真姬菇在高溫脅迫下的差異表達(dá)蛋白分析

劉琳 賈培培 盧偉東 郭奇林 郭立忠

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 山東省應(yīng)用真菌重點實驗室，青島 266109；2.西北農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，楊凌 712100）

真姬菇（Hypsizigus marmoreus），別名玉蕈，味道比平菇鮮，肉質(zhì)比滑菇厚，質(zhì)地脆嫩、口感極佳，因具有獨(dú)特的蟹香味，又稱蟹味菇。據(jù)報道，真姬菇富含蛋白質(zhì)和人體必需的8 種氨基酸，在日本，人們把其與珍貴的松茸相提并論，享有“聞則松茸，食則玉蕈”的美譽(yù)，已成為僅次于金針菇的重要食用菌品種［1］。真姬菇含有多種生物活性物質(zhì)，具有抗癌、防癌、降血壓、提高免疫力、延長壽命等獨(dú)特功效。從真姬菇子實體中提取的核糖體抑制蛋白Hypsin、膠原質(zhì)蛋白HM23 及多糖均具有顯著的抗腫瘤效果［2-4］。Ikemizu 等［5］從真姬菇菌絲體中提取分離到血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI），ACEI 能夠有效降低血壓，減緩高血壓和糖尿病患者腎功能的衰退，且副作用小，世界衛(wèi)生組織將其推薦為抗高血壓的一線藥物。因此，真姬菇作為一種食藥兩用真菌具有巨大的開發(fā)潛力和良好的市場前景。

真姬菇屬于中偏低溫型食用菌，溫度是影響其生長及品質(zhì)的重要因素［6］。菌絲生長最適溫度20-25℃，30℃以上生長緩慢，超過 35℃時菌絲不再生長，45℃以上無法存活。當(dāng)溫度較高時，菌蓋變薄且展開加快，菇體色澤變白，鮮菇品質(zhì)明顯下降。目前，真姬菇的栽培已經(jīng)規(guī)?；?，但由于高溫對其生長的限制，增加了周年栽培成本，國內(nèi)真姬菇只在大型超市中出售，且價格較高［7］。研究真姬菇溫度脅迫相關(guān)機(jī)理是解決高溫限制，降低生產(chǎn)成本、提高產(chǎn)量的有效方法，而真姬菇在高溫脅迫下的抗逆機(jī)理研究尚未見報道。本研究應(yīng)用雙向電泳和質(zhì)譜蛋白質(zhì)組技術(shù)，通過比較最適溫度（25℃）和高溫脅迫條件下（42℃）真姬菇菌絲體的蛋白表達(dá)差異，篩選與高溫脅迫緊密相關(guān)的蛋白，并探討其功能，旨在為實現(xiàn)通過基因操作選育耐熱性強(qiáng)的優(yōu)良真姬菇菌種，降低周年栽培生產(chǎn)成本奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

白真姬菇G12 為青島農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省應(yīng)用真菌重點實驗室保藏。將G12 接種到PDA 平板上，25℃培養(yǎng)3 周后分為兩組：對照組（繼續(xù)在25℃培養(yǎng)2 h）、高溫處理組（42℃熱激2 h）。

1.2 方法

1.2.1 菌絲體全蛋白的提取 刮取對照組和高溫處理組的真姬菇菌絲體各1.0 g，液氮研磨后，分別用Tris-飽和酚法［8］、TCA/丙酮法［9］、尿素裂解法［10］提取菌絲體全蛋白。采用Bradford 法［11］測定提取液中全蛋白總量，SDS-PAGE［12］檢測蛋白，分離膠濃度為12%，濃縮膠濃度為5%，Marker 上樣體積4 μL，蛋白上樣體積17 μL。

