原發(fā)性干燥綜合征B 細胞亞群與疾病活動性的相關(guān)性分析

楊 靜，鄧代華，鄒晉梅，張 羽，田 嵐，李思吟

(四川省綿陽市中心醫(yī)院風濕科，四川 綿陽621000)

干燥綜合征Sj?gren's syndrome 是一種破壞外分泌腺體，以累及唾液腺及淚腺為主的慢性自身免疫性疾病，可分為原發(fā)性及繼發(fā)性，也可與其他結(jié)締組織病相重疊。研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性干燥綜合征(primary Sj?gren's syndrome，PSS)患者外周血B 細胞亞群與健康人存在明顯差異，CD19+IgD+B 細胞比例明顯增多，并且明顯高于類風濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及系統(tǒng)性硬化癥患者，而CD19+CD38+B 細胞比例明顯減少［1］。本研究對我科住院治療的PSS 患者進行CD19+IgD+B 細胞亞群分析，探討其對評價PSS疾病活動性的意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2013 年1 月至2014 年1 月四川省綿陽市中心醫(yī)院住院的原發(fā)性PSS 患者68 例，診斷均符合2012 年美國風濕病學會干燥綜合征分類(診斷)標準［2］，均為初次診斷，未經(jīng)過任何激素及免疫抑制劑治療。男8 例，女60 例;年齡(36．84±16．5)歲;病程(13．27±10．2)月。

1.2 方法 ①CDI9+IgD+B 細胞亞群檢測:采用藻紅蛋白花青苷(PECY5)標記的鼠抗人CDl9 單克隆抗體、藻紅蛋白(PE)標記的鼠抗人IgD 單克隆抗體標記患者外周血B 細胞。應(yīng)用金域檢驗中心Cytomics FC 500 流式細胞儀及其分析軟件對CD19+IgD+B 細胞亞群比例進行分析。②臨床資料收集:收集患者臨床表現(xiàn)、實驗室檢測結(jié)果、唇腺病理檢測結(jié)果，并根據(jù)全身癥狀、淋巴結(jié)、腺體、關(guān)節(jié)、皮膚、肺、腎臟、骨骼肌、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、血清學變化計算疾病活動指數(shù)(ESSDAI)［3］和唇腺浸潤灶指數(shù)(FS)［2］。無淋巴細胞聚集灶形成的患者為FS(-)，存在至少1 個淋巴細胞聚集灶的患者為FS(+)。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17．0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標準差表示，采用獨立樣本t檢驗;兩變量間相關(guān)關(guān)系采用直線相關(guān)分析。P＜0．05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 CD19+IgD+B 細胞亞群比例及ESSDAI 68例原發(fā)性PSS 患者ESSDAI 為(21．18±9．56)分，CD19+IgD+B 細胞比例為(3．2306±1．0418)% (圖1)。CD19+IgD+B 細胞比例與ESSDAI 呈正相關(guān)(r=0．662，P＜0．05)，見圖2。

圖1 PSS 患者CD19+IgD+B 細胞亞群流式圖

圖2 CD19+IgD+B 細胞比例與ESSDAI 相關(guān)分析散點圖

2.2 唇腺病理與CD19+IgD+B 細胞比例分析 FS(+)患者42 例，F(xiàn)S(-)患者26 例。FS(+)患者外周血CD19+IgD+B 細胞比例明顯高于FS(-)患者(P＜0．05);在FS(+)患者中生發(fā)中心(+)患者外周血CD19+IgD+B 細胞比例明顯高于生發(fā)中心(-)患者(P＜0．05)，見表1。

表1 唇腺病理與CD19+IgD+B 細胞比例分析 (%)

3 討論

PSS 病因和發(fā)病機制復(fù)雜，傳統(tǒng)的觀點認為在PSS 和其它風濕性疾病中，T 細胞耐受的喪失是導致疾病最主要的因素。但近期研究發(fā)現(xiàn)B 淋巴細胞刺激因子(BAFF)的產(chǎn)生與PSS 之間的緊密聯(lián)系以及用B 細胞耗竭藥物成功地治療PSS 患者都說明B 細胞在PSS 疾病發(fā)生中的中心地位。因此B細胞功能紊亂是PSS 的重要特征，特別是B 細胞增殖異常導致高丙種球蛋白血癥，大量自身抗體(抗RO/SSA 和抗-SSB、組蛋白、單鏈DNA、類風濕因子)及淋巴瘤的產(chǎn)生在PSS 的發(fā)病中起了重要作用。B細胞與PSS 的發(fā)病密切相關(guān)。

