金針菇、香菇和蛹蟲草對小鼠體內(nèi)抗氧化酶活性的影響

陳慧嬋，裴 斐，楊文建，辛志宏，趙立艷，安辛欣，楊方美，胡秋輝,*

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇 南京 210095；2.南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇 南京 210046）

金針菇、香菇和蛹蟲草對小鼠體內(nèi)抗氧化酶活性的影響

陳慧嬋1，裴 斐1，楊文建2，辛志宏1，趙立艷1，安辛欣1，楊方美1，胡秋輝1,*

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇 南京 210095；2.南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇 南京 210046）

為研究金針菇、香菇和蛹蟲草3種常見食藥用菌對小鼠體內(nèi)抗氧化酶活性的影響，采用金針菇、香菇和蛹蟲草低、中、高劑量（金針菇和香菇分別為0.8、1.6、2.5 g/kg，蛹蟲草分別為0.08、0.16、0.25 g/kg）連續(xù)4周灌胃ICR清潔級(jí)小鼠，觀察其對小鼠血清和肝臟總抗氧化能力（total anti-oxidant capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力、全腦單胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）活力及心臟過氧化物酶（peroxidase，POD）活力的影響。結(jié)果表明：金針菇、香菇和蛹蟲草均能不同程度地提高血清和肝臟中T-AOC、SOD活力和GSH-Px活力，降低血清和肝臟中MDA含量，降低全腦MAO活力和提高心臟POD的活力，說明金針菇、香菇和蛹蟲草具有良好的體內(nèi)抗氧化作用，且蛹蟲草的體內(nèi)抗氧化作用優(yōu)于香菇和金針菇。其抗氧化機(jī)制可能與提高機(jī)體總抗氧化能力、提高抗氧化酶活力、清除自由基和減少過氧化脂質(zhì)有關(guān)。

金針菇；香菇；蛹蟲草；小鼠；抗氧化酶活性

生物體在生命過程中會(huì)不斷地產(chǎn)生自由基，自由基對生物體具有雙重作用：適量的自由基對維持生物體正常的生理代謝活動(dòng)是必需的；但過量的自由基會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞組織受到氧化脅迫，使脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、DNA等生物大分子發(fā)生氧化損傷，導(dǎo)致細(xì)胞和機(jī)體組織的損傷，從而引發(fā)癌癥、心血管疾病等多種疾病以及衰老問題[1-2]。近年來，隨著生活水平的提高，抗氧化與抗衰老的問題越來越受到人們的關(guān)注，關(guān)于探究功能因子抗氧化的機(jī)制及如何將其應(yīng)用在食品和藥品中已經(jīng)成為研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)問題。

食藥用菌是人類可食用或藥用的大型真菌，它們不僅含有多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和礦物質(zhì)等豐富的營養(yǎng)成分，還含有腺嘌呤核苷、?；撬帷⒏事洞?、內(nèi)酯等豐富的保健功能因子[3-5]。已有許多研究結(jié)果表明，食藥用菌多糖具有免疫調(diào)節(jié)[6-7]、降血糖、降血脂[8]、抗病毒、抗腫瘤[9-10]、抗疲勞、耐缺氧、抗氧化和美容益壽等多種功效[11-12]，且已被廣泛用于自身免疫性疾病和腫瘤疾病等的臨床輔助治療中[13]。目前，大多學(xué)者主要集中于研究珍貴食藥用菌的體內(nèi)抗氧化作用，但對常見食藥用菌的體內(nèi)抗氧化研究尚不充足。如Chen Xiaoping等[14]研究了靈芝多糖對患宮頸癌大鼠的血清中抗氧化酶和免疫反應(yīng)的影響。結(jié)果表明，靈芝多糖能有效清除自由基，發(fā)揮抗氧化作用。王宏雨等[15]通過研究竹蓀提取物在衰老模型小鼠體內(nèi)的抗氧化作用，發(fā)現(xiàn)竹蓀提取物可以有效保護(hù)受損內(nèi)臟，防止氧化損傷，說明竹蓀提取物具有較強(qiáng)的體內(nèi)抗氧化活性。程光宇等[16]研究發(fā)現(xiàn)雞腿菇子實(shí)體多糖能有效提高酶和非酶體系抗氧化能力，并調(diào)節(jié)抗氧化酶同工酶基因的表達(dá)。

