鹽酸克倫特羅ELISA法檢測(cè)質(zhì)量控制策略

張 健張 孟趙京紅*

（1 長(zhǎng)春市食品化妝品監(jiān)督所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2 長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130012；3 吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春130012）

鹽酸克倫特羅ELISA法檢測(cè)質(zhì)量控制策略

張 健1張 孟2趙京紅3*

（1 長(zhǎng)春市食品化妝品監(jiān)督所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2 長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130012；3 吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春130012）

目的探討ELISA法檢測(cè)鹽酸克倫特羅的質(zhì)量控制策略。方法通過(guò)檢測(cè)分析大量樣品檢驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果，總結(jié)鹽酸克倫特羅ELISA法檢測(cè)質(zhì)量控制策略。結(jié)果敘述了鹽酸克倫特羅ELISA法檢測(cè)整個(gè)過(guò)程中需要提高、改善的問(wèn)題，說(shuō)明了ELISA法檢測(cè)質(zhì)控中需要解決的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題及注意事項(xiàng)。結(jié)論有效的控制策略及改進(jìn)措施能提高鹽酸克倫特羅檢測(cè)質(zhì)量，預(yù)防漏檢及誤檢等問(wèn)題的發(fā)生，為人民的食品安全做出貢獻(xiàn)。

鹽酸克倫特羅；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；質(zhì)量控制；策略

鹽酸克倫特羅，俗稱“瘦肉精”，除作為擬腎上腺素類藥物治療疾病以外，其最重要的作用是加快肌肉生長(zhǎng)速度，使動(dòng)物瘦肉含量相對(duì)增加，常被應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)，將其加入飼料后促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)發(fā)育。然而，鹽酸克倫特羅代謝慢，使用后易殘留在畜禽體內(nèi)，若人食用此類畜禽，會(huì)導(dǎo)致積蓄中毒，嚴(yán)重可危機(jī)生命。所以，為有效維護(hù)人民的健康安全，對(duì)該藥高效的檢測(cè)方法必不可少。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）具有檢驗(yàn)速度快、成本低、設(shè)備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于鹽酸克倫特羅的檢測(cè)，但若此法操作過(guò)程中出現(xiàn)不當(dāng)，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)、重復(fù)性降低，將嚴(yán)重破壞檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性[1]。因此，為提高檢測(cè)質(zhì)量，嚴(yán)格的控制策略不容忽視。本文就ELISA法檢測(cè)鹽酸克倫特羅的質(zhì)量控制策略總結(jié)如下。

1 提高相關(guān)人員職業(yè)素質(zhì)[2]

1.1 管理人員。盡管管理人員不直接參與ELISA法檢測(cè)試驗(yàn)，但其所具備的管理能力是提高檢測(cè)質(zhì)量的必要條件。管理人員要根據(jù)相關(guān)知識(shí)建立系統(tǒng)化的質(zhì)量控制體系，嚴(yán)格規(guī)定各人員職責(zé)以及任務(wù)要求，不放過(guò)任何薄弱環(huán)節(jié)，高效管理檢測(cè)過(guò)程，提高檢測(cè)質(zhì)量。

1.2 樣本采集及檢測(cè)人員。檢測(cè)需要嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，因此所有人員都要接受全面的崗前培訓(xùn)、效績(jī)考核，用以提高相關(guān)職業(yè)素質(zhì)，增強(qiáng)對(duì)工作的認(rèn)真程度。一般來(lái)講，鹽酸克倫特羅試驗(yàn)的樣品有血清、肝臟、尿液及畜禽飼料等，這要求樣品采集人員應(yīng)具備極高的專業(yè)素質(zhì)，對(duì)采集目標(biāo)具有較強(qiáng)的敏感性，能準(zhǔn)確選擇樣品，獨(dú)立分類采集樣品，操作熟練快速，做到樣品不遺漏、無(wú)雜質(zhì)、樣品間無(wú)污染。而樣品檢測(cè)人員要熟練掌握ELISA法檢測(cè)的過(guò)程，嚴(yán)格按照規(guī)程操作，并且能夠用專業(yè)知識(shí)解釋檢測(cè)結(jié)果以及解決在實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的各類問(wèn)題，提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。

2 完善樣品采集及制備過(guò)程[3，4]

2.1 樣品采集過(guò)程。樣品采集室由于畜禽的污染環(huán)境質(zhì)量會(huì)相對(duì)惡劣，因此要嚴(yán)格控制操作過(guò)程，避免樣品遭到污染，影響監(jiān)測(cè)結(jié)果。同時(shí)，要注意天氣影響，氣溫過(guò)高時(shí)，樣品采集后要立即放于低溫箱中，保存一般不要超過(guò)1周，若超過(guò)1周要采取冷凍處理，在使用時(shí)在溶解，用以避免變質(zhì)導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性，干擾監(jiān)測(cè)質(zhì)量。

