依達(dá)拉奉注射劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和穩(wěn)定性研究

陳楠 蓋春燕 陳剛 付宏征

依達(dá)拉奉注射劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和穩(wěn)定性研究

陳楠 蓋春燕 陳剛 付宏征

目的建立依達(dá)拉奉注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并考察其穩(wěn)定性。方法依達(dá)拉奉的含量測(cè)定應(yīng)用HPLC法，檢測(cè)波長(zhǎng)242 nm，理論塔板數(shù)以依達(dá)拉奉色譜峰計(jì)不低于2 000，保留時(shí)間為12～15 min;通過(guò)pH值、重金屬含量、細(xì)菌內(nèi)毒素、無(wú)菌檢查等對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行控制;通過(guò)影響因素試驗(yàn)，加速試驗(yàn)和室溫留樣觀察試驗(yàn)考察注射液的穩(wěn)定性。結(jié)果依達(dá)拉奉在1.5～7.5 μg/μl范圍內(nèi)濃度與吸光度成良好線性關(guān)系(r=0.9994)，平均回收率為100.02%，RSD=0.96%。3批依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉的含量分別為標(biāo)示量的100.73%、98.37%、100.64%。3批依達(dá)拉奉注射液的pH值分別為2.8、2.9、2.8。重金屬含量、細(xì)菌內(nèi)毒素、無(wú)菌檢查等符合藥典規(guī)定。結(jié)論該試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性高，系統(tǒng)可重復(fù)性強(qiáng)，可有效控制依達(dá)拉奉注射液的質(zhì)量并保證其穩(wěn)定性。

依達(dá)拉奉注射液;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);穩(wěn)定性

依達(dá)拉奉是一種新型的治療腦梗死的腦保護(hù)劑，它療效確切，能抑制自由基引起的脂質(zhì)過(guò)氧化和細(xì)胞壞死，有明確的抗腦缺血和腦保護(hù)作用，對(duì)于治療腦梗塞病是一個(gè)優(yōu)良的藥物。依達(dá)拉奉注射液作為一種新型自由基清除劑于2001年4月4日在日本獲得以“改善腦梗死急性期伴發(fā)的神經(jīng)癥候、日常生活動(dòng)作障礙、機(jī)能障礙”為適應(yīng)證的臨床用藥資格，并與2001年6月1日在日本正式上市，用于急性腦梗死的治療?，F(xiàn)在的腦梗死急性期用藥主要為除水腫的高漲輸液，CDP-膽堿氯酯等腦代謝復(fù)活藥，或者戊巴比妥等中樞抑制藥。還沒(méi)有直接作用于腦缺血后損傷因素、相關(guān)受體等腦保護(hù)藥，依達(dá)拉奉抑制自由基引起的脂質(zhì)過(guò)氧化和細(xì)胞壞死，有明確的腦缺血保護(hù)作用，成為保護(hù)腦免受脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的新藥，在我國(guó)依達(dá)拉奉廣泛應(yīng)用于腦出血、腦梗死、腦卒中、顱腦外傷等的治療，因此，通過(guò)有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制其質(zhì)量和穩(wěn)定性對(duì)于臨床安全用藥具有重要的意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695 Separations Module HPLC(美國(guó)Waters公司)，Waters 2998 PAD紫外檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司，含真空脫氣、高壓二元梯度泵、恒溫自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱)，Empower 2色譜管理系統(tǒng);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(鞏義市英峪高科儀器廠);DZTW型調(diào)溫電熱套(北京市永光明醫(yī)療儀器廠);分析天平(Sartorius CPA225D);超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);InoLab pH720試驗(yàn)室臺(tái)式酸度計(jì)(德國(guó)WTW公司)。

1.2 試藥 依達(dá)拉奉注射液自制(批號(hào):20010425、20010428、20010430 規(guī)格:20 ml∶30 mg);乙腈(色譜純);甲醇(色譜級(jí));雙蒸水;其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件和系統(tǒng)適性試驗(yàn):色譜柱:C18-鍵合硅膠柱(5 μm)250 mm × 4.6 mm;流動(dòng)相:乙腈:磷酸鹽緩沖液(15∶85)，1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):242 nm;進(jìn)樣量:15 μl;保留時(shí)間為12～15 min。柱效:按依達(dá)拉奉色譜峰計(jì)，理論塔板數(shù)應(yīng)不低于2 000［1，2］。含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 依達(dá)拉奉含量測(cè)定結(jié)果

