魚腥草中槲皮素的提取及含量測定

李瑞玲，崔運啟，秦彩霞

（黃淮學院化學化工系，河南 駐馬店463000）

魚腥草（Houttuynia cordata Thunb）為三百草科蕺菜屬植物，性辛、味微寒，歸肺經，具有清熱解毒、消癰排膿等功能，用于肺癰吐膿、痰熱喘咳、熱淋、熱痢、癰腫瘡毒等癥?！侗静菥V目》載：“其葉腥氣，故俗稱魚腥草”。魚腥草為藥食兩用植物，早在唐代《新修本草》中就有“葉似蕎麥，肥地亦能蔓生，莖紫赤色，多生濕地，山谷陰處，山南江左人好生食之”的記載［1］。魚腥草中含有多種有效成分，主要有槲皮素、槲皮甙、金絲桃甙、蘆丁等黃酮類化合物［2］。已有文獻報道魚腥草中綠原酸［3］、蘆?。?］、癸酰乙醛等的含量分析，但關于魚腥草中槲皮素的提取工藝及含量分析［5］涉及得較少。

作者采用單因素實驗和正交實驗，考察提取溫度、提取時間、乙醇體積分數對超聲波法提取魚腥草中槲皮素的影響，并測定了最佳提取條件下，不同產地魚腥草中不同部位槲皮素的含量，擬為魚腥草的高效合理利用提供依據。

在針對導致城市污染的各種問題進行分析的時候，會發(fā)現導致城市出現污染的各個原因大不相同。其中通過對實際情況進行分析，發(fā)現最嚴重的問題之一就是汽車的尾氣排放。在當前人們的日常生活質量和水平不斷提升，私家車的數量也在不斷增加，這樣就會導致石油的整個消耗量越來越大。汽車在日常行駛過程中，難免會出現嚴重的尾氣排放，尾氣的增多，勢必會直接導致生態(tài)環(huán)境遭受到嚴重的污染影響。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

魚腥草購于健民新特大藥店和駐馬店同仁堂藥房。

當前，行業(yè)整體面臨著嚴峻的挑戰(zhàn)，很多企業(yè)退出轉型，特別是山東省。山東作為化工大省，歷來是化企關注的重點省份。據了解，自去年化工產業(yè)安全生產轉型行動開展以來，山東已經關閉轉產化工企業(yè)620家，停產整頓2614家，占全省化工生產企業(yè)的42.5%。未來山東還將進一步壓減化工生產企業(yè)數量，力爭在現有基礎上關閉20%以上，將全省化工生產企業(yè)控制在5000家以內，實現化工企業(yè)的減量提升。在壓力如此之大的大形勢下，很多企業(yè)抽身都來不及，倍豐為何卻偏偏明知山有虎偏向虎山行呢？

用芽接刀剔除砧木上的方塊形樹皮，迅速將接穗的方塊形芽片取出，緊緊貼在砧木上的方塊形中，用薄膜迅速將嫁接口纏緊綁實，只露出接芽、葉柄和溢水縫。

槲皮素標準品（生產批號：10081－200907），中國藥品生物制品鑒定所。

CARY100型紫外可見分光光度計，美國；Agilent 1200型高效液相色譜儀，德國；HS2060A型超聲波清洗儀，天津瑞森特儀器儀表商行；FA1204型電子天平，上海佑科儀器儀表有限公司。

1.2 魚腥草中槲皮素的提取

取0.0136g槲皮素標準品于50mL的容量瓶中，用鹽酸乙醇溶液溶解并定容至50.0mL。然后分別取1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL于10mL容量瓶中，并用鹽酸乙醇溶液定容，其濃度分別為27.2mg·L－1、40.8mg·L－1、54.4mg·L－1、68.0mg·L－1、81.6mg·L－1，分別用高效液相色譜儀測定，以峰面積（y）為縱坐標、槲皮素濃度（x）為橫坐標繪制標準曲線，擬合線性回歸方程為：y＝285＋65x，R＝0.99875。