本研究依據(jù)研究問題和變量的性質(zhì),結(jié)合問卷調(diào)查結(jié)果,采用spss19.0對樣本進(jìn)行t檢驗(yàn)等方法,探究在前測和后測中,每個(gè)因變量是否具有顯著差異。

為了進(jìn)一步全面地探討常見食藥用菌的體內(nèi)抗氧化作用，本研究選取金針菇（Flammulina velutipes）、香菇（Lentinula edodes）和蛹蟲草（Cordyceps militaris）3種常見的食藥用菌為研究對象，通過對小鼠體內(nèi)血清、肝臟、腦、心臟等組織的總抗氧化能力、多種抗氧化酶和代謝產(chǎn)物等生化指標(biāo)的測定，探討其抗氧化的效果及機(jī)制，以期為食藥用菌抗氧化研究及開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、動(dòng)物、試劑與儀器

新鮮金針菇，購于南京市蘇果超市，經(jīng)清洗后晾曬至半干后，放于烘箱中60℃鼓風(fēng)烘干，超微粉碎機(jī)粉碎，過300目篩，置于4℃?zhèn)溆?。干香菇和蛹蟲草，分別購于南京市蘇果超市和南京芊奇佳菌業(yè)，放于烘箱中60℃鼓風(fēng)烘干，超微粉碎機(jī)粉碎，過300目篩，置于4℃?zhèn)溆谩?/p>

你就別難為我了好不好？對方也急了，聲音高起來，制度又不是我定的，全國的民政局都是這樣，我一個(gè)小小的辦事員能有什么辦法？你以為我就不想給你們提供方便？你以為我心里就好受？你以為我生來就是鐵石心腸？我……

蛋白定量、總抗氧化能力（total anti-oxidant capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathioneperoxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、單胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）和過氧化物酶（peroxidase，POD）測定試劑盒 南京建成生物工程研究所；其余試劑均為分析純。

從目前社工組織的發(fā)展現(xiàn)狀來看，借助政府的資源促進(jìn)社工組織的成長和發(fā)育，就當(dāng)下而言是一條切實(shí)可行的道路。但如果雙方的依賴關(guān)系不對稱且無法通過其他途徑得到彌補(bǔ)，那么雙方的互動(dòng)關(guān)系勢必不平等。現(xiàn)階段大多數(shù)社工組織與政府的關(guān)系正處于這種非對稱性的依賴。因此，有部分社工組織為了獲取政府的資源支持，把自己的部分自主權(quán)讓渡給政府，進(jìn)而影響了社工組織的獨(dú)立性和自主性。

DHG-9030A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒科技有限公司；Allegra 64R冷凍離心機(jī) 美國Beckman公司；組織勻漿機(jī) 上?？祪x儀器有限公司；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司；JH-722s可見分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司；ELX800酶標(biāo)儀美國Bio-Tek公司。

T-AOC可以全面地反映機(jī)體的非酶促與酶促整個(gè)防御體系的抗氧化能力[18]。SOD是體內(nèi)主要的抗氧化酶之一，其活性的高低反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力[19-20]。MDA是氧自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸而形成的脂質(zhì)過氧化物，它的高低間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，所以常常與SOD相互配合測定[21-22]。GSH-Px也是體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，它能阻斷由過氧化物引發(fā)的自由基對機(jī)體的傷害，從而保護(hù)細(xì)胞膜免受過氧化的損傷[23-24]。

羅爹爹練的是太極拳。每天都有師傅領(lǐng)著他們這群爹爹婆婆打拳。所謂師傅，也不過一個(gè)太極拳愛好者而已。羅爹爹說，打幾圈拳，呼吸一下新鮮空氣，再跟朋友聊聊天，就算老了沒得用，也覺得生活真的蠻有意思。

1.2.1 動(dòng)物分組及劑量設(shè)計(jì)

將100只ICR清潔級(jí)小鼠隨機(jī)分為10組，分別為空白（生理鹽水）對照組、金針菇（低、中、高）劑量組、香菇（低、中、高）劑量組和蛹蟲草（低、中、高）劑量組，每組10只?？瞻讓φ战M小鼠每日灌胃生理鹽水，金針菇和香菇相應(yīng)的低、中、高組的灌胃劑量分別按照人體每日推薦攝入量的10倍進(jìn)行設(shè)計(jì)，即小鼠的每日灌胃劑量分別為0.8、1.6、2.5 g/kg，蛹蟲草低、中、高組的灌胃劑量分別為其他兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組的1/10[17]。所有小鼠自由攝食飲水，連續(xù)灌胃4周。