1.2.2 雙向電泳 選用24 cm 的IPG 膠條（pH4-7），蛋白上樣量1.2 mg，膠條水化16 h 后，進(jìn)行等電聚焦。聚焦參數(shù)：溫度20℃，最大電流50 μA/膠條。聚焦程序：100 V×1 h，500 V×1 h，1 000 V×1 h，8 000 V×4 h，8 000 V×8 h，500 V×∞。第一向電泳等電聚焦結(jié)束后，迅速取出IPG 膠條，吸干膠條上的礦物油和多余的樣品，將膠條先后置于平衡緩沖液Ⅰ［6 mol/L 尿素、75 mmol/L Tris-HCl（pH8.8）、30%甘油、2% SDS、0.002% 溴酚藍(lán)、1% DTT］和平衡緩沖液Ⅱ［6 mol/L 尿素、75 mmol/L Tris-HCl（pH8.8）、30%甘油、2% SDS、0.002%溴酚藍(lán)、2.5%碘乙酰胺］中各平衡15 min，取出膠條，吸去多余的平衡液。第二向SDS-PAGE 凝膠電泳采用Ettan-DALT-Six 系統(tǒng)，水浴循環(huán)儀設(shè)定溫度為20℃，聚丙烯酰胺凝分離膠濃度為12.5%，電泳程序設(shè)置為2 W×45 min，17 W/gel 電泳至溴酚藍(lán)前沿距離玻璃板下緣0.5 cm 時停止電泳。凝膠染色采用銀染。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 凝膠銀染后，用UMAX 光密度掃描儀獲得分辨率為300dpi 的電子圖像。采用PDQuest8.0 版軟件進(jìn)行圖象分析，為驗證自動檢測到的蛋白點，需要對所有蛋白點進(jìn)行人工檢查和編輯，主要操作包括凝膠蛋白點檢測、圖像背景扣除、蛋白點灰度值標(biāo)準(zhǔn)化。比較處理組和對照組的雙向電泳圖譜，確定差異蛋白點（表達(dá)量差異倍數(shù)＞3.0），進(jìn)行蛋白質(zhì)的膠內(nèi)酶解及肽段提?。?3］。樣品送北京華大蛋白組研發(fā)中心進(jìn)行MALDI-TOF-MS 鑒定。根據(jù)質(zhì)譜結(jié)果，用MASCOT 軟件搜索MSDB、NCBI 等數(shù)據(jù)庫，初步鑒定相關(guān)蛋白并分析其生理功能。

2 結(jié)果

2.1 全蛋白提取方法的評價

為了制備適合蛋白質(zhì)組分析的蛋白樣品，獲得較好的雙向電泳效果，分別采用TCA/丙酮法、Tris-飽和酚法和尿素裂解法提取真姬菇菌絲體的全蛋白。Bradford 法檢測蛋白量結(jié)果表明，TCA/丙酮法獲得的蛋白總量最高，達(dá)到1.6 mg/g 菌絲體；Tris-飽和酚法稍低，蛋白量為1.36 mg/g 菌絲體；尿素裂解法僅得到蛋白0.89 mg/g 菌絲體。全蛋白提取液的SDSPAGE 結(jié)果（圖1）表明，3 種方法提取的菌絲體蛋白分子量都在19-118 kD 之間；全蛋白濃度大小順序為Tris-飽和酚法＞尿素裂解法＞TCA/丙酮法。將上述3 種方法制備的菌絲體全蛋白提取液應(yīng)用于雙向電泳檢測，凝膠圖譜分析（圖2）表明，Tris-飽和酚法獲得的全蛋白提取液在凝膠上可檢測到900多個蛋白點且雜質(zhì)少，而其它兩種方法的全蛋白提取液，圖譜上蛋白點較少。因此，選擇Tris-飽和酚法提取真姬菇對照組和高溫處理組的菌絲體全蛋白。

2.2 高溫脅迫下的差異表達(dá)蛋白

圖1 SDS-PAGE 檢測3 種方法提取的全蛋白

圖2 三種方法提取的全蛋白2-DE 圖譜

采用Tris-飽和酚法提取真姬菇菌絲體對照組和高溫處理組的全蛋白，然后進(jìn)行雙向電泳檢測，用PDQuest8.0 版軟件分析電泳凝膠圖譜。對照組凝膠上約有890 個蛋白點，高溫處理組凝膠上約有930個蛋白點（圖3）。軟件分析對照組和高溫處理組的凝膠圖譜，篩選出12 個表達(dá)豐度差異倍數(shù)大于3 的蛋白點，其中6 個蛋白點的表達(dá)量上調(diào)，6 個蛋白點的表達(dá)量下調(diào)。凝膠上，這12 個蛋白點分布在分子量80 kD 以下，pH4-6 的區(qū)域。

