中藥復(fù)方對(duì)蛋雞腸道菌群和消化酶活性的影響

■王立辛 劉海東 范正征 王 雷

（1.遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州 121001；2.沈陽(yáng)市種畜禽監(jiān)督管理站，遼寧沈陽(yáng) 110033）

隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)的集約化發(fā)展，出于疾病治療及預(yù)防的目的，抗生素類飼料添加劑被大量使用，雖然其對(duì)促進(jìn)畜禽生產(chǎn)具有一定作用，但是由于使用和管理不當(dāng)，出現(xiàn)很多弊端，如產(chǎn)生耐藥菌株、動(dòng)物性產(chǎn)品藥物殘留和腸道菌群失調(diào)等，也引發(fā)了一系列食品安全等社會(huì)問(wèn)題，嚴(yán)重影響了養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，因此，尋求安全、綠色、環(huán)保型飼料添加劑是當(dāng)前重要工作之一[1]。中草藥添加劑近年來(lái)成為動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的熱點(diǎn)，是可能代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素添加劑的理想選擇之一，中草藥成分復(fù)雜、效應(yīng)廣泛，不但含有抗菌、抗病毒等治療成分，還含有調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)環(huán)境、增強(qiáng)機(jī)體抵抗力的其它成分，而且毒副作用低、無(wú)抗藥性、無(wú)殘留，具有廣闊的應(yīng)用前景[2]。本試驗(yàn)以海蘭褐蛋雞為研究對(duì)象，探討中草藥復(fù)方制劑對(duì)腸道菌群和消化酶活性的影響，以期為中草藥添加劑的廣泛應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品及試劑

中藥復(fù)方：黃芪15 g、黨參5 g、炙甘草15 g、白術(shù)10 g、陳皮6 g、當(dāng)歸10 g、升麻6 g、柴胡12 g、生姜9片、大棗6枚，以上為1劑藥量,烘干后粉碎，過(guò)500目篩，4℃保存?zhèn)溆?，所有中草藥?gòu)自錦州遼西國(guó)藥；細(xì)菌培養(yǎng)基購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司；消化酶活檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及處理方法

海蘭褐蛋雞30周齡200只，體重、產(chǎn)蛋量等盡量一致，隨機(jī)分成4個(gè)處理組，每個(gè)處理組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只。根據(jù)蛋雞營(yíng)養(yǎng)需要NRC（1994）配制基礎(chǔ)日糧（見(jiàn)表1），空白對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組，在基礎(chǔ)日糧中分別添加上述0.5%、1.0%、1.5%的中藥復(fù)方干粉，預(yù)試期7 d，正試期4周，4周后處死所有蛋雞，進(jìn)行腸道微生物和消化酶活性檢測(cè)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 盲腸微生物定量檢測(cè)

蛋雞處死后，無(wú)菌取盲腸內(nèi)容物0.5 g，加入PBS 4.5 ml，用漩渦混合計(jì)混勻后稀釋至10-6～10-9，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，接種于各自培養(yǎng)基，細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最終以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)lg(CFU/g)表示。所用培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件見(jiàn)表2。

表2 微生物檢測(cè)用培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

1.3.2 小腸消化酶活性測(cè)定

蛋雞在試驗(yàn)結(jié)束后處死，在超凈工作臺(tái)中快速解剖，自幽門口至回盲口截取腸段，刮取內(nèi)容物，液氮保存。檢測(cè)時(shí)加入4℃去離子水，低溫勻漿后定容于50 ml容量瓶，搖勻后于4℃下保存，取上清液檢測(cè)小腸消化酶的活性，具體方法如下。

淀粉酶活性檢測(cè)：采用碘淀粉比色法。標(biāo)準(zhǔn)：1 g小腸內(nèi)容物中的淀粉酶,在37℃條件下與底物作用30 min,水解10 mg淀粉為1個(gè)淀粉酶活性單位(U)。

胰蛋白酶活性檢測(cè)：采用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)法。標(biāo)準(zhǔn)：在pH值8.0、37℃條件下,1 ml小腸內(nèi)容物中的胰蛋白酶1 min內(nèi)使D253值升高0.003為1個(gè)酶活性單位(U)。

總蛋白酶活性的檢測(cè)：采用福林酚法。標(biāo)準(zhǔn)：在pH值7.0、40℃條件下,1 min內(nèi)水解酪蛋白產(chǎn)生l μg酪氨酸所需的酶量為1個(gè)活性單位(U)。

脂肪酶活性檢測(cè)：采用比濁法測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)：在40 ℃條件下反應(yīng)1 min,水解1 μmol基質(zhì)(橄欖油)所需的酶量為1個(gè)活性單位(U)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±SD表示，采用spss13.0軟件比較各組間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥復(fù)方對(duì)蛋雞盲腸菌群的影響(見(jiàn)表3)

表3 中藥復(fù)方對(duì)蛋雞盲腸菌群的影響（n=10）lg[CFU/g]

由表3可見(jiàn)，中藥復(fù)方添加效果明顯，各組蛋雞乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量差異極顯著（P＜0.01），試驗(yàn)組數(shù)量高于對(duì)照組；大腸桿菌和葡萄球菌數(shù)量差異顯著（P＜0.05），試驗(yàn)組數(shù)量低于對(duì)照組；3個(gè)試驗(yàn)組中，試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組4項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)于Ⅰ組。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明中藥復(fù)方能夠有效地調(diào)節(jié)腸道菌群區(qū)系平衡，增加有益菌含量，降低致病菌含量，在試驗(yàn)劑量范圍內(nèi)1.5%的添加量效果較好。

