茯苓化學成分、質量控制和藥理作用研究進展

張曉娟，左冬冬，范越

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040;2．黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

茯苓為多孔菌科臥孔屬真菌茯苓的菌核，《本經(jīng)》和《唐新修本草》稱茯苓為“茯菟”;《史記》稱其為“茯靈”;《名醫(yī)別錄》稱其為“茯神”;《廣西中藥志》稱其為“松木屬”、“松苓”。具滲濕利水，益脾和胃，寧心安神之功效，有“十藥九茯苓”之說?！侗窘?jīng)》:“味甘平。主胸脅逆氣，憂恚驚恐，心下結痛，寒熱煩滿咳逆，口焦舌干，利小便。久服安魂養(yǎng)神，不饑延年。”《唐新修本草》:“味甘，平，無毒。主胸脅逆氣，憂恚、驚邪、恐悸，心下結痛，寒熱，煩滿，咳逆，止口焦舌干，利小便，止消渴，好唾，大腹淋瀝，膈中淡水，水腫淋結，開胸腑，調臟氣，伐腎邪，長陰，益氣力，保神守中。久服安魂魄、養(yǎng)神、不饑、延年?！本哂锌鼓[瘤、抗纖維化、抗炎、抗氧化、免疫調節(jié)、抑菌等多方面的藥理作用［1－5］。筆者將近幾年茯苓化學成分和質量控制和藥理作用方面的研究進行綜述，為今后茯苓的進一步研究奠定基礎。

1 化學成分

茯苓化學成分主要為多糖和三萜類成分、還含有樹膠、蛋白質、脂肪酸、甾醇等成分［6－7］，三萜類成分是茯苓中發(fā)揮利尿、鎮(zhèn)靜作用的主要成分，從茯苓三萜類成分的環(huán)內雙鍵類型上可分為8－脂肪酸位雙鍵型羊毛甾烷型三萜和7，9(11)－異環(huán)雙鍵型羊毛甾烷型三萜二種。茯苓的水不溶性多糖成分，經(jīng)化學修飾后，具有非常好的抗腫瘤作用。

韓小娟等［8］應用HPLC－DAD－ESI－MSn方法鑒定茯苓中的三萜類成分。色譜條件:Hedera ODS－2色譜柱(250mm ×4．6mm ID，5μm)柱，流動相為乙腈－水(0．1% 甲酸)，流速 1．0mL/min，柱溫 30℃，二極管陣列(DAD)和電噴霧質譜(ESI－MSn)聯(lián)合檢測。結果從茯苓中鑒定了茯苓酸、5－羥基－3－差向去氫土莫酸、5α，8α－peroxide－h(huán)ydrotumu losic acid、依布里酸、3β，16α－二羥基－羊毛甾－8，24－二烯－21－酸、6α－羥基去氫茯苓酸、土莫酸、3β－羥基－羊毛甾－7，9(11)，24－三烯－21－酸甲酯、茯苓酸甲酯、3β－乙酰氧基－16α－羥基－羊毛甾－8，24－二烯－21－酸、3β－羥基－羊毛甾－7，9(11)，24－三烯－21－酸、3β－羥基－羊毛甾－8，24－二烯－21－酸、去氫依布里酸13個化合物，推測了8個三萜類化學成分?？梢姂肏PLC－DAD－ESI－MSn方法能簡單、快速地鑒定茯苓中的三萜成分。

楊丹等［9］采用硅膠柱色譜法進行成分分離，用NMR、質譜等波譜學方法對茯苓皮中的化學成分進行了結構鑒定。結果分離并鑒定了7個化合物，分別biemnasterol(1)，octadecanoicacid(2)，triacontanol(3)，octacosyl acid(4)，pentacosanoic acid(5)，β－sitosterol(6)，daucosterol(7)。

王帥等［10］采用稀乙醇提取，用硅膠、反相、凝膠等各種柱色譜法，以及結晶法進行分離純化，用紫外光譜、核磁共振、質譜等各種光譜波譜技術對分離得到的化合物進行結構鑒定。結果從茯苓中分離得到10個化合物，分別鑒定為乙酰依布里酸(1)，麥角甾醇過氧化物(2)，麥角甾－7，22－二烯－3β，5α，6β－三醇(3)，麥角甾－7－烯－3β 醇(4)，麥角甾－7，22－二烯－3β 醇(5)，茯苓酸(6)，去氫土莫酸(7)，3－表－去氫土莫酸(8)，依布里酸(9)，3β－羥基－羊毛甾－7，9(11)，24－三烯－21－酸(10)。