圖3 對照組和高溫處理組菌絲體全蛋白2-DE 圖譜比較

2.3 差異表達(dá)蛋白的質(zhì)譜鑒定

將12 個具有顯著表達(dá)差異的蛋白點進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，根據(jù)獲得的信息用MASCOT 軟件搜索MSDB、NCBI 等數(shù)據(jù)庫，初步鑒定7 個蛋白。另外5 個蛋白由于分辨率或靈敏度不夠（酶解不充分或樣品含有雜質(zhì)），或者因匹配率、覆蓋率太低未能被鑒定。7個被鑒定的蛋白質(zhì)中，6 個蛋白表達(dá)量上調(diào)（點1、7、8、9、10 和11），1 個蛋白表達(dá)量下調(diào)（點2）。蛋白鑒定結(jié)果如下：DEHA2G15532p（點1），Spa2 同源結(jié)構(gòu)域（點2），肽酶M76 家族（點7），HSP70（點8），SNF2家族的DNA 修復(fù)蛋白（點9），細(xì)胞色素p450（點10），SAM 域家族和鋅指蛋白的混合物（點11）。各蛋白的詳細(xì)信息見表1。

3 討論

3.1 菌絲體全蛋白的提取

TCA/丙酮法能夠?qū)⒄婕Ч骄z體中的所有干物質(zhì)沉淀，蛋白損失少，因此獲得的全蛋白總量最多。但其沉淀的蛋白因與膜或其它組織結(jié)合而較難溶解，需要大量裂解液才能溶解完全，所以蛋白質(zhì)提取液濃度較低。Tris-飽和酚法由于只收集酚相、苯酚與水相的界面，蛋白質(zhì)總量較TCA/丙酮法少，但沉淀蛋白易溶于裂解液，因此，獲得的蛋白提取液濃度最高。TCA/丙酮法制備的樣品由于雜質(zhì)多且鹽濃度高，電壓很難順利到達(dá)聚焦電壓，聚焦不充分造成蛋白點較少；尿素裂解法獲得的全蛋白在雙向電泳凝膠圖譜上蛋白點較少，可能與樣品蛋白總量少且濃度較低有關(guān)。Tris-飽和酚法制備的全蛋白提取液，蛋白濃度高，蛋白總量能夠滿足雙向電泳檢測需求，獲得的雙向電泳圖譜，蛋白得率高，分辨率高，重復(fù)性好，因此，以Tris-飽和酚法作為真姬菇菌絲體全蛋白的提取方法。

表1 差異蛋白點的質(zhì)譜鑒定結(jié)果

3.2 差異表達(dá)蛋白的功能分析

在已被鑒定的7 個蛋白中，DEHA2G15532p（點1）目前僅在漢遜德巴利酵母的兩個菌株中發(fā)現(xiàn)，數(shù)據(jù)庫中沒有其結(jié)構(gòu)和功能的相關(guān)信息，其它6 個蛋白質(zhì)按其參與的生理代謝過程歸納為5 類。

3.2.1 調(diào)節(jié)功能和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的蛋白質(zhì)：Spa2 同源結(jié)構(gòu)域（SHD）、SAM 域家族蛋白和鋅指蛋白 Spa2 同源結(jié)構(gòu)域（SHD）與多種蛋白相互作用，參加細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程［14，15］。Ryan 等［16］的研究表明，SHD 是GIT（G-protein-coupled receptors kinase interacting protein）家族蛋白的功能域，能夠與p21 基因激活的磷酸化蛋白激酶（PAK）相互作用，PAK 通過調(diào)節(jié)Rac1/Cdc42 誘導(dǎo)激活絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases，MAPKs），MAPKs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路將細(xì)胞外刺激信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞及其核內(nèi)，并引起細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞的極化和分裂。在釀酒酵母細(xì)胞中，Spa2蛋白定位于極性生長點，為細(xì)胞極性生長所必需，另外，Spa2 蛋白在細(xì)胞交配過程中的形態(tài)學(xué)變化中起重要作用，缺失Spa2 基因，細(xì)胞交配效率降低了90%［17］。高溫脅迫下，真姬菇細(xì)胞通過Spa2 同源結(jié)構(gòu)域參與的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，調(diào)節(jié)細(xì)胞的極性生長和分裂。SHD 的表達(dá)量下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞分裂次數(shù)減少或分裂周期延長，真姬菇菌絲細(xì)胞的生長繁殖受到抑制。這在一定程度上降低了細(xì)胞的能量消耗，有利于提高真姬菇在逆境中的生存能力。