1.2.2 體內(nèi)生化指標(biāo)測定

末次灌胃1h后，對各組小鼠進(jìn)行眼眶采血并分離血清待用，并解剖取腦、心臟和肝臟，計(jì)算各臟器指數(shù)（%），表示為器官質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量。然后用冰冷生理鹽水將解剖得到的臟器組織分別制成10%肝臟勻漿、10%腦勻漿和10%心臟勻漿，保存于－20℃待用。血清及肝臟中T-AOC、SOD活力、MDA含量和GSH-Px活力，全腦MAO活力和心臟POD活力的測定均按照測定試劑盒說明書操作。

2.3 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠血清T-AOC、SOD、MDA、GSH-Px的影響

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用PASW statistics18軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以表示；顯著性分析為單向方差分析，多重比較采用LSD檢驗(yàn)；P＜0.05表示有顯著性差異，P＜0.01表示有極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.2 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠肝臟、腦、心臟指數(shù)的影響

體質(zhì)量指標(biāo)可以在一定程度上反映小鼠的生長發(fā)育情況。由表1可見，隨著飼養(yǎng)天數(shù)的增加，各組小鼠體質(zhì)量都有所增加。且灌胃3種不同食藥用菌各劑量組第1天、第14天和第28天的小鼠體質(zhì)量及實(shí)驗(yàn)期間小鼠的體質(zhì)量增加與空白對照組相比，均無顯著差異（P＞0.05），說明灌胃食藥用菌并未對小鼠的體質(zhì)量、生長發(fā)育造成不良影響。在整個(gè)飼養(yǎng)過程中，各組小鼠均活潑好動(dòng)，食欲良好，皮毛順滑有光澤，無明顯脫毛現(xiàn)象。

表1 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠體質(zhì)量的影響Table 1 Effects of different doses of three edible fungi on body weight in mice mice

2.1 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠體質(zhì)量的影響

播種當(dāng)年于8月3日在苜蓿盛花期進(jìn)行第1次刈割，留茬5 cm。9月10日對再生草分種取樣，選取頂部往下數(shù)第3～4片無損壞葉片10 g，在液氮中迅速冷凍，帶回實(shí)驗(yàn)室后，存放冰柜中保存?zhèn)溆谩３趸锲缁?SOD)活性采用NBT光還原法測定，過氧化物酶(POD)活性采用愈創(chuàng)木酚法測定，丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法測定，脯氨酸(Pro)含量采用酸性茚三酮法測定[17]。

表2 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠肝臟、腦、心臟指數(shù)的影響Table 2 Effects of different doses of three edible fungi on liver, brain and hear indexes in mice

由表3可見，與生理鹽水對照組相比，3種食藥用菌的各劑量組均有提高血清中T-AOC、SOD活力和GSH-Px活力以及降低MDA含量的作用。各組小鼠經(jīng)連續(xù)灌胃不同劑量食藥用菌4周后，除了金針菇低劑量組沒有顯著提高血清T-AOC和降低MDA含量外，金針菇中、高劑量組，香菇和蛹蟲草的低、中、高劑量組均能顯著提高血清中T-AOC、SOD活力和GSH-Px活力，同時(shí)顯著降低MDA含量（P＜0.05，P＜0.01），并且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系。表明金針菇、香菇和蛹蟲草具有很強(qiáng)的提高血清總抗氧化能力，提高血清中抗氧化酶活力和清除血清中和脂質(zhì)過氧化物的能力，具有抗氧化的效果。

1.3 數(shù)據(jù)處理

在開展帷幕灌漿施工過程中，每一段應(yīng)用的設(shè)計(jì)壓力有所不同，第一段的長度為2.0m，注漿壓力為150MPa，第二段的長度為5.0m，注漿壓力為200MPa，第三段的長度為長5.0m，注漿壓力為300MPa，如果遇到某個(gè)孔段吃漿量較大，為了控制注漿效果，應(yīng)用少灌多復(fù)的方法進(jìn)行灌注。

工藝A：藍(lán)莓打漿→添加白糖150 g/kg→添加酵母0.2 g/kg→低溫預(yù)發(fā)酵72 h→25℃主發(fā)酵30 d→過濾離心后添加偏重亞硫酸鉀和果膠酶各0.1 g/kg→16℃陳釀30 d后添加偏重亞硫酸鉀0.1 g/kg→殺菌→成品酒。

