開口箭根莖中甾體化合物的研究

寧德生，蔣麗華，劉金磊，李典鵬，潘爭紅*

1廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所 廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室，桂林 541006;2廣西中醫(yī)藥大學，南寧 530001

開口箭(Tupistra chinensis Bak.)系百合科鈴蘭族開口箭屬植物，全球約有20 種，我國有12 種［1］。主要分布在我國四川、湖北、云南和廣西等地。開口箭常用于治療頭痛咳嗽、咽喉腫痛、風濕痹痛等病癥，具有多種生物活性。藥理實驗結(jié)果顯示，開口箭具有較強的抗炎［2，3］、抗菌［4］、抗腫瘤［5，6］、免疫調(diào)節(jié)［7］和抑制動脈粥樣硬化斑形成［8］等生理作用;但目前對開口箭化學成分研究還不夠深入，活性成分的物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，妨礙了開口箭的開發(fā)利用，因此深入研究開口箭化學成分是非常有意義的，可為該植物的開發(fā)應用提供物質(zhì)基礎(chǔ)。此次研究從該植物中分離得到9個化合物，其中3-epi-neoruscogenin-3-β-D-glucopyranoside、3-epi-ruscogenin-3-β-D-glucopyranoside 和convallagenin B 首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

瑞士Bruker DRX-600 MHz 超導核磁共振儀;BS110S 賽多利斯電子天平，北京賽多利斯天平有限公司;Agilent 1200 半制備型高效液相色譜儀，Eclipse XDB-C18(9.4 ×250 mm，5 μm);硅膠(200～300 目)及TLC 檢測用硅膠GF254板(青島海洋化工廠);Sephadex LH-20 為瑞士Amershan Biosciences公司生產(chǎn);高效液相用試劑為色譜純，其他所用試劑均為分析純。

開口箭根莖購自安徽省亳州藥材市場，由潘爭紅副研究員鑒定并保存標本于本室。

2 提取與分離

圖1 化合物1～9 的化學結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structures of compounds 1-9

干燥的開口箭根莖約4.8 Kg，粉碎至粗粉，用95%的乙醇浸提3 次，提取液減壓濃縮，用水分散后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。將乙酸乙酯萃取物(214 g)進行100～200 目硅膠柱層析，石油醚-丙酮(1∶0→0∶1)梯度洗脫，得到6個組分Fr.1～Fr.6。Fr.3 反復進行硅膠柱層柱(200～300 目)后，用Sephadex LH-20(氯仿/甲醇，1∶1，v/v)凝膠柱純化，得到化合物8(160 mg)、5(120 mg)和6(82 mg)。Fr.4 經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇(9∶1→0∶1)梯度洗脫，再經(jīng)HPLC 制備(甲醇/水，40%～100%，v/v)純化，得到化合物3(60 mg)、4(3 mg)和7(115 mg)。Fr.5 經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)凝膠柱層析，再用HPLC 制備(甲醇/水，40%～100%，v/v)純化，得到化合物9(40 mg)、1(31 mg)和2(5 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色固體，1H NMR(600 MHz，C5D5N)δ:3.76 (1H，dd，J=4.2，12.0 Hz，H-1)，1.98 (1H，m，H-2a)，1.68 (1H，m，H-2b)，4.04(1H，br.s，H-3)，1.70 (1H，m，H-4a)，1.21 (1H，m，H-4b)，5.47 (1H，d，J=5.4 Hz，H-6)，1.97 (1H，m，H-7a)，1.29 (1H，m，H-7b)，1.60 (1H，m，H-8)，1.29 (1H，m，H-9)，2.28 (1H，m，H-11a)，1.55(1H，m，H-11b)，2.49 (1H，d，J=15.0 Hz，H-12a)，2.24 (1H，m，H-12b)，1.17 (1H，m，H-14)，1.97 (1H，m，H-15a)，1.30 (1H，m，H-15b)，4.45(1H，m，H-16)，1.74 (1H，t，J=7.2 Hz，H-17)，0.84 (3H，s，H-18)，1.03 (3H，s，H-19)，1.93 (1H，m，H-20)，0.95 (3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，1.71(1H，m，H-23)，2.51 (1H，m，H-24a)，2.25 (1H，m，H-24b)，4.26 (1H，d，J=12.0 Hz，H-26a)，3.82(1H，d，J=12.0 Hz，H-26b)，4.77 (1H，br.s，H-27a)，4.74 (1H，br.s，H-27b)，4.32 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1')，3.16 (1H，t，J=7.8 Hz，H-2')，3.34(1H，m，H-3')，3.27 (1H，m，H-4')，3.25 (1H，m，H-5')，3.85 (1H，dd，J=2.4，12.0 Hz，H-6'a)，3.65 (1H，dd，J=5.4，12.0 Hz，H-6'b);13C NMR(150 MHz，C5D5N)δ:76.2 (d，C-1)，36.6 (t，C-2)，75.4 (d，C-3)，41.3 (t，C-4)，139.8 (s，C-5)，125.5(d，C-6)，33.0 (t，C-7)，33.7 (d，C-8)，51.6 (d，C-9)，44.9 (s，C-10)，24.9 (t，C-11)，39.1 (t，C-12)，41.1 (s，C-13)，58.0 (d，C-14)，33.0 (t，C-15)，82.5 (d，C-16)，64.1 (d，C-17)，17.0 (q，C-18)，13.3 (q，C-19)，42.8 (d，C-20)，14.9 (q，C-21)，110.7 (s，C-22)，34.0 (t，C-23)，29.5 (t，C-24)，145.2 (s，C-25)，65.8 (t，C-26)，108.9 (t，C-27)，102.9 (d，C-1')，74.9 (d，C-2')，78.2 (d C-3')，71.6 (d，C-4')，77.9 (d，C-5')，62.8 (t，C-6')。本文首次列出化合物1 完整的碳、氫譜數(shù)據(jù)，并與文獻［9］的氫譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物1 為3-epi-neoruscogenin-3-β-D-glucopyranoside。