2.2 樣品制備過(guò)程。尿液在除雜后、離心后可直接用于試驗(yàn)，而體內(nèi)組織以及飼料等樣品要粉碎后，做好全面的預(yù)處理，對(duì)粉碎程度及溶液含量要嚴(yán)格控制，同時(shí)要徹底離心，防止樣品中有血凝塊、纖維蛋白、血細(xì)胞懸浮，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3 管理ELISA法檢測(cè)室條件以及操作設(shè)備

3.1 實(shí)驗(yàn)室條件控制。檢測(cè)室良好的操作條件是一切質(zhì)量控制的前提，只有好的實(shí)驗(yàn)條件才能保證各項(xiàng)檢測(cè)順利進(jìn)行。首先，室內(nèi)溫度、濕度都能影響檢測(cè)結(jié)果，一般溫度要控制20～23 ℃，濕度為70%左右，并保證其變化平衡；其次，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行消毒，使空氣中各元素含量達(dá)標(biāo)，并要注意Cl-含量，其過(guò)高會(huì)造成ELISA結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性，所以不要使用含Cl-的消毒劑；再次，實(shí)驗(yàn)室操作臺(tái)要避免陽(yáng)光直射，揮發(fā)及過(guò)高的溫度會(huì)對(duì)結(jié)果造成一定影響，同時(shí)陽(yáng)光可影響抗原、抗體活性，降低檢測(cè)準(zhǔn)確率；最后，實(shí)驗(yàn)室的水質(zhì)也要實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，去離子水現(xiàn)用現(xiàn)配，確保不含Cl-及其他無(wú)關(guān)雜質(zhì)。

3.2 儀器設(shè)備管理。一定要確保儀器設(shè)備功能良好。ELISA法檢測(cè)的儀器主要包括移液器、酶標(biāo)儀、水浴箱、洗板機(jī)等，移液器要定期到相關(guān)部門檢定，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)也要常用蒸餾水稱量法校準(zhǔn)，出現(xiàn)異常要及時(shí)更換或修理；酶標(biāo)儀要注重光學(xué)維護(hù)，防止濾光片發(fā)霉；嚴(yán)格控制水浴箱溫度，定期進(jìn)行溫度校準(zhǔn)，指示溫度有誤差時(shí)，可加用溫度計(jì)；洗板機(jī)使用時(shí)要進(jìn)行調(diào)試，根據(jù)不同要求規(guī)定相關(guān)參數(shù)，并保證管道內(nèi)無(wú)氣泡。

4 選擇合適的ELISA試劑盒

試劑盒的選擇關(guān)系到試驗(yàn)的準(zhǔn)確性、靈敏度，所以一定要選擇優(yōu)質(zhì)的ELISA試劑盒。可多次操作后選擇穩(wěn)定性最好的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)，并注意觀察試劑盒是否完整，生產(chǎn)批號(hào)以及使用期限，注意不要將不同批號(hào)產(chǎn)品混用。同時(shí)也要保證試劑使用時(shí)再取出、取出后立即使用、使用后馬上收好，用以減少試劑中酶絡(luò)合物的失活。一些試劑盒可能出現(xiàn)分裝錯(cuò)誤，在檢測(cè)前一定要做好陽(yáng)性、陰性對(duì)照試驗(yàn)，如若出現(xiàn)異常，要立即重檢。

5 控制ELISA試驗(yàn)操作過(guò)程[5]

ELISA試驗(yàn)操作過(guò)程是整個(gè)檢測(cè)質(zhì)量控制的關(guān)鍵，是提高試驗(yàn)質(zhì)量的核心。該試驗(yàn)過(guò)程一般包括加樣、溫育、洗滌、顯色、結(jié)果判定等過(guò)程，每一步操作都要注意。

5.1 加樣：用加樣器加樣要將樣品加入ELISA板孔下部，并緩慢吸出，緩慢加入，角度垂直，速度均勻，用以預(yù)防氣泡及飛濺，也不要使加樣器接觸板孔壁。同時(shí)，要注意吸頭的及時(shí)更換，每次加標(biāo)品都要用新吸頭，使用過(guò)的吸頭也要放入指定位置丟棄，不要重復(fù)使用，污染樣品。

5.2 溫育：溫度對(duì)抗原抗體結(jié)合速度影響很大，所以一般用水浴箱使受熱均勻，同時(shí)，使用水浴箱也可避免受熱不均導(dǎo)致的邊緣效應(yīng)。將ELISA板底貼于水面，時(shí)間要以水浴溫度上升到指定溫度開始計(jì)算。在板孔上方覆蓋貼封紙，防止孔內(nèi)成分揮發(fā)及雜質(zhì)進(jìn)入。

