復(fù)合微生態(tài)制劑與黃芪多糖對肉雞生長性能、腸道菌群和免疫功能的影響

■王虹玲 劉丹丹 姜詩文 王家慶 汪 琢 孫天利

(1.沈陽工學(xué)院生命工程學(xué)院，遼寧撫順113122；2.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧沈陽110161)

隨著集約化畜牧業(yè)和工業(yè)化養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴(kuò)大，防病促生長的化學(xué)藥物及抗生素被廣泛應(yīng)用于飼料添加劑中?？股氐臑E用使細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)，并且造成畜產(chǎn)品中抗生素殘留增加，直接危害人類健康。微生態(tài)制劑是新型的、無公害的飼料添加劑，具有調(diào)整并維持腸道菌群平衡、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)畜禽生長發(fā)育的作用，使用方便且無藥物殘留[1]。目前，單一微生態(tài)制劑在肉雞飼養(yǎng)中應(yīng)用的報道較多。王全溪等[2]研究表明，在肉雞飼糧中添加100 mg/kg的乳酸菌素可提高肉雞的生長性能和抗氧化功能。Kala?vathy等[3]用由12種乳酸桿菌的混合制劑飼喂肉雞，結(jié)果顯示，肉雞的日增重和飼料消化率均有所提高，并且乳酸菌制劑有效降低了肉雞腹脂的沉積。關(guān)于單一的免疫增強(qiáng)因子的報道也較多，大量的研究表明，黃芪多糖具有調(diào)節(jié)免疫，抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗氧化及降低血糖作用[4]。試驗證實，在飼料中添加黃芪多糖可促進(jìn)肉雞生長、提高免疫器官指數(shù)，具有廣闊的研發(fā)前景[5]。但是將多種益生菌組成的復(fù)合微生態(tài)制劑與免疫增強(qiáng)因子聯(lián)合應(yīng)用在肉雞養(yǎng)殖中的報道并不多。為此，本文將復(fù)合微生態(tài)制劑與黃芪多糖聯(lián)合使用飼喂肉雞，旨在探討由酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸菌和黃芪多糖組成的復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能、腸道菌群、新城疫抗體效價及免疫器官指數(shù)的影響，為其在肉雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

復(fù)合微生態(tài)制劑：酵母菌2×108CFU/g、枯草芽孢桿菌 3×108CFU/g、乳酸菌 1×108CFU/g、黃芪多糖2.5%。其中，酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸菌購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，黃芪多糖購自北京生泰爾生物科技有限公司。

1.2 試驗設(shè)計與飼糧組成

將400只1日齡雌性健康肉雞隨機(jī)分為4組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)25只。試驗預(yù)試期5 d，飼喂基礎(chǔ)飼糧，正試期37 d。I組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；II、III、IV組為試驗組，在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0.1%、0.2%、0.4%的復(fù)合微生態(tài)制劑及2.5%黃芪多糖。

基礎(chǔ)日糧為參照《家禽營養(yǎng)需要》（NRC，1994）中肉雞的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制的玉米-豆粕型日糧，其日糧組成和營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試雞各組分籠飼養(yǎng)，自由飲水，人工喂養(yǎng)。嚴(yán)格控制雞舍內(nèi)的光照、溫度和濕度，按常規(guī)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理和消毒工作，并以常規(guī)免疫程序?qū)υ囯u進(jìn)行新城疫及法氏囊免疫。詳細(xì)記錄試驗期間各組飼料的消耗情況以及試雞的體重、健康狀況。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 測定指標(biāo)和方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

分別于14、21、28、35、42日齡對禁食12 h的試雞稱重，詳細(xì)記錄各階段的飼料消耗量，計算出肉雞的平均日增重、采食量和料重比。

1.4.2 腸道菌群數(shù)量

于試雞14、28、42日齡時，每個重復(fù)中隨機(jī)抽取3只（禁食12 h）稱重，宰殺后無菌操作取盲腸內(nèi)容物，置于滅菌生理鹽水中搖勻，梯度稀釋。其中大腸桿菌采用麥康凱培養(yǎng)基，乳酸菌采用MRS培養(yǎng)基，置于恒溫培養(yǎng)箱，37℃下分別培養(yǎng)24 h和48 h，采用平板培養(yǎng)計數(shù)法分別對腸道大腸桿菌和乳酸菌進(jìn)行計數(shù)。

1.4.3 免疫器官指數(shù)

于試雞14、28、42日齡時，每個重復(fù)中隨機(jī)抽取2只（禁食12 h）稱重，宰殺后立即無菌解剖，摘取脾臟、胸腺和法氏囊，剔除脂肪后稱鮮重，計算脾臟、法氏囊和胸腺的免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（mg/g）=免疫器官重量/活體重。

