細葉榕提取物對小鼠出血及凝血時間的影響①

曾燕麗，黃威祥，藍柳琳，賴術(shù)

（1.右江民族醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)本科2010級學(xué)生，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗本科2010級學(xué)生，廣西 百色 533000；3.右江民族醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)本科2010級學(xué)生，廣西 百色 533000；4.右江民族醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，廣西 百色 533000）

榕樹是桑科（Moraceae）榕屬（Ficus）植物的總稱，全世界有1 200多種，主要分布在熱帶、南亞熱帶地區(qū)［1］，細葉榕（F.microcarpa）為其中之一。文獻［2］記載，細葉榕為常用中草藥，以氣根、樹皮、葉芽入藥，具有祛風(fēng)活絡(luò)、除濕消腫、清熱解毒、抗毒消炎功效，治支氣管炎、痢疾、跌打損傷、風(fēng)濕、骨折等，以民間應(yīng)用為主。目前主要的研究是細葉榕化學(xué)成分［3］，也有少量藥理作用研究報告，如程輝等［4］報道細葉榕（葉、枝、氣根混合水提物）有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用；鐘正賢等［5］報道榕樹須提取物有一定的抑制血小板抗血栓作用，但未見細葉榕的葉、莖等對出血時間、凝血時間影響的研究報告。本研究就細葉榕的葉、莖、氣根對出血時間、凝血時間的作用進行實驗研究，為細葉榕進一步開發(fā)和臨床應(yīng)用提供實驗理論依據(jù)。

1 實驗材料和方法

1.1 藥物 新鮮細葉榕樹葉、莖及氣根于2012年8月采自右江民族醫(yī)學(xué)院院內(nèi)，經(jīng)我院中藥房劉春榮副主任藥師鑒定。

1.2 藥物制備 細葉榕水提取物：新鮮細葉榕樹枝、莖、氣根分別切細后水提取（煮沸1h，提取3次，過濾，合并濾液），加熱濃縮至每1ml溶液相當(dāng)于5g生藥。細葉榕醇提取物：用95%乙醇浸泡24h，濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，揮發(fā)至無乙醇味（檢測不含乙醇），配成每1ml溶液相當(dāng)于5g生藥。實驗時水、醇提物溶液濃度為1 ml溶液相當(dāng)于5g生藥，能通過小鼠灌胃針頭。云南白藥，云南白藥集團股份有限公司生產(chǎn)（批號ZFA1309）。

1.3 動物 清潔級昆明種小鼠200只，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半。動物及飼料均由右江民族醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

1.4 動物分組及出血時間測定法（剪尾法）［6-7］將小鼠200只，隨機分為給藥組（再細分為18 個小組：細葉榕葉水提物低中高劑量3個小組、細葉榕葉醇提物低中高劑量3個小組、細葉榕莖水提物低中高劑量3個小組、細葉榕莖醇提物低中高劑量3個小組、細葉榕氣根水提物低中高劑量3個小組、細葉榕氣根醇提物低中高劑量3個小組）和空白對照組（生理鹽水組）、陽性對照組（云南白藥組2g·kg-1），每小組10只。低中高劑量分別是50、100、150g·kg-1（生藥），1次／天，連續(xù)7d。末次藥后1h，用解剖剪距小鼠尾尖3mm 處橫剪斷，待血液自行溢出計時，每30s用濾紙吸血1次，直至血液自然停止所需的時間即為該鼠的出血時間。

1.5 凝血時間測定法（毛細玻管法）［6-7］測定的對象為1.4的實驗動物，在應(yīng)用斷尾法測定出血時間同時測定凝血時間，置小鼠于特制盒內(nèi)，將內(nèi)徑1mm 玻璃毛細管插入小鼠內(nèi)眥球后靜脈叢取血，至毛細管中血柱長達5cm 為止，并記時，每隔30s折斷一小節(jié)含血柱的毛細管，肉眼仔細觀察折斷血柱時有無凝血絲出現(xiàn)，計算從采血到有凝血絲出現(xiàn)的時間，即為凝血時間。