何珊等［11］采用薄層色譜、柱色譜、葡聚糖凝膠分離、高效液相色譜等方法及波譜技術對茯苓的乙醇提取物進行分離純化和結構鑒定。結果從茯苓乙醇提取物中分離并鑒定出8個三萜類化合物。分別為:16α－羥基－3，4－開環(huán)－羊毛甾 4(28)，7，9(11)，24(31)－四烯－3，21－二酸－3－甲酯(poricoic acid AM);16α－羥基－3，4－開環(huán)－羊毛甾－4(28)，7，9(11)，24(31)－四烯－3，21－二酸(poricoic acid A);3β－16α－二羥基－羊毛甾－7，9(11)，24(31)－三烯－21－酸(去氫土莫酸);16α－羥基－3，4－開環(huán)－羊毛甾－4(28)，7，9(11)，24－四烯－3－21－二酸－3－甲酯(poricoic acidBM);3β－羥基－羊毛甾－7，9(11)，24－三烯－21－酸;β－乙酰氧基－16α－羥基－羊毛甾－8，24(31)－二烯－21－酸(茯苓酸，pachymic acid);16α－羥基－3，4－開環(huán)－羊毛甾－4(28)，7，9(11)，24－四烯－3－21－二酸(poricoic acid B);3－酮基－16α－羥基羊毛甾－7，9(11)，24(31)－三烯－21－酸(豬苓酸C，polyporenic acid C)。

2 質量控制

宋桂萍等［12］采用高效液相法，梯度洗脫，測定了10批樣品，建立茯苓飲片HPLC指紋圖譜，評定不同產(chǎn)地茯苓飲片中化學成分的差異。采用國家藥典委員會的中藥指紋圖譜相似度計算軟件:中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版對數(shù)據(jù)進行分析，并對方法進行了評價。結果建立了茯苓飲片指紋圖譜共有模式，確定了12個指紋圖譜共有峰，可用于茯苓飲片的產(chǎn)地鑒別和質量控制。其中徽、湖南和云南三地產(chǎn)茯苓飲片的指紋圖譜相互之間較為吻合，雖然各特征峰的相對峰面積存在一定的差異，但整體輪廓均符合共有特征，而浙江產(chǎn)茯苓指紋圖譜與安徽、湖南和云南三地產(chǎn)茯苓指紋圖譜間的差異較大，相似度明顯偏低。

易中宏等［13］運用分光光度法測定茯苓藥材中有效成分總三萜的含量，以多孔菌酸 C為對照品，用50mg/ml香草醛－冰乙酸溶液、高氯酸顯色，在540nm波長處測定樣品吸收度。結果，多孔菌酸C在17．6～52．8μg線性范圍內，線性關系良好，其回歸方程為:A=656．9C ×10－5+0．003，r=0．9952?？梢娫摲椒勺鳛檐蜍咚幉馁|量的有效監(jiān)控手段。

許甜甜等［14］分別采用紫外分光光度法、高效液相色譜法測定茯苓不同藥用部位中水不溶性多糖、茯苓酸的含量。結果茯苓不同藥用部位的水不溶性多糖含量大小依次為白茯苓、茯神、赤茯苓、茯苓皮，茯苓酸含量大小依次為赤茯苓、茯苓皮、白茯苓、茯神?？梢姡蜍卟煌幱貌课坏幕瘜W成分分布存在一定的差異，茯苓酸和茯苓水不溶性多糖的含量與臨床用藥的選擇有關聯(lián);所建立的多指標成分含量測定方法準確可靠，可用于茯苓藥材質量的評價。

方東軍等［15－16］分別采用苯酚－硫酸比色法和咔唑－硫酸比色法進行測定，于分光光度計最大吸收波長處測定OD值。結果，95%醇沉茯苓多糖、70%醇沉茯苓多糖、30%醇沉茯苓多糖中總糖平均百分含量分別為 67．96%、89．95%和 79．16%;糖醛酸百分含量分別為 8．00%、8．91%和 8．65%。