1.4.4 新城疫抗體效價

于試雞14、28和42日齡時，每個重復(fù)隨機(jī)選取2只，采頸動脈血，分離血清，并進(jìn)行倍比稀釋，采用V型血凝板檢測血清中的血凝抑制抗體效價[6]。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件中的ANOVA過程進(jìn)行單因子方差分析，采用LSD法進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果分析

2.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能的影響(見表2)

表2 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能的影響

由表2可知，復(fù)合微生態(tài)制劑的添加對肉雞平均日增重和料重比有不同程度的影響。其中，試驗Ⅱ組在試驗初期對肉雞平均日增重作用效果不明顯，隨著日齡的增加，效果逐漸顯著（P＜0.05）。試驗各階段，與對照組相比，各試驗組有提高平均日增重降低料重比(各別組的數(shù)值除外)的趨勢；其中，試驗組Ⅲ對肉雞生長性能的作用效果最好，平均日增重、提高了4.93%～14.41%（P＜0.05）；料重比降低了6.23%～16.57%（P＜0.05）。與對照相比，試驗 IV 組除 14～21 d，21～28 d外，在其他日齡階段均可顯著提高肉雞平均日增重（P＜0.05），但在降低料重比方面無明顯作用趨勢。

由此可見，在提高肉雞平均日增重和降低料重比方面，Ⅲ組的效果最好。

2.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞盲腸菌群數(shù)量的影響(見表3)

從表3可知，添加復(fù)合微生態(tài)制劑以后，肉雞盲腸內(nèi)乳酸菌的數(shù)量均高于對照組，其中，Ⅱ組在各試驗階段乳酸菌數(shù)量與對照相組比分別提高了14.68%、6.65%和1.77%；Ⅲ組與對照組相比分別提高了16.12%、7.74%和4.30%；復(fù)合微生態(tài)制劑Ⅱ組和Ⅲ組均能顯著降低肉雞盲腸大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），在14、28、42日齡階段分別比對照組降低了5.81%、3.47%、2.05%和5.18%、4.59%、3.98%。除14 d外，試驗Ⅳ組在改善肉雞腸道菌群方面作用效果不顯著（P＞0.05）。由此可見，試驗Ⅲ組在改善肉雞腸道菌落平衡方面效果最好。

表3 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞盲腸乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量的影響(lg CFU/g)

2.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞免疫器官指數(shù)的影響(見表4)

由表4可知，復(fù)合微生態(tài)制劑Ⅲ組可顯著提高肉雞的免疫器官指數(shù)（P＜0.05）。Ⅱ組在提高肉雞脾臟和法氏囊指數(shù)方面具有顯著作用（P＜0.05）。在試驗?zāi)┢冢?2日齡），Ⅱ組脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)分別比對照組提高了14.10%、30.88%和6.29%。Ⅲ組與對照組相比，分別提高了16.03%、54.41%和21.71%。復(fù)合微生態(tài)制劑Ⅳ組能夠提高肉雞脾臟指數(shù)，但作用效果不顯著（P＞0.05）；在法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)方面，Ⅳ組和對照組相比有下降的趨勢。試驗結(jié)果表明，添加的復(fù)合微生態(tài)制劑濃度過高反而會影響肉雞免疫器官的發(fā)育，Ⅲ組作用效果最好。

表4 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響(mg/g)

2.4 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞血清新城疫抗體效價的影響(見表5)

表5 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞血清新城疫抗體效價的影響(mg/g)

從表5可知，復(fù)合微生態(tài)制劑試驗Ⅱ組和Ⅲ組均能提高肉雞血清新城疫抗體效價，且Ⅲ組作用效果最好。在試驗各日齡階段，Ⅲ組數(shù)值均顯著高于對照組（P＜0.05），比對照組提高了14.62%～30.17%。Ⅱ組與對照組相比提高了2.51%～11.81%。試驗Ⅳ組對肉雞新城疫抗體效價的影響有下降的趨勢。由此可見，一定濃度復(fù)合微生態(tài)制劑可以提高肉雞新城疫抗體表達(dá)水平，且Ⅲ組效果最好。