目前大多數(shù)研究表明，B 淋巴細胞功能的異常在PSS 的發(fā)病機制中起著重要的作用。B 淋巴細胞被異?；罨?，產(chǎn)生多種自身抗體、多克隆的免疫球蛋白及免疫復(fù)合物，進而激活腺體局部炎癥反應(yīng)，最終導致涎腺和淚腺遭受破壞［4，5］。在唇腺病理活檢中，可見到大量淋巴細胞浸潤，包括B 淋巴細胞及T淋巴細胞，對唇腺B 淋巴細胞進行分類發(fā)現(xiàn)存在不同成熟狀態(tài)的B 細胞，其中可見大量的漿細胞浸潤。研究根據(jù)B 細胞表面IgD 及CD38 表達的不同及不同的成熟狀態(tài)，可分為B1 到B5 不同類型的5種B 細胞亞群，即Bm1、Bm2、Bm3、Bm4、Bm5［6］。這些B 細胞均表達CD19，CD19+IgD+B 細胞在原發(fā)性PSS 外周血高表達，提示CD19+IgD+B 細胞與原發(fā)性PSS 發(fā)病密切相關(guān)［7，8］。

Binard 等［1］研究也發(fā)現(xiàn)，原發(fā)PSS 患者外周血中確實存在不同的B 淋巴細胞亞群，并且這些B 淋巴細胞亞群可作為診斷原發(fā)PSS 的一個可靠的免疫學依據(jù)。B5 細胞稱為漿細胞，可產(chǎn)生大量的自身抗體，其中在PSS 外周血CD19+IgD+B 細胞比例是明顯增高的。研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性PSS 患者外周血CD19+IgD+B 細胞比例明顯高于健康者、類風濕關(guān)節(jié)炎患者及系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者［7～9］。說明B 細胞免疫在原發(fā)PSS 免疫紊亂中起著關(guān)鍵的作用。

唇腺活檢是診斷PSS 的一個重要標準，淋巴細胞大量浸潤腺體間質(zhì)并形成浸潤灶是患者腺體的主要病理學特點。國內(nèi)學者研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)S(+)患者的臨床癥狀較FS(-)患者嚴重，而FS(+)患者中生發(fā)中心(+)患者的臨床癥狀尤為嚴重，具有更高的疾病活動度［10］。PSS 患者淋巴細胞浸潤灶及生發(fā)中心中存在大量的B 淋巴細胞，因此，B 淋巴細胞浸潤及不同亞群的分布可能反映患者疾病的嚴重程度。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)S(+)患者CD19+IgD+B 細胞的比例明顯高于FS(-)患者，同時FS(+)患者具有更嚴重的系統(tǒng)損害及更高的疾病活動度。

2009 年歐洲風濕病聯(lián)盟(EULAR)制定了對干燥綜合征病情的ESSDAI，較為系統(tǒng)而全面地對活動指數(shù)的評估，具有較為肯定的有效性。ESSDAI 目前廣泛用于臨床疾病狀態(tài)的評估，主要評估臨床表現(xiàn)的嚴重程度及對治療的反應(yīng)性，因PSS 為B 細胞主導的自身免疫性疾病，同時也可能反映患者體內(nèi)免疫紊亂的狀態(tài)，特別是細胞免疫。本研究對患者CD19+IgD+B 細胞比例與患者ESSDAI 進行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，其與ESSDAI 表現(xiàn)出正相關(guān)關(guān)系，ESSDAI分數(shù)越高，患者CD19+IgD+B 細胞比例越高。羥氯喹聯(lián)合激素治療PSS 是被證明有效的治療手段［11］。經(jīng)糖皮質(zhì)激素及羥氯喹治療3 月后患者ESSDAI 分數(shù)明顯下降，同時CD19+IgD+B 細胞比例也明顯下降，與類風濕關(guān)節(jié)炎和健康對照組無明顯差異。因此，檢測CD19+IgD+B 細胞比例可以反映患者疾病活動程度，同時可作為療效判斷的敏感指標。

原發(fā)性PSS 患者B 細胞免疫存在紊亂，表現(xiàn)不同B 細胞亞群比例的失調(diào)，CD19+IgD+B 細胞作為原發(fā)性PSS 高表達的B 細胞亞群，對評價PSS 病情活動，指導治療，乃至評估預(yù)后中有著重要的意義。

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