為主要表現(xiàn)者1例。全部患兒均行胸部X線檢查，支氣管肺炎或肺炎29例，胸腔積液1例，肺不張1例。

1.2方法

1.2.1溶血素滴定 將溶血素用BBS(巴比妥-巴比妥鈉緩沖液)稀釋成1 ∶ 100，然后再稀釋成1 ∶ 1000～1 ∶ 10000共8個(gè)稀釋度。溶血素單位是固定補(bǔ)體用量測(cè)定溶解一定量綿羊紅細(xì)胞所需的最小溶血素量(MHD)，作為一個(gè)單位，以上結(jié)果表示0.1 ml 1 ∶ 4000的溶血素為一個(gè)溶血單位，在正式試驗(yàn)中一般使用2個(gè)溶血單位，即1 ∶ 2000稀釋。

1.2.2補(bǔ)體滴定 加入不同量的用BBS稀釋的1 ∶ 60補(bǔ)體，再加抗原和正常抗原(如用已知抗體測(cè)定未知抗原，則改加抗體和正常抗體)，目的是觀察這些試劑對(duì)補(bǔ)體及溶血系統(tǒng)的影響。致敏綿羊紅細(xì)胞在臨用前15 min配制，即將2單位溶血素與等體積2%羊血細(xì)胞混勻，放37℃ 15～30 min即可[1]。

1.2.3抗原、抗體的效價(jià)滴定(方陣滴定) 若抗原、抗體來(lái)源于人或動(dòng)物血清，在滴定前先作1 ∶ 2稀釋?zhuān)?6℃滅活30 min。將抗原、抗體分別用BBS進(jìn)行稀釋?zhuān)瑥? ∶ 4直到1 ∶ 512。按表將已稀釋的抗原和抗體各0.1 ml加入相應(yīng)管中。各管內(nèi)加入補(bǔ)體0.2 ml，搖勻，4℃過(guò)夜，37℃ 30 min，每管加致敏血細(xì)胞(在加入前15～30 min將溶血素和2%SRBC等量混合)0.2 ml，搖勻，37℃ 30 min，觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

補(bǔ)體對(duì)照含有2.0和1.5個(gè)單位補(bǔ)體對(duì)照管應(yīng)完全溶血，1.0個(gè)單位補(bǔ)體對(duì)照管應(yīng)部分溶血或接近完全溶血，而0.5個(gè)單位補(bǔ)體對(duì)照管應(yīng)不溶血。陰性血清對(duì)照各稀釋倍數(shù)管均完全溶血。陽(yáng)性血清對(duì)照前后每次陽(yáng)性效價(jià)一致。全部試驗(yàn)管皆為完全溶血，報(bào)告陰性。如試驗(yàn)管不溶血，而正?？乖虰BS對(duì)照管完全溶血，報(bào)告陽(yáng)性，并同時(shí)寫(xiě)明效價(jià)，若試驗(yàn)管和正?？乖芫蝗苎?，可能是標(biāo)本抗正?？乖粼囼?yàn)管、正?？乖虰BS對(duì)照管都不溶血，則可能標(biāo)本有抗補(bǔ)體現(xiàn)象。

3 討論

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)是利用補(bǔ)體能與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合的特性設(shè)計(jì)的一種血清學(xué)反應(yīng)，當(dāng)抗原-抗體反應(yīng)后不形成肉眼可見(jiàn)的沉淀物或凝集塊時(shí)，亦可根據(jù)是否結(jié)合(固定或消耗)了補(bǔ)體的以溶血反應(yīng)為指標(biāo)來(lái)判斷反應(yīng)系統(tǒng)中有無(wú)相應(yīng)的抗原-抗體發(fā)生反應(yīng)。在正式試驗(yàn)中，先將定量補(bǔ)體加入待測(cè)系統(tǒng)中，使抗原-抗體有優(yōu)先結(jié)合補(bǔ)體的機(jī)會(huì)，如果抗原-抗體相對(duì)應(yīng)，補(bǔ)體被固定，沒(méi)有剩余的補(bǔ)體與指示系統(tǒng)反應(yīng)，不溶血，為陽(yáng)性反應(yīng)，反之則陰性(溶血)，也可有不同程度的溶血現(xiàn)象發(fā)生。據(jù)此可推知抗原或抗體的效價(jià)。如果反應(yīng)系統(tǒng)中存在待測(cè)抗體或抗原，抗原抗體反應(yīng)后與結(jié)合補(bǔ)體，再加入指示系統(tǒng)，此時(shí)補(bǔ)體已耗盡而不出現(xiàn)溶血反應(yīng)，為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽(yáng)性，反之則會(huì)出現(xiàn)溶血，為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陰性[2]。定量補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是將抗體或抗原作不同稀釋后按上述步聚操作，各試劑必須準(zhǔn)確定量，尤其是補(bǔ)體用量應(yīng)精確計(jì)算。

CFF是一個(gè)經(jīng)典的方法，雖操作較繁，但具有高度的特異性和較高的敏感性，同時(shí)參與反應(yīng)的抗原、抗體純度要求不高，不需要特殊設(shè)備，至今仍是一個(gè)比較實(shí)用的方法，該方法廣泛應(yīng)用于病毒的血清學(xué)診斷[2]。特別指出在病毒性疾病的流行病學(xué)調(diào)查中，可根據(jù)補(bǔ)體結(jié)合抗體在體內(nèi)維持時(shí)間不超過(guò)一年的特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)某人為抗體陽(yáng)性時(shí)，可表明某人在最近一年內(nèi)感染此病，一般臨床檢驗(yàn)以雙份血清效價(jià)差別4倍以上為陽(yáng)性。

[1] 謝國(guó)艷,高志生,郁淼,等.肺炎支原體檢測(cè)方法的評(píng)價(jià).世界感染雜志,2005,5(5):444.

[2] 魏成軍,蔣福國(guó),劉德美,等.呼吸道感染肺炎支原體檢測(cè)1786例分析.中國(guó)誤診學(xué)雜志,2006,6(21):4207.