1.2 方法

ICR清潔級(jí)小鼠100只，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心提供。

對于單板受力病害，在橋面鋪裝厚度足夠的情況下，鋪設(shè)雙層鋼筋網(wǎng)片能夠很好地解決橫向聯(lián)系不足的問題，但若受橋面鋪裝厚度限制，整體或部分橋面鋪裝只能設(shè)單層網(wǎng)片時(shí)，需要通過其他方式來增強(qiáng)梁板之間的橫向聯(lián)系。本方案是通過增加鋼板來增強(qiáng)板梁之間的橫向聯(lián)系，在今后對類似病害維修處治時(shí)，需根據(jù)現(xiàn)場的具體條件確定合理、經(jīng)濟(jì)的方案。

表3 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠血清T-AOC、SOODD、MDA、GSH-PPxx的影響Table 3 Effects of different doses of three edible fungi on T-AOC, SOD, MDA and GSH-Px in serum of mice

臟器指數(shù)可以在一定程度上反映灌胃食藥用菌對小鼠器官的影響情況，從而對食藥用菌的毒副安全性進(jìn)行初步分析。由表2可見，與空白對照組相比，小鼠經(jīng)連續(xù)灌胃3種不同劑量的食藥用菌4周后，其對小鼠肝臟指數(shù)、腦指數(shù)和心臟指數(shù)均沒有顯著差異（P＞0.05），說明灌胃食藥用菌并未對小鼠的肝臟、腦和心臟造成影響。

3種食藥用菌之間，蛹蟲草各劑量組對小鼠血清各指標(biāo)的改善效果最佳，其次為香菇各劑量組，最后為金針菇各劑量組。其中，蛹蟲草高劑量組效果最好，能使小鼠血清T-AOC增加65%，血清SOD活力增加39%，血清GSH-Px活力增加29%，同時(shí)血清MDA含量降低46%。

2.4 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠肝臟T-AOC、SOD、GSH-Px活力及MDA含量的影響

表4 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠肝臟T-AOC、SOD、GSH-Px活力及MDA含量的影響Table 4 Effects of different doses of three edible fungi on T-AOC, SOD, MDA and GSH-Px in liver of mice

由表4可見，與生理鹽水對照組相比，3種食藥用菌的各劑量組均有提高肝臟中T-AOC、SOD活力和GSH-Px活力以及降低MDA含量的作用。與空白對照組相比，金針菇和香菇的低、中、高劑量組均能極顯著提高肝臟T-AOC（P＜0.01），并且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系；蛹蟲草中、高劑量組能顯著地提高肝臟T-AOC（P＜0.05，P＜0.01），但其低劑量組沒有顯著差異。金針菇高劑量組，香菇和蛹蟲草的中、高劑量組中肝臟SOD活力明顯高于空白對照組（P＜0.05，P＜0.01）。金針菇和香菇的中、高劑量組，以及蛹蟲草的低、中、高劑量組均能極顯著降低肝臟MDA含量（P＜0.01）。金針菇和香菇高劑量組，以及蛹蟲草低、中、高劑量組均能顯著提高肝臟GSH-Px活力（P＜0.05，P＜0.01）。表明金針菇、香菇和蛹蟲草具有很強(qiáng)的提高肝臟總抗氧化能力，提高肝臟中抗氧化酶活力和清除肝臟中超氧陰離子自由基和脂質(zhì)過氧化物的能力，具有抗氧化的效果。

3種食藥用菌之間，蛹蟲草各劑量組對小鼠肝臟各指標(biāo)的綜合改善效果最佳，其次為香菇各劑量組，最后為金針菇各劑量組。其中，蛹蟲草高劑量組綜合效果最好，能使小鼠肝臟SOD活力增加54%，肝臟GSH-Px活力增加56%，同時(shí)肝臟MDA含量降低60%。

2.5 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠全腦MAO、心臟POD的影響

表5 灌胃不同劑量食藥用菌對小鼠全腦MAO、心臟POD的影響Table 5 Effects of different doses of three edible fungi on MAO in brain and POD in heart of mice