2.1.2 線性關(guān)系:取依達(dá)拉奉對(duì)照品約30.0 mg，精密稱量，置10 ml容量瓶，甲醇稀釋至刻度，精密量取1 ml，以甲醇稀釋至 100 ml，再精密量取 1 ml，以甲醇稀釋至100 ml，搖勻。精密吸取對(duì)照品溶液，50 μl，100 μl，150 μl，200 μl，250 μl用甲醇稀釋至 10 ml，分別精密吸取20 μl注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，測(cè)量依達(dá)拉奉的峰面積［2，3］。結(jié)果表明，以依達(dá)拉奉的峰面積(A)對(duì)其濃度(C)進(jìn)行線性回歸，在進(jìn)樣量1.5～7.5 μg/ml范圍內(nèi)，依達(dá)拉奉峰面積與濃度成良好的線性關(guān)系。見(jiàn)表2。

表2 依達(dá)拉奉HPLC法測(cè)定線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

2.1.3 精密度試驗(yàn):取 3.0 μg/ml供試液分別連續(xù)測(cè)定5次，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.27%，結(jié)果表明在此濃度下，HPLC 測(cè)定的 RSD%小于 2.0%［2，3］。見(jiàn)表 3。

表3 依達(dá)拉奉精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.1.4 加樣回收率試驗(yàn):精密吸取已知含量的同批供試品液0.5 ml共 3份，各加入依達(dá)拉奉 3.10 mg，6.20 mg，9.20 mg，依法測(cè)定各份樣品中依達(dá)拉奉的含量并計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率100.02%，RSD=0.96%［2，3］。見(jiàn)表 4。

2.2 依達(dá)拉奉注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

2.2.1 pH值:參照pH值檢查法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部附錄Ⅵ H)。見(jiàn)表5。

表5 依達(dá)拉奉注射液的pH值

2.2.2 顏色:參照《中華人民共和國(guó)藥典》2010版二部附錄ⅨE。見(jiàn)表6。

表6 依達(dá)拉奉注射液的顏色

2.2.3 重金屬測(cè)定:依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010版二部附錄ⅧH第一法。見(jiàn)表7。

表7 依達(dá)拉奉注射液的重金屬檢查

依達(dá)拉奉原料藥的重金屬的含量極低，在注射液制備和生產(chǎn)過(guò)程中，并未引入重金屬，故此項(xiàng)不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.2.4 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查:依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010版二部附錄ⅪE。見(jiàn)表8。

表8 依達(dá)拉奉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

2.2.5 無(wú)菌檢查:依照《中華人民共和國(guó)藥典》2010版二部附錄ⅪH。見(jiàn)表9。

表9 依達(dá)拉奉注射液的無(wú)菌檢查

2.3 依達(dá)拉奉注射液的穩(wěn)定性研究

2.3.1 影響因素試驗(yàn):強(qiáng)光照射試驗(yàn):將樣品在光強(qiáng)度為3 500 Lx的日光燈下放置10 d，分別于1、5、10 d各取樣1次，按考察項(xiàng)目檢查。取本品20010425，分別于40℃、60℃的恒溫水浴中放置10 d，于1、5、10 d取樣，按考察項(xiàng)目檢查［4，5］。依達(dá)拉奉注射在各考察條件下均較穩(wěn)定。見(jiàn)表10。

表10 影響因素試驗(yàn)結(jié)果

2.3.2 加速試驗(yàn):取本品置40℃，放置6個(gè)月，于1、2、3、6 個(gè)月時(shí)間取樣測(cè)定［4，5］，試驗(yàn)結(jié)果表明，40℃ 條件下放置6個(gè)月，樣品與0月相比無(wú)明顯變化。見(jiàn)表11。

