保健食品中非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)方法

張圓 閔春艷 郝剛 吳楊 顧炳仁

（蘇州市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇蘇州 215000）

保健食品中非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)方法

張圓 閔春艷 郝剛 吳楊 顧炳仁

（蘇州市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇蘇州 215000）

對(duì)市場(chǎng)上常見保健食品（聲稱減肥、緩解體力疲勞、輔助降血糖、改善睡眠四類）中非法添加化學(xué)藥物進(jìn)行篩查方法總結(jié)，為相關(guān)監(jiān)管部門及時(shí)發(fā)現(xiàn)非法添加行為提供技術(shù)支持，保證消費(fèi)者服用保健食品的安全。

非法添加；化學(xué)物質(zhì)；保健食品；檢測(cè)方法

WORDSIllegally Added；Chemicals；Health Foods；Screening Method

隨著生活水平的提高，人們?cè)絹碓疥P(guān)注自身的健康狀況，對(duì)保健品的需求逐年增加，但在保健品中非法添加化學(xué)藥物的現(xiàn)象目前相當(dāng)嚴(yán)重，損害了消費(fèi)者的身心健康和經(jīng)濟(jì)利益，產(chǎn)生的不良反應(yīng)甚至危及百姓生命[1]。

保健食品一般起效較慢，效果不明顯，而一旦違法添加化學(xué)成分以后，與市場(chǎng)上其他產(chǎn)品相比，短期內(nèi)即可收到立竿見影的效果，從而迅速占領(lǐng)市場(chǎng)，經(jīng)濟(jì)效益使得不法廠商不惜鋌而走險(xiǎn)，以身試法，卻放棄了對(duì)關(guān)系人民群眾生命安全的保健食品的質(zhì)量保證。

目前非法添加化學(xué)物質(zhì)已成為保健食品造假的主要方式，屬于食品藥品監(jiān)管部門嚴(yán)厲打擊的對(duì)象，本文綜述了目前常見的聲稱減肥、緩解體力疲勞、輔助降血糖、改善睡眠四類保健食品中非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)方法，以便為相關(guān)監(jiān)管部門及時(shí)發(fā)現(xiàn)違法行為提供技術(shù)支持，保證消費(fèi)者服用保健食品的安全。

1 聲稱減肥類

目前，減肥保健食品種類繁多，特別是以植物藥為原料生產(chǎn)的保健食品受到廣大消費(fèi)者的推崇，但其一般見效較為緩慢，消費(fèi)者使用后往往不能很快見到效果，因此一些企業(yè)常在獲得保健食品批文后，為增強(qiáng)減肥效果在產(chǎn)品中添加治療肥胖癥的相關(guān)藥物。治療肥胖癥的化學(xué)藥物主要有食欲抑制藥、增加能量消耗的藥物、抑制腸道消化吸收的藥物和噻嗪類利尿藥等。食欲抑制藥包括苯丙胺及其類似物（如安非拉酮）、三氟苯丙胺類（如芬氟拉明）及西布曲明等；胃腸道酶抑制劑主要有奧利司他和阿卡波糖；接觸性輕瀉藥主要是酚酞；增加能量消耗的藥物包括麻黃堿、茶堿、咖啡因等；噻嗪類利尿藥主要有吲達(dá)帕胺和呋塞米。這些藥物可能引起血壓升高、心率加快、厭食、失眠、肝功能異常等危害嚴(yán)重的副作用。在減肥產(chǎn)品中非法添加化學(xué)物質(zhì)的現(xiàn)象已經(jīng)到了觸目驚心的地步，衛(wèi)生藥監(jiān)部門對(duì)此加大了監(jiān)控。

目前用于聲稱減肥類非法添加篩查的方法有：高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPLC），高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS），高效液相色譜-串聯(lián)核磁共振法（High performance liquid chromatography tandem nuclear magnetic resonance，HPLCNMR），紫外光譜法（ultraviolet spectroscopy，UV），紅外光譜法（Infrared absorption，IR），氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Gas chromatography tandem mass spectrometry，GC-MS），毛細(xì)管電泳（capillaryelectrophoresis，CE）等技術(shù)，兼顧選擇性和靈敏度是非法添加篩查的重點(diǎn)[2]。