3 討論

3.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能的影響

本研究將不同濃度的復(fù)合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖配伍添加到肉雞飲水中，結(jié)果表明，0.2%的復(fù)合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖有助提高肉雞的平均日增重，降低料重比。這是因為復(fù)合微生態(tài)制劑中存在的有益微生態(tài)成分可有效地補(bǔ)充各種消化酶，加強(qiáng)機(jī)體對飼料中營養(yǎng)成分的消化吸收，提高飼料利用率[7]；改善腸道微生態(tài)環(huán)境，進(jìn)而提高肉雞的生長性能[8]。胡順珍等[9]將乳酸菌和芽孢桿菌組成的復(fù)合微生態(tài)制劑添加到肉雞飼糧中，飼喂42 d后，肉雞的平均日增重顯著高于對照組（P＜0.05），料重比顯著低于對照組（P＜0.05）。金鹿等[10]也通過試驗證實，在飼料中添加復(fù)合微生態(tài)制劑與抗生素能使試驗組肉雞的平均日增重提高13.97%，顯著高于對照組（P＜0.05），均與本試驗的研究結(jié)果一致。

3.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞腸道菌群數(shù)量的影響

復(fù)合微生態(tài)制劑中的酵母菌和枯草芽孢桿菌可以為乳酸菌的生長創(chuàng)造有利的厭氧環(huán)境，乳酸菌代謝產(chǎn)生的乳酸會降低腸道pH值，進(jìn)而抑制腸道中大腸桿菌等病原微生物的定植和生長，在動物腸道內(nèi)建立正常的微生物區(qū)系，促進(jìn)動物生長繁殖。董秀梅等[11]研究顯示，飼糧中添加復(fù)合微生態(tài)制劑可顯著地增加肉雞腸道內(nèi)乳酸菌和腸球菌的數(shù)量，抑制腸道內(nèi)大腸桿菌的增殖。黃芪多糖作為免疫增強(qiáng)因子，具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化、抗病毒等作用。黃芪多糖與復(fù)合微生態(tài)制劑聯(lián)合使用時，可作為糖類物質(zhì)被乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌所利用，使腸道內(nèi)有益菌大量繁殖；同時黃芪多糖進(jìn)入腸道后會和大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌搶占有利的定植位點，從而抑制病原菌的定植。魏炳棟等[12]研究表明，飼糧中添加黃芪多糖能夠顯著促進(jìn)三黃肉雞盲腸雙歧桿菌和乳桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長。本試驗將復(fù)合微生態(tài)制劑與黃芪多糖配伍飼喂肉雞，結(jié)果顯示，0.2%的復(fù)合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖能在14日齡和28日齡時顯著提高肉雞盲腸內(nèi)乳酸菌的數(shù)量（P＜0.05），并且顯著降低了腸道中大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05）。

3.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

免疫器官的發(fā)育狀態(tài)及機(jī)能強(qiáng)弱直接決定著禽類的免疫水平[13]，脾臟、法氏囊和胸腺分別是機(jī)體重要的外周免疫器官、體液免疫器官和淋巴器官，參與全身的細(xì)胞免疫和體液免疫，是體內(nèi)產(chǎn)生抗體的重要器官。免疫器官指數(shù)可以作為衡量禽類機(jī)體免疫能力的重要指標(biāo)，免疫器官重量的增加表明機(jī)體免疫能力的增強(qiáng)。本試驗結(jié)果表明，添加0.2%復(fù)合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖后，14、28日齡和42日齡肉雞的脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著高于對照組（P＜0.05），與柳志余[14]所報道的結(jié)果相符。

3.4 復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞血清新城疫抗體效價的影響

多年來，新城疫一直是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的主要傳染病之一。目前，通常選用新城疫血凝抑制抗體水平來評價肉雞的體液免疫情況。新城疫抗體水平反映雞新城疫疫苗免疫后機(jī)體特異性體液免疫反應(yīng)[15]。研究表明，在基礎(chǔ)飼糧基礎(chǔ)上添加黃芪多糖、益生菌制劑后，可明顯提高雛雞血清新城疫抗體效價[16]。黃芪多糖可通過升高細(xì)胞蛋白激酶活性來影響機(jī)體免疫細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用[17]。試驗證實，復(fù)合微生態(tài)制劑中的有效成分可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，使機(jī)體的免疫功能始終處在較高的活性狀態(tài)，從而延長B細(xì)胞抗體分泌能力，延緩抗體滴度下降速度[18]。本試驗結(jié)果表明，飼喂0.2%的復(fù)合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖，能顯著提高肉雞血清新城疫抗體效價（P＜0.05），增強(qiáng)肉雞免疫力。

4 結(jié)論

①0.2%的復(fù)合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖添加在肉雞試驗中應(yīng)用效果最好，能增強(qiáng)肉雞的生長性能，顯著提高平均日增重，降低料重比。并且在改善腸道菌群結(jié)構(gòu)方面具有明顯效果，可增加益生菌的數(shù)量，抑制腸道病原菌的生長。

②適量添加復(fù)合微生態(tài)制劑可以提高肉雞法氏囊、胸腺以及脾臟等免疫器官指數(shù)，增加新城疫抗體效價，從而提高肉雞免疫力。