5.3 洗滌：分離酶標(biāo)物及抗原抗體復(fù)合物需要洗滌，若洗滌不徹底將導(dǎo)致顯色不明顯，干擾檢測(cè)結(jié)果，所以要嚴(yán)格控制洗滌過(guò)程，用以提高檢測(cè)質(zhì)量。首先，要保證不同洗滌劑分開使用，避免混合亂用；其次，洗滌劑用量要適宜，不要不夠，也不要過(guò)多，用量少會(huì)造成洗滌不完全，用量大會(huì)使液體飛濺，導(dǎo)致板間相互干擾；再次，洗板機(jī)洗滌要保證吸干孔內(nèi)液體，若有殘留要人工再清洗；最后，每次洗滌結(jié)束后，要用高效的吸水紙將殘留液吸干。

5.4 顯色：在室溫下，試劑盒的顯色時(shí)間一般在15～30 min，為使催化反應(yīng)徹底，要將溫度控制在20～25 ℃、反應(yīng)20 min以上，同時(shí)，要從第1個(gè)加顯色液的孔開始計(jì)算反應(yīng)時(shí)間。值得注意的是，在顯色前可事先檢測(cè)樣品溶液的有效性，若異常，表示樣品變質(zhì)，無(wú)法檢測(cè)，要重新實(shí)驗(yàn)。顯色液滴加完后，加終止液使反應(yīng)結(jié)束，其滴加速度要同于顯色液滴加速度。

5.5 結(jié)果判定：終止反應(yīng)后要放置一定時(shí)間再判定，穩(wěn)定檢測(cè)結(jié)果。同時(shí)，必須要將板用吸水紙吸干后再讀數(shù)，用以保護(hù)光片，提高讀數(shù)準(zhǔn)確性。在使用酶標(biāo)儀時(shí)要注意濾光片位置及波長(zhǎng)的調(diào)節(jié)，用雙波長(zhǎng)測(cè)定，并排除容器損害干擾。然后，根據(jù)試劑盒上的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行辨別。

6 加強(qiáng)檢測(cè)后的質(zhì)量控制

檢測(cè)結(jié)果要與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行嚴(yán)格比對(duì)，技術(shù)人員要根據(jù)相關(guān)經(jīng)驗(yàn)排除假陽(yáng)性的結(jié)果，提高最終檢測(cè)結(jié)論的準(zhǔn)確性，并保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性及重現(xiàn)性。

7 結(jié) 語(yǔ)

ELISA檢測(cè)因其敏感性高、檢測(cè)成本低、抗原制備容易及結(jié)果判定客觀被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各領(lǐng)域。鹽酸克倫特羅的ELISA檢測(cè)[6]是將含有針對(duì)于鹽酸克倫特羅抗體的雙抗體種植在微孔板上，通過(guò)溫育、洗滌抗體，加入酶標(biāo)抗原及樣品抗原，使抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合，進(jìn)而判斷有無(wú)受檢樣品存在的免疫檢測(cè)方法。其結(jié)果判定方法為：與酶標(biāo)抗原結(jié)合的抗原抗體復(fù)合物處理后顯色，而與鹽酸克倫特羅結(jié)合成的抗原抗體復(fù)合物處理后不顯色，且顯色深淺與鹽酸克倫特羅含量負(fù)相關(guān)，再將顏色與標(biāo)準(zhǔn)孔顏色比較用于定性，分光光度計(jì)測(cè)量吸光度用于定量。然而，在實(shí)際操作中，ELISA法檢測(cè)若操作不當(dāng)，易出現(xiàn)各種干擾現(xiàn)象，嚴(yán)重影響檢測(cè)質(zhì)量，造成結(jié)果錯(cuò)誤判定，因此，為提高檢測(cè)質(zhì)量，有效的鹽酸克倫特羅ELISA法檢測(cè)質(zhì)量控制策略必不可失。本文介紹的質(zhì)量控制策略是結(jié)合操作及文獻(xiàn)總結(jié)出的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)，這表明，ELISA法檢測(cè)過(guò)程中要注重全局，不放過(guò)任何細(xì)節(jié)，既要求人員工作認(rèn)真、專業(yè)，也要保證各類條件、設(shè)備符合標(biāo)準(zhǔn)，以加強(qiáng)鹽酸克倫特羅的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)水平，為社會(huì)食品安全做出貢獻(xiàn)。

[1] 吳正銅.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用中的質(zhì)量控制[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床2013,10(9):1147.

[2] 范海麗.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程中的質(zhì)量控制[J].解放軍醫(yī)藥雜志2011,23(5):51.

[3] 余紅梅,石慧花.“瘦肉精”ELISA檢測(cè)過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題的分析[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2012,3(3):84.

[4]謝淵.酶聯(lián)免疫診斷試劑的質(zhì)量控制[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng),2012,22(6):1562.

[5] 周艷萍.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)法的質(zhì)量控制[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 2009,6(14):1206.

[6] 李華瑋,李巧枝,衛(wèi)麗,等.ELISA 檢測(cè)鹽酸克倫特羅殘留時(shí)的問(wèn)題及控制對(duì)策[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,7(6):144.

R9

A

1671-8194（2014）34-0379-02

*通訊作者