MAO在機(jī)體的腦、肝臟、腎等組織中含量較多，研究發(fā)現(xiàn)MAO活性會(huì)隨著年齡增長而急劇上升，與衰老密切相關(guān)[25]。POD可以將H2O2轉(zhuǎn)變成無害的水和氧，從而消除H2O2對機(jī)體的傷害[25-26]。由表5可見，與空白對照組相比，各組小鼠經(jīng)灌胃不同劑量食用菌4周后，金針菇、香菇和蛹蟲草的中、高劑量組均可以顯著降低全腦的MAO活力（P＜0.05，P＜0.01），蛹蟲草高劑量組最高可以降低67%。表明灌胃中、高劑量的金針菇、香菇和蛹蟲草可以在一定程度上抑制正常腦衰老過程中產(chǎn)生的過高的MAO活力。

與空白對照組相比，金針菇高劑量組，香菇和蛹蟲草的中、高劑量組可以顯著增加小鼠心臟的POD活力，但它們的低劑量組則沒有差異。表明金針菇、香菇和蛹蟲草均可以催化有害物質(zhì)H2O2的分解，從而減少自由基和過氧化脂質(zhì)的形成，具有減輕心臟被氧化的效果。

3 結(jié) 論

本研究結(jié)果顯示，金針菇、香菇和蛹蟲草3種食藥用菌均能不同程度地提高血清和肝臟中T-AOC，SOD活力和GSH-Px活力，降低血清和肝臟中MDA含量，降低全腦MAO活力和提高心臟POD活力，說明這3種食藥用菌可能是通過提高機(jī)體總抗氧化能力，提高機(jī)體多種抗氧化酶活力，清除機(jī)體產(chǎn)生的過多自由基，同時(shí)催化對機(jī)體有害物質(zhì)的分解，有效地防止或減輕機(jī)體自由基所導(dǎo)致的氧化損傷，從而起到抗氧化的作用。因此，金針菇、香菇和蛹蟲草具有良好的體內(nèi)抗氧化作用，且蛹蟲草的抗氧化作用優(yōu)于香菇優(yōu)于金針菇。這一結(jié)果可以為開發(fā)新的保健食品提供科學(xué)依據(jù)。

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Effects of Flammulina velutipes, Lentinula edodes and Cordyceps militaris on Antioxidative Enzyme Activities in Mice

CHEN Hui-chan1, PEI Fei1, YANG Wen-jian2, XIN Zhi-hong1, ZHAO Li-yan1, AN Xin-xin1, YANG Fang-mei1, HU Qiu-hui1,*
(1. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2. College of Food Science and Engineering, Nanjing University of Finance and Economics, Nanjing 210046, China)

Experiments were made to investigate the effects of oral administration of three edible fungi, Flammulina velutipes, Lentinula edodes and Cordyceps militaris, on the activities of antioxidative enzymes in mice. ICR mice were administered by gavage with aqueous suspensions of powdered F. velutipes, L. edodes and C. militaris, respectively, at three doses, 0.8 g/kg for a low-dose group, 1.6 g/kg for a medium-dose group, and 2.5 g/kg for a high-dose group, via intragastric administration. After 4 weeks, the body weight, the total anti-oxidant capacity (T-AOC), the activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione-peroxidase (GSH-Px), and malondialdehyde (MDA) content in serum and liver, monoamine oxidase (MAO) activity in brain and peroxidase (POD) activity in heart were measured,. The results indicated that in comparison with those in thethe normal saline control mice, the T-AOC, the activities of SOD and GSH-Px in serum and liver and POD activity in heart were increased, while the MDA levels in serum and liver as well as MAO activity in brain were decreased to different extents in mice fedadministered with each of the edible fungi. All fungal the fungal species had good antioxidative effects in ICR mice with those of C. militaris being superior to those of L. edodes and F. velutipes. The antioxidative mechanism smay be related with improving the in vivo antioxidant capacity, enhancing the activities of antioxidative enzymes, removing free radicals and reducing lipid peroxidation.

Flammulina velutipes; Lentinula edodes; Cordyceps militaris; mice; antioxidative enzyme activities

TS255.1

A

1002-6630(2014)01-0219-05

10.7506/spkx1002-6630-201401043

2013-09-10

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（CARS-24）

陳慧嬋（1988—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称窢I養(yǎng)與化學(xué)。E-mail：2011108021@njau.edu.cn

*通信作者：胡秋輝（1962—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)與工程。E-mail：qiuhuihu@njau.edu.cn