化合物2 白色固體，1H NMR(600 MHz，C5D5N)δ:3.76 (1H，dd，J=4.2，12.0 Hz，H-1)，1.98，(1H，m，H-2a)，1.68 (1H，m，H-2b)，4.04(1H，br.s，H-3)，1.70 (1H，m，H-4a)，1.21 (1H，m，H-4b)，5.47 (1H，d，J=5.4 Hz，H-6)，1.97 (1H，m，H-7a)，1.29 (1H，m，H-7b)，1.60 (1H，m，H-8)，1.29 (1H，m，H-9)，2.28，(1H，m，H-11a)，1.55(1H，m，H-11b)，2.49 (1H，d，J=15.0 Hz，H-12)，2.24 (1H，m，H-12)，1.97 (1H，m，H-15a)，1.30(1H，m，H-15b)，4.39 (1H，m，H-16)，1.74 (1H，t，J=7.2 Hz，H-17)，0.81 (3H，s，H-18)，1.03 (3H，s，H-19)，1.93 (1H，m，H-20)，0.95 (3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，1.56 (1H，m，H-25)，3.44 (1H，dd，J=9.6，3.0 Hz，H-26a)，3.32 (1H，t，J=9.6 Hz，H-26b)，0.79 (3H，d，J=6.6 Hz，H-27)，4.32 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1')，3.16 (1H，t，J=7.8 Hz，H-2')，3.34 (1H，m，H-3')，3.27 (1H，m，H-4')，3.25(1H，m，H-5')，3.85 (1H，dd，J=2.4，12.0 Hz，H-6'a)，3.65 (1H，dd，J=5.4，12.0 Hz，H-6'b);13C NMR (150 MHz，C5D5N)δ:76.2 (d，C-1)，36.6 (t，C-2)，75.4 (d，C-3)，41.3 (t，C-4)，139.8 (s，C-5)，125.5 (d，C-6)，33.0 (t，C-7)，33.7 (d，C-8)，51.6(d，C-9)，44.9 (s，C-10)，24.9 (t，C-11)，39.1 (t，C-12)，41.1 (s，C-13)，58.0 (d，C-14)，33.0 (t，C-15)，82.2 (d，C-16)，64.0 (d，C-17)，17.0 (q，C-18)，13.3 (q，C-19)，42.8 (d，C-20)，14.9 (q，C-21)，110.6 (s，C-22)，34.0 (t，C-23)，29.8 (t，C-24)，31.6 (d，C-25)，67.8 (t，C-26)，17.5 (q，C-27)，102.9 (d，C-1')，74.9 (d，C-2')，78.2 (d，C-3')，71.6 (d，C-4')，77.9 (d，C-5')，62.8 (t，C-6')。本文首次列出化合物2 完整的碳、氫譜數(shù)據(jù)，并與文獻［9］的氫譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物2 為3-epiruscogenin-3-β-D-glucopyranoside。