李丹等[3]運(yùn)用HPLC-MS技術(shù)，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描方式，建立了同時(shí)檢測(cè)非法添加的鹽酸麻黃堿、鹽酸芬氟拉明、咖啡因、布美他尼、吲噠帕胺、比沙可啶、氫氯噻嗪、鹽酸甲基安非他明、酚酞、鹽酸苯丙醇胺、鹽酸西布曲明共11種減肥化學(xué)成分的快速檢驗(yàn)方法，檢測(cè)限低于5 ng，回收率大于90%，為更好打擊不法行為提供可靠的技術(shù)保障。

Wang J等[4]采用C8色譜柱，乙腈-20 mM甲酸銨進(jìn)行梯度洗脫，利用液相色譜-電噴霧離子化源-質(zhì)譜法（Liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry，LC-ESI-MS）對(duì)22批保健食品中非法添加的奧利司他、芬氟拉明、酚酞、西布曲明、N-單去甲基西布曲明、N，N-雙去甲基西布曲明6種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行篩查，其中16批呈陽性。各化合物的檢出限在0.001 8～0.73 mg/g之間，方法經(jīng)過準(zhǔn)確度、精密度、線性和專屬性考察，檢出陽性樣品的非法添加濃度在0.212～96.2 mg/g之間。

Ariburnu E等[5]對(duì)減肥類保健食品中非法添加的西布曲明進(jìn)行高效薄層光密度法（225 nm）和HPLC-熒光法（激發(fā)波長(zhǎng)225 nm，發(fā)射波長(zhǎng)316 nm）的定性篩查和定量工作，線性范圍分別為250～2 000 ng/spot和5～200 μg/mL，日內(nèi)、日間精密度和方法回收率均良好，方法經(jīng)過完整的驗(yàn)證，均可用于非法添加西布曲明的篩查。

2 聲稱緩解體力疲勞類

治療男性性功能障礙的各種選擇性磷酸二酯酶-5（PDE-5）抑制劑類藥物較多，如西地那非、他達(dá)拉非、紅地那非、豪莫西地那非等。因該類藥物對(duì)并發(fā)心血管系統(tǒng)疾病和糖尿病患者有嚴(yán)重不良反應(yīng)，必須在醫(yī)生指導(dǎo)下使用。由于補(bǔ)腎壯陽類藥物的高額利潤(rùn)，加之其合成路線早已不是秘密，一些不法分子為牟取暴利，非法添加此類化學(xué)成分進(jìn)入保健食品，宣稱具有補(bǔ)腎壯陽功效[6]。西地那非已成為中國保健品市場(chǎng)最常見的非法添加藥物[7]，由于PDE-5抑制劑種類繁多，鋌而走險(xiǎn)的廠家往往加入一些較為罕見的品種來考驗(yàn)執(zhí)法者的檢測(cè)水平。該類藥物極易引發(fā)頭痛、面色潮紅、消化不良、鼻炎、肌痛、背痛和色覺異常等副作用。此外，一些α受體阻斷藥也是常用的治療男性性功能障礙的藥物，如酚妥拉明和育亨賓，它們易引發(fā)胃酸分泌增加、誘發(fā)潰瘍等不良反應(yīng)。

目前，國內(nèi)外多種方法致力于打擊保健食品中非法添加的PDE-5抑制劑的行為。HPLC，GC-MS，LC-MS，NMR，離子遷移譜，液相色譜-串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜（LC-QQQ），液相色譜-傅里葉變換紅外質(zhì)譜（LC-FT-IR-MS），超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜（UHPLC-TOF-MS），IR等手段廣泛用于PDE-5抑制劑的篩查和鑒定[8]。

Lee ES等[9]建立了HPLC-MS MRM模式，用2 mM乙酸銨-乙腈進(jìn)行梯度洗脫，對(duì)38種PDE-5抑制劑（包括西地那非類24種，他達(dá)拉非類6種，伐地那非類6種及其他2種）進(jìn)行同時(shí)篩查，檢出限在0.004～0.455 ng/mL，定量限在0.012～1.5 ng/mL，線性和精密度良好，回收率在73.6%～111.3%之間。該方法大大提高了檢測(cè)效率，是一種高通量、高靈敏度的篩查方法。