首先進行單因素實驗。固定其它條件不變，分別改變提取溫度（50℃、60℃、70℃、80℃、90℃）、提取時間（35min、40min、45min、50min）、乙醇體積分數（50%、60%、70%、80%），考察各因素對槲皮素提取率的影響。

1.3.3 色譜條件

綜上所述，青少年患兒配戴角膜塑形鏡后眼表健康的隨訪觀察至關重要，淚液的循環(huán)對于配戴角膜塑形鏡的效果及安全性都具有重要的作用，監(jiān)測淚膜質量的變化同時在戴鏡早期輔助人工淚液點眼可緩解患者的不適，減少其并發(fā)癥的發(fā)生。本次研究尚不足的是隨訪時間較短，且沒有將瞼板腺缺失等因素納入到研究中。同時，角膜塑形鏡材質和透氧性的差別也可能會對淚膜質量評估產生影響，將在日后的觀察研究中進一步考慮。

表1 正交實驗因素和水平Tab.1 The factors and levels of orthogonal experiment

1.3 高效液相色譜分析

1.3.1 對照品溶液的配制

將20mg槲皮素標準品用配制好的鹽酸乙醇溶液完全溶解［6］，用10mL容量瓶定容，分別配制成7個不同質量濃度的對照品溶液，待用。

1.3.2 供試品溶液的制備

從表2可以看出，各因素中對提取率影響最大的是提取時間，其次是提取溫度，乙醇體積分數影響最小，最佳工藝組合是A2B3C2，即提取溫度為80℃、提取時間為45min、乙醇體積分數為80%。

在單因素實驗的基礎上，以提取溫度、提取時間、乙醇體積分數為考察因素，以槲皮素峰面積為考核指標，進一步進行正交實驗以優(yōu)化提取條件。正交實驗的因素和水平見表1。

采用Eclipse XDB－C18（4.6mm×150mm，5μm）色譜柱，以甲醇－0.1%磷酸水溶液（45∶55，體積比）為流動相；流速1.0mL·min－1；檢測波長375nm；柱溫：室溫；進樣量20μL。

2 結果與討論

2.1 單因素實驗結果

在1.3.3色譜條件下，取同一供試品溶液，分別進行以下兩組實驗：（1）連續(xù)3d，在同一時間對供試品進行測定；（2）1d內連續(xù)測定3次。兩組實驗的峰面積值的相對標準偏差RSD值分別為1.63%、0.75%。表明該方法的精密度良好。

2.2 正交實驗結果與分析（表2）

表2 正交實驗結果與分析Tab.2 The result and analysis of orthogonal experiment

取足夠量的魚腥草莖（葉）粉碎，過40目篩，稱2.000g魚腥草粉末加入到50.0mL鹽酸乙醇溶液中，于80℃超聲提取45min，離心、過濾，得到供試品溶液。供試品溶液經0.45μm的有機微孔濾膜過濾，待用。

2.3 高效液相色譜分析方法學考察

2.3.1 線性關系

稱取2.0g魚腥草莖（葉）粉末，用配制好的鹽酸乙醇溶液［80%（體積分數）乙醇∶25%（質量分數）鹽酸＝4∶1（體積比），下同］溶解，并定容到50.0mL，浸泡20min，在一定溫度下超聲提取一定時間，離心分離后定容，所得濾液用于HPLC分析（濾液中槲皮素的峰面積對應提取率）。

在最佳提取條件下提取不同產地魚腥草不同部位的槲皮素，并對其含量進行測定，平行測定3次，結果見表3。

通過單因素實驗，初步確定最佳的提取溫度為80℃、提取時間為45min、乙醇體積分數為80%。

2.4 樣品測定

2.3.2 精密度

隨著多媒體技術發(fā)展，檔案信息數據類型日趨多樣化，多源異構的多媒體化檔案正逐漸取代傳統的紙質檔案。數字化檔案不僅包括了傳統的紙質類型檔案（電報、案卷、條約等），也新增了多媒體電子檔案（電子公文、會議視頻、電話錄音等）。種類繁多的數字化檔案是信息化時代的產物也是我們寶貴的財富，如何有效地利用數字檔案信息資源是數字化檔案建設的重點研究方向之一。