Schultz 等［18］的研究表明，SAM 是重要的蛋白結(jié)合域，參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。pH 結(jié)構(gòu)域是SAM 的重要功能區(qū)域，約由100-120 個氨基酸殘基組成，與磷酸肌醇類化合物具有很強(qiáng)的親和力［19］。SAM 域家族蛋白通過與磷酸肌醇類化合物的相互作用，對胞外刺激做出反應(yīng)，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜上［20］。另有文獻(xiàn)報道pH結(jié)構(gòu)域能夠與G蛋白的β、γ亞基結(jié)合，并參與調(diào)節(jié)宿主蛋白的活性［21］。高溫處理后，SAM域家族蛋白的表達(dá)量顯著上調(diào)，說明它可能參與真姬菇抗高溫反應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。Orrecilla 等［22］監(jiān)測了魚腥藻（Anabaena sp. PCC7120）細(xì)胞內(nèi)的游離Ca2+濃度，發(fā)現(xiàn)熱激20 min 細(xì)胞內(nèi)的游離Ca2+濃度達(dá)到最大值。試驗中我們發(fā)現(xiàn)熱激后真姬菇菌絲體細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度明顯增加。高溫脅迫下，真姬菇可能通過磷脂酰肌醇信號通路，以Ca2+作為第三信使，引發(fā)一系列生理生化反應(yīng)，緩解逆境傷害。

鋅指蛋白（點11）是一種具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，通過和核酸結(jié)合或與蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控基因的表達(dá)。高溫脅迫下，鋅指蛋白通過表達(dá)量上調(diào)，調(diào)控高溫相關(guān)基因的表達(dá)，參與真姬菇的高溫脅迫過程。

3.2.2 蛋白質(zhì)降解有關(guān)的蛋白：肽酶M76 家族 肽酶M76 家族蛋白能夠?qū)⒌鞍踪|(zhì)直接水解為氨基酸［23］。有研究表明，高等植物在冷害、干旱、光輻射和高溫等環(huán)境脅迫下會誘導(dǎo)蛋白發(fā)生錯誤折疊，如果不受抑制將導(dǎo)致細(xì)胞死亡［24］。高溫下，Bt 棉棉鈴中的肽酶活性顯著增加，促進(jìn)了蛋白質(zhì)的分解，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)可溶性蛋白含量大幅度下降［25］。高溫脅迫下，真姬菇菌絲體細(xì)胞可能通過提高肽酶的表達(dá)量，促進(jìn)錯誤折疊蛋白的降解，增強(qiáng)生存能力。

3.2.3 熱激蛋白：HSP70 HSP70 是高溫刺激誘導(dǎo)生成或增加合成的蛋白質(zhì)，在機(jī)體中呈現(xiàn)重要的應(yīng)對高溫的細(xì)胞策略［26］。高溫會導(dǎo)致細(xì)胞蛋白質(zhì)的變性和聚集，如果不受抑制將導(dǎo)致細(xì)胞死亡。熱激蛋白與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，幫助蛋白質(zhì)折疊，防止變性蛋白聚合，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境以適應(yīng)外界高溫壓力［27］。Waters 等［28］研究指出植物以復(fù)雜的方式對熱脅迫產(chǎn)生應(yīng)答，而HSP 在復(fù)雜的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)中起主導(dǎo)作用。陸兆明等［29］的研究表明，35℃高溫處理后，雙孢蘑菇菌絲體中HSP70 表達(dá)量顯著上調(diào)（為對照組的5 倍）。這與本試驗中，高溫處理后HSP70 表達(dá)量上調(diào)的結(jié)果一致?？梢姡琀SP70 是食用菌耐熱機(jī)制中的重要蛋白之一，高溫下熱激蛋白的表達(dá)上調(diào)提高了真姬菇的耐熱性和存活率。