化合物3 白色針晶，1H NMR(600 MHz，C5D5N)δ:4.21 (1H，br.s，H-1)，2.53 (1H，dt，J=15.0，2.5 Hz，H-2a)，2.10 (1H，dt，J=15.0，2.5 Hz，H-2b)，4.57 (1H，m，H-3)，4.27 (1H，d，J=2.4 Hz，H-4)，2.47，(1H，dt，J=13.2，3.0 Hz，H-6a)，1.70 (1H，dt，J=13.2，3.0 Hz，H-6b)，4.60(1H，m，H-16)，0.88 (3H，s，H-18)，1.60 (3H，s，H-19)，1.10 (3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，2.72 (1H，td，J=13.2，5.4 Hz，H-24ax)，2.25 (1H，d，J=13.2 Hz，H-24eq)，4.48 (1H，d，J=12.0 Hz，H-26ax)，4.04 (1H，d，J=12.0 Hz，H-26eq)，4.82(1H，s，H-27a)，4.78 (1H，s，H-27b);13C NMR (150 MHz，C5D5N)δ:73.7 (d，C-1)，33.4 (t，C-2)，71.1 (d，C-3)，68.0 (d，C-4)，78.3 (s，C-5)，30.4 (t，C-6)，28.4 (t，C-7)，35.0 (d，C-8)，45.7 (d，C-9)，45.4(s，C-10)，21.4 (t，C-11)，40.0 (t，C-12)，40.6 (s，C-13)，56.2 (d，C-14)，32.2 (t，C-15)，81.4 (d，C-16)，63.0 (d，C-17)，16.6 (q，C-18)，13.8 (q，C-19)，41.9 (d，C-20)，14.9 (q，C-21)，109.4 (s，C-22)，33.2 (t，C-23)，28.9 (t，C-24)，144.4 (s，C-25)，65.0 (t，C-26)，108.6 (t，C-27)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［10］一致，故鑒定化合物3 為ranmogenin A。

化合物4 白色針晶，1H NMR (600 MHz，C5D5N)δ:4.21 (1H，br.s，H-1)，2.53 (1H，dt，J=15.0，2.5 Hz，H-2a)，2.10 (1H，dt，J=15.0，2.5 Hz，H-2b)，4.57 (1H，m，H-3)，4.27 (1H，d，J=2.4 Hz，H-4)，2.47 (1H，dt，J=13.2，3.0 Hz，H-6a)，1.70 (1H，dt，J=13.2，3.0 Hz，H-6b)，4.60(1H，m，H-16)，0.87 (3H，s，H-18)，1.59 (3H，s，H-19)，1.15 (3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，2.70 (1H，td，J=13.2，5.4 Hz，H-24a)，2.24 (1H，d，J=13.2 Hz，H-24b)，3.48 (1H，d，J=10.8 Hz，H-26a)，3.36 (1H，d，J=10.8 Hz，H-26b)，1.07 (3H，d，J=7.2 Hz，H-27);13C NMR (150 MHz，C5D5N)δ:73.7 (d，C-1)，33.4 (t，C-2)，71.1 (d，C-3)，68.0(d，C-4)，78.3 (s，C-5)，30.4 (t，C-6)，28.4 (t，C-7)，35.0 (d，C-8)，45.7 (d，C-9)，45.4 (s，C-10)，21.4 (t，C-11)，40.0 (t，C-12)，40.6 (s，C-13)，56.2 (d，C-14)，32.2 (t，C-15)，81.1 (d，C-16)，62.8 (d，C-17)，16.5 (q，C-18)，13.8 (q，C-19)，42.4 (d，C-20)，14.8 (q，C-21)，109.7 (s，C-22)，26.1 (t，C-23)，26.3 (t，C-24)，27.5 (d，C-25)，65.1 (t，C-26)，16.2 (q，C-27)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［11］一致，故鑒定化合物4 為convallagenin B。

化合物5 白色無定形粉末，1H NMR(600 MHz，C5D5N)δ:4.52 (1H，dd，J=11.4，4.2 Hz，H-1)，4.36 (1H，br.s，H-3)，5.66 (1H，d，J=6.0 Hz，H-6)，4.49 (1H，m，H-16)，0.92 (3H，s，H-18)，1.34 (3H，s，H-19)，1.05 (3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，4.46 (1H，d，J=12.6 Hz，H-26a)，4.03 (1H，d，J=12.0 Hz，H-26b)，4.81 (1H，s，H-27a)，4.78(1H，s，H-27b);13C NMR (150 MHz，C5D5N)δ:75.3 (d，C-1)，40.8 (t，C-2)，66.5(d，C-3)，41.1(t，C-4)，140.1 (s，C-5)，124.5 (d，C-6)，32.8 (t，C-7)，32.3 (d，C-8)，51.2 (d，C-9)，44.6 (s，C-10)，24.3 (t，C-11)，40.5 (t，C-12)，40.2 (s，C-13)，57.0 (d，C-14)，32.3 (t，C-15)，81.4 (d，C-16)，63.1 (d，C-17)，16.6 (q，C-18)，13.2 (q，C-19)，41.8 (d，C-20)，14.9 (q，C-21)，109.4 (s，C-22)，33.2 (t，C-23)，28.9 (t，C-24)，144.5 (s，C-25)，64.9 (t，C-26)，108.6 (t，C-27)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［12］一致，故鑒定化合物5 為3-epineoruscogenin。