雷高明等［17］從浸出物、多糖和總糖含量、HPLC色譜圖等方面來考察趁鮮加工和發(fā)汗后加工對茯苓飲片化學成分的影響。結果，趁鮮處理的飲片水溶性浸出物含量大于發(fā)汗后處理的飲片，對堿溶性浸出物影響不明顯;趁鮮處理的茯苓片總糖和多糖含量均高于發(fā)汗后處理的茯苓片，茯苓丁相反;炮制加工前后的茯苓飲片HPLC色譜圖中主要峰群的整體圖貌基本一致，但化學成分含量有一定的差別，可見炮制加工對茯苓飲片的化學成分有一定的影響。

3 藥理作用

茯苓具有抗腫瘤、抗纖維化、抗炎、抗氧化、免疫調節(jié)、抑菌等多方面的藥理作用。何綺微等［4］以生理鹽水作為對照，將茯苓用于大鼠肝纖維化模型和大鼠肝星狀細胞(HSC)，觀察肝組織形態(tài)變化，檢測血透明質酸酶、Ⅳ型膠原含量;MTT法檢測HSC細胞增殖抑制率;免疫組化法檢測基質金屬蛋白酶－1(MMP－1)、基質金屬蛋白酶組織抑制因子－1(TIMP－1)、轉化生長因子(TGF)β1、血小板衍生生長因子(PDGF)的表達。結果，與對照組比較，中藥處理組的HSC細胞增殖抑制率升高(P＜0．05);血清透明質酸、Ⅳ型膠原含量減少(P ＜0．05);肝組織 TIMP－1、TGF－β1及PDGF的表達均減少(P＜0．05)。可見茯苓能減緩大鼠肝纖維化的發(fā)生，其機制可能與下調TGF－β1及PDGF表達、抑制HSC增殖活化、促進細胞外基質降解、減少肝纖維結締組織沉積有關。

鄧媛媛等［2］給小鼠注射氫化可的松(50mg/kg)造成免疫低下模型后，檢測小鼠腹腔內吞噬細胞吞噬雞紅細胞功能，并測定了小鼠血清內IL－2和TNF－α的含量以及免疫器官脾臟和胸腺的重量變化。結果，茯苓醇提物質部位、水溶性物質部位、堿溶性物質部位均有不同程度促進小鼠腹腔內吞噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，且小鼠血清內免疫因子IL－2和TNF－α的含量也有明顯增加，脾臟和胸腺的重量也明顯增加?？梢娷蜍哒{節(jié)免疫功能的物質基礎主要為三萜類、水溶性多糖及酸性多糖。

宋克玉等［18］將BALB/C小鼠隨分為空白組、茯苓的低、中、高劑量組，各組的受試藥物灌胃濃度分別為人體推薦量的5，10，30倍，空白對照組用無菌水代替受試物。連續(xù)給藥14天后，取腸道內容物，溶解涂布篩選平板，培養(yǎng)計數(shù)。以小鼠糞便中的雙歧桿菌、乳桿菌、大腸桿菌和腸球菌數(shù)量為檢測指標，觀察給藥后小鼠腸道菌群的變化。結果高劑量的茯苓能顯著提高腸道雙歧桿菌的水平，可見茯苓對腸道菌群都有較好的調節(jié)作用。

李森等［19］通過小鼠利尿實驗比較茯苓、豬苓、黃芪對小鼠的利尿作用。結果，茯苓、豬苓、黃芪3味中藥單次給藥，均對生理鹽水負荷大鼠、小鼠有較顯著的利尿作用，且作用持久，不同的是茯苓高、中劑量組動物尿中K+排出量較陰性對照組顯著升高，Na+/K+較陰性對照組降低;豬苓高劑量組K+排出量較陰性對照組升高，豬苓高、中劑量組Cl－排出量較陰性對照組顯著升高;黃芪高、中劑量組Na+、Cl－排出量較陰性對照組顯著升高。

賈波等［20］運用大黃厚樸枳實加饑飽失常法復制脾氣虛證的動物模型，采用放射免疫及RT－PCR等方法，觀察白術、茯苓、白術茯苓湯對脾氣虛大鼠血漿及結腸組織VIP的影響。結果，與模型組比較，白術茯苓湯組能下調血漿及結腸組織VIP含量(P＜0．05)，茯苓組呈下調趨勢，白術組則不明顯;與模型組比較，三組方藥均可使脾虛大鼠VIPR2的基因表達量下降(P ＜0．05)。

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