2.2 中藥復(fù)方對(duì)蛋雞小腸消化酶活性的影響(見(jiàn)表4)

表4 中藥復(fù)方對(duì)蛋雞小腸消化酶活性的影響（n=10）

由表4可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組胰脂肪酶活性降低，差異不顯著（P＞0.05），淀粉酶、總蛋白酶和胰蛋白酶活性升高，差異不顯著（P＞0.05）。3個(gè)試驗(yàn)組間未表現(xiàn)出明顯的劑量關(guān)系，即4種酶的活性變化與中藥添加劑量無(wú)相關(guān)性，試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明中藥復(fù)方對(duì)腸道消化酶活性無(wú)顯著影響。

3 討論

3.1 中藥復(fù)方對(duì)蛋雞盲腸微生物的影響

本研究顯示，中藥復(fù)方能夠顯著提高蛋雞盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量（P＜0.01），同時(shí)抑制大腸桿菌（P＜0.05）和葡萄球菌（P＜0.05）的生長(zhǎng)，使菌群更加平衡，說(shuō)明此中藥復(fù)方可以發(fā)揮益生元的功能，調(diào)節(jié)菌群區(qū)系平衡。鞠寶玲等[3]以人參、茯苓、白術(shù)、甘草制成的方劑治療林可霉素致菌群失調(diào)蛋雞模型，發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方可以修復(fù)損傷的腸黏膜，調(diào)節(jié)空腸、盲腸菌群平衡，增加有益菌數(shù)量；孫巍[4]以黃芪、人參、白術(shù)、當(dāng)歸等8味中草藥制成補(bǔ)中益氣湯，證明其對(duì)腸道益生菌的增益作用，并可提高機(jī)體的免疫力；劉君星等[5]以人參、茯苓、白術(shù)、甘草等中藥復(fù)方調(diào)整衰老蛋雞腸道菌群平衡，達(dá)到改善胃腸功能、提高免疫力、抗衰老等作用；孫耀貴等[6]在AA肉雞日糧中添加300 mg/kg山楂葉總黃酮和150 mg/kg何首烏二苯乙烯苷,可以顯著提高回腸和盲腸乳酸桿菌數(shù)，降低大腸桿菌數(shù)，改善消化功能，提高飼料利用率。以上報(bào)道及本研究所用組方皆為健脾益氣的補(bǔ)益類方劑，現(xiàn)代中醫(yī)研究表明，補(bǔ)益類中藥含有黃酮、多糖和皂甙等成分，這些有效成分對(duì)微生物的繁殖有明顯促進(jìn)作用，而且對(duì)有益菌的扶植作用強(qiáng)于致病菌[7]。這種雙向調(diào)節(jié)的內(nèi)在機(jī)制在于細(xì)菌代謝產(chǎn)物的間接抑制作用，例如多糖等可以促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌的繁殖，其代謝產(chǎn)生的酸性物質(zhì)降低了腸道pH值，導(dǎo)致大腸桿菌繁殖受阻，黃酮、皂甙等也有類似功效[8]。

3.2 中藥復(fù)方對(duì)蛋雞小腸消化酶活性的影響

本研究顯示,中藥復(fù)方對(duì)消化酶活影響雖然不顯著（P＞0.05），但與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組蛋雞小腸淀粉酶、胰蛋白酶和總蛋白酶的活性均有所提高，胰脂肪酶活性降低。國(guó)內(nèi)有很多關(guān)于中草藥對(duì)動(dòng)物腸道消化酶活性影響的報(bào)道，張利娟等[9]研究表明，含黃芪多糖的中草藥復(fù)合劑對(duì)蛋雞盲腸各種微生物都有顯著影響，有效地改善腸道微生態(tài)區(qū)系平衡，并增加腸道消化酶活。姚茂忠等[10]以神曲、大蒜、女貞子、淫羊藿等組成中藥添加劑，添加與文昌雞基礎(chǔ)日糧，飼喂試驗(yàn)結(jié)果顯示，0.2%的添加量可以顯著提高十二指腸淀粉酶和胰蛋白酶活性。中草藥對(duì)動(dòng)物腸道消化酶活性影響的機(jī)制目前尚不十分明確，多數(shù)研究者認(rèn)為中藥的某些活性成分對(duì)腸粘膜有修復(fù)作用，使腸絨毛顯著變粗、變長(zhǎng)，排列更整齊緊密，并且上皮細(xì)胞間杯狀細(xì)胞和黏膜下淋巴細(xì)胞增多，從而影響消化酶的合成與分泌，另外，中草藥經(jīng)微生物代謝轉(zhuǎn)化后生成大量酸性物質(zhì)，降低腸道內(nèi)pH值，有利于酶的激活。中草藥成分復(fù)雜，很多成分既可發(fā)揮調(diào)節(jié)作用又是營(yíng)養(yǎng)成分，各報(bào)道所用組方也不盡相同，關(guān)于中草藥對(duì)動(dòng)物腸道消化酶活性影響機(jī)制有待更深入的研究。

4 結(jié)論

所選中藥復(fù)方可以有效調(diào)節(jié)蛋雞盲腸菌群區(qū)系平衡，增加有益菌數(shù)量。