Shi F等[10]利用超高效液相色譜-加熱電噴霧離子源-四級(jí)桿-回旋離子阱質(zhì)譜（UHPLC-HESIQ-Orbitrap）全掃描和數(shù)據(jù)依賴二級(jí)掃描模式，對(duì)88批中藥制劑和保健食品中的11種PDE-5抑制劑進(jìn)行篩查，方法準(zhǔn)確靈敏，檢出限在1～5 ng/mL之間，回收率大于85%，日內(nèi)和日間精密度小于15%，可用于非法添加PDE-5抑制劑的日常篩查工作。70 000 FWHM的質(zhì)量分辨率和5 ppm的窄質(zhì)量窗口可顯著提高方法的分辨率及各化合物的信噪比。

Lanzarotta A等[11]運(yùn)用FT-IR、拉曼光譜、旋光光譜和UPLC-HESI-Orbitrap液質(zhì)聯(lián)用多種手段檢測(cè)出保健食品中非法添加的他達(dá)拉非。經(jīng)過膠囊殼、膠囊內(nèi)容物與他達(dá)拉非對(duì)照品的光譜和質(zhì)譜圖的比對(duì)，發(fā)現(xiàn)膠囊殼中檢出的濃度較高，而膠囊內(nèi)容物中僅檢出痕量的他達(dá)拉非，故表明不法分子是在膠囊殼中非法加入這一化學(xué)成分企圖躲避法律的嚴(yán)懲。

Wollein U等[12]采用ESI負(fù)離子模式HPLC-MS、UV和NMR確認(rèn)，對(duì)保健食品中非法添加的PDE-5抑制劑結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn)，比較對(duì)照品和樣品的質(zhì)譜、光譜、核磁共振譜信息，篩查出多種西地那非同系物，其中piperazinonafil和isopiperazinonafil J為首次發(fā)現(xiàn)的非法添加物質(zhì)。

Vaysse J等[13]從一種名為iErect的宣稱純天然的保健品中提取出一種PDE-5抑制劑，經(jīng)過NMR、MS和IR手段，并與巰基西地那非對(duì)照品進(jìn)行比較，判斷其為depiperazinothiosildenafil，為巰基西地那非的S-N鍵水解產(chǎn)物。

由于PDE-5抑制劑在保健食品的非法添加中已經(jīng)泛濫，因此，提高篩查效率、建立快篩方法逐漸成為檢測(cè)趨勢(shì)，目前，國內(nèi)外建立了多種檢測(cè)手段，用于抽樣現(xiàn)場(chǎng)和實(shí)驗(yàn)室的快速篩查工作。

Mans DJ等[14]利用離子遷移譜對(duì)保健品中非法添加的紅地那非、西地那非和阿伐那非等9種PDE-5抑制劑進(jìn)行快速篩查，漂移管溫度232℃，異丁酰胺作為內(nèi)標(biāo)校正。方法檢出限在0.5～2.5 μg/mL之間，并用線性離子阱-回旋離子阱質(zhì)譜（LTQ-Oribitrap-MS/MS）進(jìn)行驗(yàn)證，該方法適用于HPLC-MS確認(rèn)前的樣品初篩工作。

吳雙等[15]建立了解吸附電暈束離子源（DCBI）-離子阱質(zhì)譜快速檢測(cè)保健食品中非法添加的3種PDE-5抑制劑（伐地那非、西地那非、他達(dá)拉非）的方法。在定性鑒別中，采用一級(jí)MS篩選，并由二級(jí)MS進(jìn)行確證；半定量分析則通過二級(jí)特征碎片離子模式進(jìn)行。該方法與傳統(tǒng)HPLC-UV定量檢測(cè)法相比快速準(zhǔn)確，適合大批量復(fù)雜基質(zhì)中PDE-5抑制劑的篩查。

程顯隆等[16]建立了直接實(shí)時(shí)分析離子源結(jié)合三重四極桿質(zhì)譜（DART-MS）方法，可以快速檢測(cè)保健食品中非法添加的6個(gè)PDE-5抑制劑西地那非、他達(dá)拉非、紅地那非、羥基豪莫西地那非、氨基他達(dá)拉非、偽伐地那非。采用DART-MS手段，通過對(duì)照品與樣品的二級(jí)MS圖對(duì)比進(jìn)行樣品中非法添加成分的定性鑒別。方法檢出濃度達(dá)1 μg/g，檢測(cè)時(shí)間僅為幾分鐘。DART-MS可用于固體樣品中添加PDE-5抑制劑類成分的快速檢測(cè)，是一種快速低損耗的檢測(cè)方式，在用于藥品快速檢驗(yàn)中批量樣品的初篩時(shí)更有優(yōu)勢(shì)。