表3 不同產地魚腥草不同部位槲皮素含量測定結果Tab.3 Determination results of quercetin content in different parts of Houttuynia cordata Thunb from different sources

從表3可以看出，魚腥草根莖中槲皮素含量：貴州最高，駐馬店最低，湖北居中；魚腥草葉中槲皮素含量：駐馬店最高，貴州最低，湖北居中，且葉中槲皮素的含量明顯較高，是根莖中的6～17倍（針對本實驗樣品）。表明，不同產地魚腥草中槲皮素含量差別較大；同一產地魚腥草中不同部位槲皮素的含量差別也比較大。

3 結論

（1）通過單因素實驗和正交實驗確定魚腥草中槲皮素的最佳提取工藝參數為：提取溫度80℃、提取時間45min、乙醇體積分數80%。

目前，關于EGR研究以直列柴油機為主。直列柴油機具有結構簡單和布置相對簡便的特點，而V型柴油機，由于結構復雜，使得EGR循環(huán)更加困難。V型柴油機的進氣管和排氣管通常采取兩列平行結構，為廢氣的引出和流入增加難度，如果從單一列進排氣管完成廢氣再循環(huán)，將會造成發(fā)動機各個缸內燃燒程度不同，使其運行的穩(wěn)定性遭到破壞。為避免該情況發(fā)生，一般將雙管道改造成單管道，或在雙管道間通過加裝旁通閥的方法讓兩列氣流一致，來改善柴油機工作的穩(wěn)定性。

（2）高效液相色譜法適宜于魚腥草中槲皮素含量的分析，精密度高、重現性好。

雖然異步協作的價值巨大也有許多理論和實踐方面的證據，但在實體產品的創(chuàng)新和研發(fā)中的研究、應用和成果均非常少[30]。與維基百科和開源軟件兩個典型異步協作案例相比，實體產品的研發(fā)有很多本質的區(qū)別，例如維基和開源是完全開放的模式，而團隊中的協作創(chuàng)新行為則屬于小群體內的重復博弈，團隊成員之間的行為模式有較大區(qū)別;另外，維基和開源兩種異步協作模式均不存在商務模式，即顯式的利益分配行為，所有參與者均為自愿參與，其回報則體現為個人聲譽等隱性的非經濟收入。因此，已有的成功模式不能直接搬用，這是本文研究的出發(fā)點和重要基礎。

（3）不同產地魚腥草中槲皮素含量差異較大，且魚腥草葉中槲皮素含量明顯較高，是根莖中的6～17倍。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.2010版.北京：化學工業(yè)出版社，2005：155.

［2］胡鳳蓮，倪細爐，劉文哲.魚腥草中總黃酮和槲皮素含量的動態(tài)變化［J］.安徽農業(yè)科學，2008，36（10）：4128－4130.

［3］賀義昌，李湘洲，曠春桃，等.綠原酸和蘆丁的提取工藝研究進展［J］.應用化工，2011，40（11）：2001－2003.

［4］彭全材，楊占南，胡繼偉，等.高效液相色譜法同時測定魚腥草中7黃酮的含量［J］.江西師范大學學報（自然科學版），2008，32（6）：645－648，661.

［5］羅世瓊，彭全材，柳丹丹.高效液相色譜法測定魚腥草不同部位中槲皮素的含量［J］.貴州師范大學學報（自然科學版），2008，26（3）：96－99.

［6］吳景林.魚腥草中槲皮素提取方法的研究［J］.四川化工，2010，（1）：17－21.