3.2.4 解毒有關(guān)的蛋白：細(xì)胞色素p450 細(xì)胞色素p450 是一類能與CO 結(jié)合形成復(fù)合物，在450 nm附近有最大吸收峰的含血紅素和硫羥基的蛋白。真菌細(xì)胞中，細(xì)胞色素p450 主要是催化一些具有重要生理功能的內(nèi)源性物質(zhì)，如激素、脂肪酸、萜類化合物等的生物合成代謝，以及參與許多外源性物質(zhì)或一些有毒物質(zhì)的生物氧化［30］。棉花中，細(xì)胞色素p450 的超量表達(dá)能顯著增加棉花對黃萎病的抗性［31］。高溫處理后，真姬菇菌絲體中細(xì)胞色素p450 的表達(dá)量上調(diào)，說明其可通過生物合成或代謝相關(guān)途徑參與熱應(yīng)激反應(yīng)，降低高溫對細(xì)胞的毒性。

3.2.5 DNA 修復(fù)有關(guān)的蛋白質(zhì)：SNF2家族的DNA修復(fù)蛋白 DNA 修復(fù)蛋白質(zhì)能夠通過對自身損傷DNA 的有效修復(fù)，維持DNA 的完整性和穩(wěn)定性。在不良環(huán)境條件下，生物體提高DNA 修復(fù)蛋白質(zhì)的表達(dá)量是自我保護(hù)，防止突變的重要手段。高溫處理后真姬菇菌絲體DNA 修復(fù)蛋白的表達(dá)量上調(diào)是真姬菇在高溫條件下啟動的有效抗逆措施。

4 結(jié)論

本研究通過對最適溫度和高溫脅迫條件下真姬菇菌絲體蛋白質(zhì)的差異表達(dá)分析，篩選鑒定出7 個與高溫脅迫相關(guān)的蛋白，分別為Spa2、 DEHA2G15532p、肽酶M76 家族、HSP70、SNF2家族的DNA 修復(fù)蛋白、細(xì)胞色素p450 及AM 域家族和鋅指蛋白的混合物。根據(jù)同源蛋白的功能分析探討了真姬菇的抗高溫機(jī)制。高溫脅迫下，真姬菇可通過多種機(jī)制抵抗高溫刺激。

［1］ 鄭宇, 林興生, 陳福如.真姬菇生物學(xué)特性研究初報［J］.食用菌, 2001, 23（3）：12-13.

［2］ Lam SK, Ng TB. Hypsin a novel thermostable ribosome-inactivating protein with antifungal and antiproliferative activities from fruiting bodies of the edible mushroom Hypsizigus marmoreus［J］. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2001, 285：1071-1075.

［3］ Kazutaka T, Yutaka A, Shoji O, et al. Isolation of a novel collagenbinding protein from the mushroom, Hypsizigus marmoreus, which inhibits the lewis lung carcinoma cell adhesion to type IV collagen［J］. The Journal of Biological Chemistry, 1995, 270（4）：1481-1484.

［4］ Tetsuro I. Beneficial effects of edible and medicinal mushrooms on health care［J］. International Journal of Medicinal Mushrooms, 2001（3）：291-298.

［5］ Ikemizu S, Kishimoto M, Konishi H. Angiotensin-converting enzyme inhibitors of bunashimeji and enokitake［P］. JP：08099895, 1996, gen Im.

［6］ 李翠翠.真姬菇熱激蛋白HmHSP70 基因克隆及其原核表達(dá)分［D］.青島：青島農(nóng)業(yè)大學(xué), 2009.

［7］ 孫國慶, 郝滌非.蘇北地區(qū)發(fā)展真姬菇生產(chǎn)可行性研究［J］.食用菌, 2011（1）：5-7.

［8］ Yao Y, Yang YW, Liu JY. An efficient protein preparation for proteomic analysis of developing cotton fibers by 2-DE［J］. Electrophoresis, 2006, 27：4559-4569.

［9］ Wang W, Scali M, Vignani R, et al. Protein extraction for twodimensional electrophoresis from olive leaf, a plant tissue containing high levels of interfering compounds［J］. Electrophoresis, 2003, 24：2369-2375.

［10］ Grinyer J, McKay A, Nevalainen Herbert BR, Saraste M. Fungal proteomics：initial mapping of biological control strain Trichoderma harzianum［J］. Current Genet, 2004, 45：163-169.