3 聲稱輔助降血糖類

我國糖尿病患者數(shù)量巨大、降糖藥市場(chǎng)廣闊，通常純中藥制劑降糖療效較弱，起效也較慢，但安全性高。一些非法廠商為了宣傳其產(chǎn)品的效果明顯、降糖速度快，在宣稱是純中藥制劑的糖尿病藥品或保健品中添加格列本脲、格列美脲等起效快但毒副作用很大的降糖類化學(xué)藥品成分。目前市場(chǎng)上聲稱輔助降血糖類的保健食品常見的添加化學(xué)物質(zhì)主要有：磺酰脲類降糖藥（如甲苯磺丁脲、格列本脲、格列吡嗪、格列美脲、格列齊特、格列喹酮）；磺酰脲類電子等排體（如瑞格列奈）；雙胍類降糖藥（如二甲雙胍、苯乙雙胍）；噻唑烷二酮類降糖藥（如羅格列酮、吡格列酮）等。這些保健食品在長(zhǎng)期使用后，最終會(huì)造成病人出現(xiàn)較強(qiáng)的副作用，甚至有死亡的危險(xiǎn)。

黃湘鷺等[17]建立了檢測(cè)降血糖類保健食品中非法添加8種藥物的方法，采用HPLC-MS/MS法，通過分子離子峰、二級(jí)碎片、色譜保留時(shí)間等信息，對(duì)宣稱輔助降血糖類保健食品非法添加8種化學(xué)藥物進(jìn)行鑒別和定量測(cè)定。8種藥物實(shí)現(xiàn)了同時(shí)分離與專屬鑒定，檢出限為0.031～0.15 ng/mL，精密度為1.15%～4.30%，回收率為74.0%～109.6%。方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為宣稱輔助降血糖類保健食品中檢測(cè)非法添加化學(xué)藥物的方法參考。

羅疆南等[18]建立了HPLC-MS/MS方法檢測(cè)中藥及保健品中非法添加的11種降糖類化學(xué)藥物，二甲雙胍、苯乙雙胍、羅格列酮、鹽酸吡格列酮、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、格列齊特、格列本脲、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈，流動(dòng)相采用0.1%甲酸溶液（用氨水調(diào)節(jié)pH值至3.2）-乙腈梯度洗脫，方法精密度良好，樣品24 h穩(wěn)定，檢測(cè)限均在1～25 ng之間，回收率在96.95%～101.73%之間。

4 聲稱改善睡眠類

我國失眠患者日益增多，借助藥物來改善睡眠的人群也日益擴(kuò)大。改善睡眠類保健食品以其獨(dú)到的療效和較小的副作用為廣大患者所接受，但是往往起效較慢。不法分子往往利用消費(fèi)者這一心理，在保健食品中非法添加鎮(zhèn)靜催眠類化學(xué)藥物，以達(dá)到快速治療失眠的效果，從而吸引患者購買這類藥物。常見的非法添加鎮(zhèn)靜催眠類藥物主要包括苯并二氮雜類（如地西泮、硝西泮、奧沙西泮、勞拉西泮、艾司唑侖）；二苯并氮雜類（如卡馬西平）；吡咯酮類（如佐匹克隆）；咪唑并吡啶類（如扎來普?。?；巴比妥類（如巴比妥、苯巴比妥）等。但是此類藥物往往會(huì)造成相當(dāng)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，甚至?xí)斐勺詺⑿詢A向；由于具有耐藥性和依賴性，大多被列為國家二類精神藥品。

羅疆南等[19]建立了LC-MS/MS測(cè)定中藥制劑中非法添加的15種抗癲癇藥及鎮(zhèn)靜催眠類藥物的方法。采用ESI-MS/MS選擇離子監(jiān)測(cè)（SRM）正負(fù)離子檢測(cè)模式，對(duì)15種化學(xué)藥物均有較好的線性，回收率均大于80%，檢測(cè)限均低于1.5 ng，日間精密度小于10%。方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，每個(gè)化合物均選用兩個(gè)定量子離子，大大提高了方法的專屬性，可作為中藥制劑中非法添加抗癲癇及鎮(zhèn)靜催眠類藥物的快速篩查并定量的方法。