2 結(jié)果

2.1 細葉榕提取物對小鼠出血時間的影響 從表1、表2、表3中可以看出，與空白對照組比較，陽性對照組的出血時間明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01），提示了本次出血實驗結(jié)果可靠。細葉榕提取物各劑量組的出血時間雖然較空白對照組縮短，但是差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。

表1 細葉榕葉水、醇提取物對小鼠出血時間的影響 （±s）

表1 細葉榕葉水、醇提取物對小鼠出血時間的影響 （±s）

注：與 空 白 對照 組 比 較，a：t ＝0.983，P ＝0.338；b：t＝0.466，P ＝0.647；c：t＝0.841，P ＝0.411；d：t＝0.338，P＝0.739，；e：t＝0.221，P ＝0.827；f：t ＝0.239，P ＝0.814；g：t＝6.18，P ＜0.01

組別n劑量（g·kg-1）出血時間（s）細葉榕葉水提取物 低劑量組10 50 198±91.87a 中劑量組10 100 216±99.8b 高劑量組10 150 204±88.09c細葉榕葉醇提取物 低劑量組10 50 222±87.41d 中劑量組10 100 224.70±112.16e 高劑量組10 150 225±96.18f陽性對照組10 2 87±26.27g空白對照組10 0 234±70.43

表2 細葉榕莖水、醇提取物對小鼠出血時間的影響 （±s）

表2 細葉榕莖水、醇提取物對小鼠出血時間的影響 （±s）

注：與 空 白 對 照 組 比 較，a：t ＝1.540，P ＝0.141；b：t＝1.975，P ＝0.064；c：t ＝0.859，P ＝0.4018；d：t ＝0.596，0.559；e：t＝0.196，P ＝0.847；f：t＝0.252，P ＝0.804；g：t＝6.18，P ＜0.01

組別n劑量（g·kg-1）出血時間（s）細葉榕莖水提取物 低劑量組10 50 186±68.99a 中劑量組10 100 165±85.15b 高劑量組10 150 201±99.05c細葉榕莖醇提取物 低劑量組10 50 216±64.50d 中劑量組10 100 228±66.63e 高劑量組10 150 225±88.60f陽性對照組10 2 87±26.27g空白對照組10 0 234±70.43

表3 細葉榕氣根水、醇提取物對小鼠出血時間的影響 （±s）

表3 細葉榕氣根水、醇提取物對小鼠出血時間的影響 （±s）

注：與 空 白 對 照 組 比 較，a：t ＝0.101，P ＝0.920；b：t＝1.302，P ＝0.209；c：t＝1.631，P ＝0.120；d：t＝1.244，P＝0.230；e：t＝0.080，P ＝0.937；f：t＝0.445，P ＝0.662；g：t＝6.18，P ＜0.01

組別n劑量（g·kg-1）出血時間（s）細葉榕氣根水提取物 低劑量組10 50 231±61.73a 中劑量組10 100 192±73.76b 高劑量組10 150 180±77.46c細葉榕氣根醇提取物 低劑量組10 50 192±80.25d 中劑量組10100 231±95.97e 高劑量組10 150 219±80.06f陽性對照組10 2 87±26.27g空白對照組10 0 234±70.43

2.2 細葉榕提取物對小鼠凝血時間的影響 從表4、表5、表6中可以看出，與空白對照組比較，陽性對照組凝血時間明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01），提示了本次凝血實驗結(jié)果可靠。細葉榕提取物各劑量組凝血時間與空白對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P 均＞0.05）。

3 討論

出血時間是指穿破毛細血管，自出血到自然止血所需的時間。出血時間的長短與組織因子、血小板的數(shù)量與功能、纖溶系統(tǒng)、毛細血管功能及組織收縮力有關(guān)，其中影響最大的是血小板和毛細血管功能［8］。細葉榕水、醇提取物各組與空白對照組比較小鼠出血時間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，表明細葉榕水、醇提取物對小鼠出血時間無明顯影響，實驗結(jié)果提示其對上述與出血時間有關(guān)的因素沒有明顯影響。