［11］ Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of proteindye binding［J］. Anal Biochemistry, 1976, 72：248-254.

［12］ 郭堯君.蛋白質(zhì)電泳實驗技術(shù)［M］. 第2 版. 北京：科學(xué)出版社, 2005.

［13］ Kumiko SK, Tadatoshi K, Noriko F, et al. Screening system for D-Asp-containing proteins using D-aspartyl endopeptidase and twodimensional gel electrophoresis［J］. Amino Acids, 2009, 36：125-129.

［14］ Sheu YJ, Santos B, Fortin N, et al. Spa2p interacts with cell polarity proteins and signaling components involved in yeast cell morphogenesis［J］. Molecular Cell Biology, 1998, 18：4053-4069.

［15］ Van DF, Peter M. Spa2 functions as a scaffold-like protein to recruit the Mpk1p MAP kinase module to sites of polarized growth［J］. Current Biology, 2002, 12：1698-1703.

［16］ Ryan JH, Bradford CB. The multifunctional GIT family of proteins［J］. Journal of Cell Science, 2006, 119：1469-1475.

［17］ Arkowiz RA, Lowe N. A small conserved domain in the yeast spa2p is necessary and sufficient for its polarized localization［J］. Journal of Cell Biology, 1997, 138（1）：17-36.

［18］ Schultz J, Bork P, Ponting CP, Hofmann K. SAM as a protein interaction domain involved in developmental regulation［J］. Protein Science, 1997, 6（1）：249-253.

［19］ Baltimore D, Mayer BJ, Ren R, Clark KL. A putative modular domain present in diverse signaling proteins［J］. Cell, 1993, 73（4）：629-630.

［20］ Gibson T, Musacchio A, Thompson J, et al. The PH domain：a common piece in the structural pathwork of signaling proteins［J］. Trends Biochemical Science, 1993, 18（9）：343-348.

［21］ Wang DS, Shaw R, Winkelmann JC, Shaw G. Binding of PH domains of β-adrenergic receptor kinase and β-spectrin to WD40/β-transducin repeat containing regions of the β-subunit of trimeric G-proteins［J］. Biochemical and Biophysical Research Communications, 1994, 203（1）：29-35.

［22］ Torrecilla I, Leganes F, Bonilla I. Use of recombinant aequorin to study calcium transients in response to heat and cold in cyanobacterial［J］. Plant Physiology, 2000, 123（1）：161-175.

［23］ Page MJ, Enrico DC. Evolution of peptidase diversity［J］. Journal of Biological Chemistry, 2008, 283：30010-30014.

［24］ 侯學(xué)文, 郭勇.泛肽與植物逆境響應(yīng)［J］.植物生理學(xué)通訊, 1998, 6：474-478.

［25］ 姜周庚, 張延昭, 馮夢詩, 等.高溫脅迫對盛鈴期Bt 棉棉鈴中殺蟲蛋白表達(dá)量及氮代謝的影響［J］.中國棉花, 2012, 39（4）：13-15.

［26］ Sorensen JG, Kristensen TN, Loeschcke V. The evolutionary and ecological role of heat shock proteins［J］. Ecology Letters, 2003, 6（11）：1025-1037.

［27］ Krebs RA, Holbrook SH. Reduced enzyme activity following Hsp70 over expression I Drosophila melanogaster［J］. Biochemical Genetics, 2001, 39（1-2）：73-82.

［28］ Waters ER, Lee GJ, Vierling E. Evolution, structure and function of the small heat shock proteins in plants［J］. Journal of Experimental Botany, 1996, 47（3）：325-338.

［29］ 陸兆明, 徐禎, 王珂, 等.雙孢蘑菇耐溫差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究［J］.廈門大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版, 2009, 48（4）：590-593.

［30］ 王海燕, 圖力故爾, 陳強(qiáng), 黃晨陽.真菌細(xì)胞色素P450 研究進(jìn)展［J］.食用菌學(xué)報, 2010, 17（2）：97-102.

［31］ 徐理, 朱龍付, 張獻(xiàn)龍.棉花抗黃萎病機(jī)制研究進(jìn)展［J］.作物學(xué)報, 2012, 38（9）：1553-1560.