表11 加速試驗(yàn)結(jié)果

2.3.3 室溫留樣觀察試驗(yàn):將樣品置自然室溫條件下，并于 1、3、6 個(gè)月時(shí)抽樣測(cè)定［4，5］，結(jié)果表明:本品在室溫留樣的半年間質(zhì)量穩(wěn)定，考核各項(xiàng)均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。見(jiàn)表12。

表12 室溫留樣觀察試驗(yàn)

3 討論

3.1 色譜條件和系統(tǒng)適性 精密配制10 μg/ml的依達(dá)拉奉對(duì)照品溶液，通過(guò)紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行掃描，依達(dá)拉奉在242 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，因而選擇242 nm作為依達(dá)拉奉的檢測(cè)波長(zhǎng)。乙腈和磷酸鹽緩沖液比例15∶85作為流動(dòng)相，得到的峰形較好、保留時(shí)間適宜。精密度實(shí)驗(yàn)和加樣回收實(shí)驗(yàn)證實(shí)該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、選擇性好、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可有效地應(yīng)用于依達(dá)拉奉注射液的質(zhì)量控制。

3.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)pH值、顏色、重金屬含量、細(xì)菌和內(nèi)毒素等標(biāo)準(zhǔn)控制注射液質(zhì)量，依達(dá)拉奉原料藥重金屬的含量極低，在注射液工藝制備和生產(chǎn)過(guò)程中并未引入重金屬等相關(guān)物質(zhì)，故此項(xiàng)不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本文所采用的三批樣品均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案的要求。

3.3 穩(wěn)定性影響因素試驗(yàn)，加速試驗(yàn)和室溫留樣觀察試驗(yàn)結(jié)果表明:本品在各考察條件下，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，說(shuō)明本品在室溫下有效期可定為2年。

1 國(guó)家藥典委員會(huì)主編.中國(guó)藥典.第1部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

2 付桂英，溫明鈴，賈立華，等.高效液相色譜法測(cè)定依達(dá)拉奉注射液的含量及有關(guān)物質(zhì).解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2006，22:458-460.

3 董繼勝，黃利鵬，馬歆茹.依達(dá)拉奉注射液質(zhì)量研究.黑龍江醫(yī)藥，2010，23:340-3342.

4 弋金龍，黃翔，何春曉，等.丹紅注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其穩(wěn)定性研究.中國(guó)中醫(yī)急癥，2013，22:864-865.

5 呂應(yīng)年，龔先玲.半邊旗5F注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.中藥雜志，2008，33:2343-2346.

Study on the quality standard and stability of edaravone injection

CHEN Nan*，GAI Chunyan，CHEN Gang et al.*The First Hospital Affiliated to Beijing University，Beijing 100034，China

ObjectiveTo establish the quality standard of edaravone injection and to investigate its stability.MethodsThe quantitative detection of edaravone injection was performed by HPLC，detection wavelength was 242nm，theoretical plate number based on the chromatogram of edaravone was more than 2000，retention time was12 ～ 15 min.The quality was controlled by pH，contents of heavy metals，bacterial endotoxin and sterility tests.The stability of edaravone injection was evaluated by influence factors test，acceleration test and room temperature storage observation test.ResultsFrom 1.5 to 7.5μg/μl，the concentration and absorbance of edaravone injection had a good linear relationship(r=0.9994)，the average recovery rate was100.02%，and RSD was 0.96%.The pH of three batches injections was 2.8，2.9，2.8，respectively，moreover，the contents of heavy metals，bacterial endotoxin and sterility tests were consistent with pharmacopoeias regulation.ConclusionThe method is simple，accurate，stable and repeatable，which can effectively control the quality of edaravone injection and can assure its stability.

edaravoneInjection;quality standard;stability

R 927.11

A

1002－7386(2014)14－2098－03

10.3969/j.issn.1002 －7386.2014.14.006

100034 北京市，北京大學(xué)第一醫(yī)院(陳楠);北京大學(xué)天然藥物及仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(蓋春燕、陳剛、付宏征)

付宏征，100034 北京大學(xué)天然藥物及仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;Email:drhzfu@sina.com

2014－01－11)