凝血時間是指血液自離體至凝固所需的時間。血液離體后，接觸帶陰電荷的表面（玻璃器材）時，Ⅻ因子被激活，其后一系列凝血因子相繼活化，最后使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白而凝血［9］。細葉榕水、醇提取物各組與空白對照組比較小鼠凝血時間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，表明細葉榕水、醇提取物對小鼠凝血時間無明顯影響，說明其對上述與凝血時間有關(guān)的因素沒有明顯影響。

表4 細葉榕葉水、醇提取物對小鼠凝血時間的影響 （±s）

表4 細葉榕葉水、醇提取物對小鼠凝血時間的影響 （±s）

注：與 空 白 對照 組 比 較，a：t ＝0.414，P ＝0.684；b：t＝0.759，P ＝0.458；c：t＝0.180，P ＝0.859；d：t＝0.221，P＝0.828；e：t ＝0.669，P ＝0.512；f：t ＝0.195，0.848；g：t＝3.57，P ＜0.01

組別n劑量（g·kg-1）出血時間（s）細葉榕葉水提取物 低劑量組10 50 123±26.27a 中劑量組10 100 117±33.02b 高劑量組10 150 126±36.88c細葉榕葉醇提取物 低劑量組10 50 132±20.98d 中劑量組10 100 141±42.54e 高劑量組10 150 126±30.98f陽性對照組10 2 69±37.55g空白對照組10 0 129±37.55

表5 細葉榕莖水、醇提取物對小鼠凝血時間的影響 （±s）

表5 細葉榕莖水、醇提取物對小鼠凝血時間的影響 （±s）

注：與 空 白 對照 組 比 較，a：t ＝0.828，P ＝0.419；b：t＝0.974，P ＝0.343；c：t＝0.182，P ＝0.859；d：t＝0.204，P＝0.841；e：t＝1.467，P ＝0.160；f：t＝0.518，P ＝0.610；g：t＝3.57，P ＜0.01

組別n劑量（g·kg-1）出血時間（s）細葉榕莖水提取物 低劑量組10 50 117±26.27a 中劑量組10 100 114±30.98b 高劑量組10 150 126±36.88c細葉榕莖醇提取物 低劑量組10 50 126±27.57d 中劑量組10 100 108±25.30e 高劑量組10 150 120±40.00f陽性對照組10 2 69±37.55g空白對照組10 0 129±37.55

表6 細葉榕氣根水、醇提取物對小鼠凝血時間的影響 （±s）

表6 細葉榕氣根水、醇提取物對小鼠凝血時間的影響 （±s）

注：與 空 白 對照 組 比 較，a：t ＝1.266，P ＝0.222；b：t＝0.730，P ＝0.474；c：t＝0.773，P ＝0.450；d：t＝0.958，P＝0.351；e：t＝0.355，P ＝0.727；f：t＝0.312，P ＝0.759；g：t＝3.57，P ＜0.01

組別n劑量（g·kg-1）出血時間（s）細葉榕氣根水提取物 低劑量組10 50 111±24.70a 中劑量組10 100 117±35.92b 高劑量組10 150 114±48.58c細葉榕氣根醇提取物 低劑量組10 50 150±58.31d 中劑量組10 100 120±70.71e 高劑量組10 150 123±47.85f陽性對照組10 2 69±37.55g空白對照組10 0 129±37.55

云南白藥作為一種傳統(tǒng)的具有很好止血作用的中藥，已廣泛用于治療臨床消化道出血以及用于減少手術(shù)時的出血［10］。所以本次實驗陽性對照藥選擇云南白藥，是為本次實驗結(jié)果的可靠性提供參考。

綜上所述，本次實驗是觀察細葉榕提取物對小鼠出血和凝血時間的影響，結(jié)果表明細葉榕提取物對小鼠出血和凝血無明顯影響，提示了今后如果針對細葉榕藥理作用研究的時候，盡量不往出血和凝血作用方向考慮。但是本次實驗結(jié)果中發(fā)現(xiàn)氣根（榕樹須）的實驗結(jié)果與鐘正賢等［5］的實驗結(jié)果不一致，可能是實驗條件不一樣的原因，這有待于進一步研究。

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