化合物6 白色無定形粉末，1H NMR(600 MHz，C5D5N)δ:4.26 (1H，br.s，H-1)，4.57 (1H，br.s，H-3)，4.65 (1H，q，J=7.2 Hz，H-16)，0.89(3H，s，H-18)，1.58 (3H，s，H-19)，1.13 (3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，4.08 (1H，d，J=11.4 Hz，H-26eq)，4.52 (1H，d，J=12.0 Hz，H-26ax)，4.84(1H，s，H-27a)，4.80 (1H，s，H-27b);13C NMR (150 MHz，C5D5N)δ:74.0 (d，C-1)，39.5 (t，C-2)，67.9(d，C-3)，36.6 (t，C-4)，75.1(s，C-5)，35.0 (t，C-6)，29.9 (t，C-7)，34.4 (d，C-8)，45.8 (d，C-9)，44.0 (s，C-10)，21.5 (t，C-11)，40.1 (t，C-12)，40.7 (s，C-13)，56.3 (d，C-14)，32.2 (t，C-15)，81.4 (d，C-16)，63.0 (d，C-17)，16.5 (q，C-18)，13.8 (q，C-19)，41.9 (d，C-20)，14.9 (q，C-21)，109.4 (s，C-22)，33.2 (t，C-23)，28.9 (t，C-24)，144.4 (s，C-25)，65.0 (t，C-26)，108.7 (t，C-27)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［12］一致，故鑒定化合物6 為tupichigenin E。

化合物7 白色針晶(氯仿-甲醇)，1H NMR(600 MHz，C5D5N)δ:4.33 (1H，br.s，H-1)，4.41(1H，br.s，H-2)，4.74 (1H，br.s，H-3)，4.56 (1H，br.s，H-7)，2.48 (1H，td，J=11.1，4.8 Hz，H-9)，2.41 (1H，m，H-15a)，1.58 (1H，m，H-15b)，4.59(1H，m，H-16)，1.93 (1H，t，J=6.6 Hz，H-17)，0.88 (3H，s，H-18)，1.47 (3H，s，H-19)，1.08 (3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，2.24 (1H，m，H-24eq)，2.68(1H，m，H-24ax)，4.03 (1H，d，J=12.6 Hz，H-26eq)，4.43(1H，d，J=12.6 Hz，H-26αx)，4.77(1H，s，H-27a)，4.80 (1H，s，H-27b);13C NMR (150 MHz，C5D5N)δ:76.4 (d，C-1)，67.8 (d，C-2)，75.4(d，C-3)，71.1 (d，C-4)，86.2 (s，C-5)，211.1 (s，C-6)，75.1 (d，C-7)，40.8 (d，C-8)，37.9 (d，C-9)，50.1 (s，C-10)，21.9 (t，C-11)，39.3 (t，C-12)，40.6 (s，C-13)，49.2 (d，C-14)，31.4 (t，C-15)，81.3 (d，C-16)，62.8 (d，C-17)，16.2 (q，C-18)，12.9 (q，C-19)，42.0 (d，C-20)，14.9 (q，C-21)，109.4 (s，C-22)，33.1 (t，C-23)，28.9 (t，C-24)，144.3 (s，C-25)，64.9 (t，C-26)，108.7 (t，C-27)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻［13］一致，故鑒定化合物7 為(20S，22R)-spirost-25(27)-ene-1β，2β，3β，4β，5β，7α-hexaol-6-one。

化合物8 白色晶體(氯仿)，mp.129～130 ℃，分子式C29H50O。在10%硫酸乙醇溶液中顯紫紅色，與β-谷甾醇標準品TLC 檢測Rf值一致，且混合熔點不下降。故化合物8 鑒定為β-谷甾醇。

化合物9 白色粉末，微溶于氯仿、甲醇，易溶于吡啶。在10%硫酸乙醇溶液中顯紫紅色，與胡蘿卜苷標準品TLC 檢測Rf值一致，且混合熔點不下降。故化合物9 鑒定為胡蘿卜苷。

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