祝波等[20]運(yùn)用LC-MS/MS法采用ESI正離子模式和MRM方式進(jìn)行檢測(cè)，分析保健品及中成藥中添加的15種鎮(zhèn)靜催眠藥，15種被測(cè)組分線性關(guān)系良好、3種濃度的平均添加回收率均大于75%；最低檢測(cè)限為0.2～5.9 pg。結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，適用于保健品及中成藥非法添加鎮(zhèn)靜催眠藥的質(zhì)量監(jiān)控。

劉暢等[21]利用離子阱質(zhì)譜，ESI正離子模式對(duì)中成藥中添加的鎮(zhèn)靜催眠類化學(xué)藥品氯氮平、苯巴比妥、咪達(dá)唑侖、硝西泮、奧沙西泮、勞拉西泮、氯硝西泮、阿普唑侖和地西泮的檢測(cè)方法進(jìn)行了研究，采用0.5%甲酸-乙腈梯度洗脫，建立了包含保留時(shí)間與MS（n）譜圖的標(biāo)準(zhǔn)譜庫，檢出限在0.2～20 ng之間，回收率為90.3%～108.1%。方法簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確，可作為檢測(cè)中成藥中非法添加鎮(zhèn)靜催眠類化學(xué)藥品的方法。

目前文獻(xiàn)報(bào)道的篩查方法一般局限于某一類藥物，不適用于完全未知的待測(cè)樣本。馬萍等[22]建立了LC-MS/MS的篩查方法，采用C18柱，乙腈：1 mM甲酸銨（含0.1%甲酸）為流動(dòng)相梯度洗脫；ESI正離子模式，通過相關(guān)信息掃描模式（IDA），最終在已建立的譜庫中自動(dòng)搜索出中成藥和保健品中未知的非法添加物。經(jīng)18 min為一個(gè)分析周期的快速篩查，可以同時(shí)篩查到包括降糖、鎮(zhèn)靜催眠、解熱鎮(zhèn)痛、非甾體抗炎、抗生素、抗癲癇等多種類的非法添加藥物，建立的LC-MS/MS方法簡(jiǎn)單、操作性強(qiáng)、快速、高通量，篩查的目標(biāo)化合物覆蓋臨床常見藥物，包括口服降糖藥、鎮(zhèn)靜催眠、解熱鎮(zhèn)痛、非甾體抗炎、抗生素、抗癲癇等多個(gè)種類的300多種，可用于快速篩查中成藥和保健品中未知的非法添加物，為保健食品非法添加研究提供了新思路。

隨著UHPLC-MS/MS的普及，特別是各種軟電離技術(shù)的發(fā)展，由于其專屬性強(qiáng)、靈敏度高、分析時(shí)間短的特點(diǎn)，不僅提高了分離分析效率，而且成為復(fù)雜體系研究的有力工具，通過HPLC-MS技術(shù)可以獲得相對(duì)分子質(zhì)量、二級(jí)MS碎片信息、液相色譜保留時(shí)間三方面信息，這一方法被越來越多地應(yīng)用于保健食品非法添加篩查中。

打擊保健食品中非法添加的工作是一項(xiàng)長(zhǎng)期的、艱巨的任務(wù)，需要藥品監(jiān)督管理部門、藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和科研院所共同努力，加大打擊力度，不斷創(chuàng)新，開發(fā)新方法、新技術(shù)，維護(hù)保健品市場(chǎng)的安全。

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Screening Method for Illegally Added Chemicals in Health Foods

Zhang Yuan，Min Chunyan，Hao Gang，Wu Yang，Gu Bingren（Suzhou Institute for Food and Drug Control，Jiangsu Suzhou 215000，China）

To summarize the screening methods for illegally added chemicals in common health foods(such as those saying good for weight loss，relieving physical fatigue，hypoglycemic，improving sleep)so as to provide the technical support for the relevant regulatory authorities to find out the illegal adding behavior，and to ensure the safety in use of health foods by customers.

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.07.009

2014-04-09）

蘇州市科學(xué)技術(shù)局科學(xué)計(jì)劃項(xiàng)目（SS201220）

張圓，女，碩士。研究方向：藥物分析。E-mail：zhangyuan213@sina.com

顧炳仁，男，碩士生導(dǎo)師。研究方向：藥物分析與管理。通訊作者E-mail：944757490@qq.com