豬場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌的感染狀況及益生菌控制效果分析

■黃廣明 張媛媛 陽艷林 勞 曄

（建明工業(yè)（珠海）有限公司，廣東珠海 519040）

1892年，美國(guó)病理學(xué)家W.H.韋爾奇等最早分離到產(chǎn)氣莢膜梭菌，因而又稱韋氏梭菌或魏氏梭菌。該菌廣泛存在于土壤、人和動(dòng)物的腸道中，其致病性主要是由其所產(chǎn)生的外毒素引起的(李云霄等，2007)。在健康的豬腸道內(nèi)都會(huì)有產(chǎn)氣莢膜梭菌以及芽孢存在，這些梭菌及芽孢可以隨著糞便排泄到體外并在豬舍內(nèi)蓄積。當(dāng)蓄積到一定程度時(shí)，豬在采食時(shí)會(huì)攝入較多的梭菌。這些梭菌會(huì)在腸道內(nèi)快速繁殖，并造成局部的營(yíng)養(yǎng)不足，從而使梭菌形成芽孢，在形成芽孢的過程中會(huì)產(chǎn)生大量的外毒素，最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生(孔慶娟等，2010)。

動(dòng)物發(fā)生產(chǎn)氣莢膜梭菌疾病，需要一種或多種誘發(fā)因素的協(xié)同作用。消化道的某些功能失常和腸道菌群組成的改變是感染所必需的誘發(fā)因素。腸道郁積、腸腔膨脹、球蟲病、沙門氏菌病可誘發(fā)動(dòng)物感染產(chǎn)氣莢膜梭菌。其它因素包括采食高能、高蛋白日糧，魚粉日糧以及小麥日糧(薛俊梅，2010)。

產(chǎn)氣莢膜梭菌可分為A、B、C、D、E和F 6個(gè)血清型，其中A型和C型是導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)生疾病的主要病原。產(chǎn)氣莢膜梭菌對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的危害貫穿豬的整個(gè)一生，可引起乳豬的紅痢、梭菌性仔豬腹瀉、中大豬及母豬的脹氣、壞死性腸炎及猝死(張倩等，2007)。

本研究采用快速檢測(cè)方法，對(duì)廣東、江西、河南等三個(gè)省份的10個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行了產(chǎn)氣莢膜梭菌感染狀況的調(diào)查，為業(yè)內(nèi)同行防控梭菌性疾病、避免對(duì)豬場(chǎng)造成重大損失提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高壓滅菌鍋、試管加熱器、生物安全柜、分析天平、離心管、EP管、無菌醫(yī)用棉簽、產(chǎn)氣莢膜梭菌瓊脂培養(yǎng)基、PBS緩沖液。

1.2 菌株與益生菌制劑

產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC13124購自中國(guó)獸藥監(jiān)察所；益生菌制劑克洛生TM由建明工業(yè)（珠海）有限公司生產(chǎn)。

1.3 取樣地點(diǎn)

廣東3個(gè)豬場(chǎng)(2013年4～5月)各階段豬采樣79頭，江西5個(gè)豬場(chǎng)（2013年9月）各階段豬采樣48頭，河南2個(gè)豬場(chǎng)（2013年10月）各階段豬采樣40頭。累計(jì)懷孕母豬59頭，哺乳母豬37頭，哺乳仔豬10頭，保育豬12頭，生長(zhǎng)豬24頭，育肥豬19頭，后備豬4頭，公豬2頭。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 原理

產(chǎn)氣莢膜梭菌可分解培養(yǎng)基中的含硫化合物，而產(chǎn)生硫化氫氣體，硫化氫遇到亞鐵離子可生成不溶性的硫化亞鐵黑色沉淀。SFP瓊脂培養(yǎng)基是一種選擇性培養(yǎng)基，常用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的篩選和計(jì)數(shù)。

1.4.2 采樣

用棉拭子挑取豬糞便樣品約1 g于PBS緩沖液中，攪拌均勻。

1.4.3 檢測(cè)

按試劑盒說明書操作。

1.5 結(jié)果判定

通過實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)，由標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC13124作為陽性對(duì)照制訂產(chǎn)氣莢膜梭菌活菌數(shù)（以cfu/g表示）的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。感染程度的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)參考國(guó)標(biāo)對(duì)食品中產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)以及其它文獻(xiàn)制訂（見表1）。

表1 產(chǎn)氣莢膜梭菌感染程度評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果與分析

2.1 各省份產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況

2.1.1 廣東3個(gè)豬場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況

從廣東3家豬場(chǎng)檢測(cè)的結(jié)果來看，懷孕母豬、哺乳母豬和哺乳仔豬產(chǎn)氣莢膜梭菌重度感染的比率分別為56%、50%和60%，另外還有一定比率的輕度感染，說明這三個(gè)階段是感染產(chǎn)氣莢膜梭菌的高發(fā)階段(見表2)。保育豬和生長(zhǎng)豬產(chǎn)氣莢膜梭菌的感染率則相對(duì)較低，而育肥豬和后備豬腸道梭菌正常率均為100%，說明該階段豬健康水平較高或?qū)Ξa(chǎn)氣莢膜梭菌的抵御能力較強(qiáng)。

表2 廣東3個(gè)豬場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況檢測(cè)結(jié)果

2.1.2 江西5個(gè)豬場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況

江西5家豬場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果表明，懷孕母豬和哺乳母豬產(chǎn)氣莢膜梭菌重度感染比率分別為67%和68%，說明這兩個(gè)階段的豬感染嚴(yán)重（見表3）。生長(zhǎng)豬和公豬樣品數(shù)較少，但亦有重度感染檢出。2頭育肥豬均沒有檢測(cè)出產(chǎn)氣莢膜梭菌。

2.1.3 河南2個(gè)豬場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況

河南2個(gè)豬場(chǎng)懷孕母豬重度感染比例為8%，加上輕度感染38%，使之近半數(shù)處于感染水平(見表4)。哺乳母豬重度感染40%，另有40%輕度感染，所以感染水平還是很高的。生長(zhǎng)豬感染不嚴(yán)重，正常率達(dá)78%。育肥豬有半數(shù)輕度感染。

表3 江西5個(gè)豬場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況檢測(cè)結(jié)果

表4 河南2個(gè)豬場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況檢測(cè)結(jié)果

2.1.4 三省份合計(jì)感染情況

從三個(gè)省份綜合情況了來看，懷孕母豬感染率為73%，哺乳母豬感染率為81%，哺乳仔豬感染率為80%，以上三者屬于生豬感染產(chǎn)氣莢膜梭菌高發(fā)階段，重度感染比率分別達(dá)到了49%、57%和60%（見表5，圖1）。保育豬、育肥豬、后備豬階段，抵御產(chǎn)氣莢膜梭菌能力較強(qiáng)，生豬健康率較高。而生長(zhǎng)豬和公豬階段感染率分別為42%和50%，應(yīng)注意采取措施，防止產(chǎn)氣莢膜梭菌感染加重。

表5 三省份10個(gè)豬場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況匯總

圖1 三省份10個(gè)豬場(chǎng)各階段豬產(chǎn)氣莢膜梭菌感染率

2.2 使用益生菌對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染情況的影響

為研究益生菌對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染的控制效果，選擇廣東某豬場(chǎng)的20頭懷孕母豬進(jìn)行飼喂益生菌。結(jié)果表明，20頭懷孕母豬使用益生菌前梭菌感染率為75%，其中50%重度感染。使用益生菌12 d后梭菌感染率下降為25%，其中重度感染比率下降為0，梭菌正常的生豬比率也由25%上升為75%（見表6，圖2）。

表6 懷孕母豬使用益生菌前后感染產(chǎn)氣莢膜梭菌情況對(duì)比

圖2 懷孕母豬使用益生菌前后產(chǎn)氣莢膜梭菌感染率

3 討論

輕度感染樣品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量約為104～106cfu/g，屬于亞臨床感染狀態(tài)，隨時(shí)有可能因?yàn)樘鞖?、轉(zhuǎn)群、其它疾病等應(yīng)激因素而導(dǎo)致梭菌性疾病的發(fā)生。而重度感染樣品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量約為106cfu/g以上，已處于感染甚至發(fā)病的狀態(tài)。

三省份的調(diào)查結(jié)果表明，產(chǎn)氣莢膜梭菌在豬場(chǎng)的感染非常普遍，尤其是廣東、江西兩省的8個(gè)豬場(chǎng)，在懷孕母豬、哺乳母豬和哺乳仔豬階段均有很高的重度感染比率。保育豬、中大豬階段總體感染程度較輕，但不排除個(gè)別豬只感染發(fā)病。由于產(chǎn)氣莢膜梭菌會(huì)損傷仔豬腸道引起腸毒血癥，并造成母豬、中大豬脹氣死亡，所以豬場(chǎng)應(yīng)對(duì)梭菌性疾病給予足夠的重視。

克洛生是一種以枯草芽孢桿菌PB6為主要活性成分的益生菌類飼料添加劑，PB6所分泌的細(xì)菌素可特異性殺死產(chǎn)氣莢膜梭菌。從使用克洛生以后的檢測(cè)結(jié)果來看，產(chǎn)氣莢膜梭菌的感染情況有明顯的好轉(zhuǎn)，重度感染完全消失，梭菌正常的比例顯著提高，說明克洛生在控制產(chǎn)氣莢膜梭菌感染方面具有顯著的效果。

4 結(jié)論

①產(chǎn)氣莢膜梭菌感染普遍，對(duì)豬場(chǎng)存在較大威脅。

②懷孕母豬、哺乳母豬和哺乳仔豬是感染產(chǎn)氣莢膜梭菌的重災(zāi)區(qū)。

③益生菌在控制產(chǎn)氣莢膜梭菌疾病方面具有顯著效果。

（參考文獻(xiàn)若干篇，刊略，需者可函索）