復(fù)方黃松洗液對(duì)兔體外殺菌效果觀察

蔡恒玲,周 娟(南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)研究所，湖南 衡陽 421001)

復(fù)方黃松洗液是由地膚子、黃柏、崗松、蛇床子等原料加工、提取而成的液體制劑。它具有清熱燥濕，祛風(fēng)止癢等功效,是目前國(guó)內(nèi)泌尿生殖道感染治療中最常用的幾種中藥制劑之一。為了解其對(duì)泌尿生殖道疾病常見病原體的抑菌與殺菌作用，對(duì)復(fù)方黃松洗液進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

復(fù)方黃松洗液(廣西源安堂制藥廠生產(chǎn)批號(hào):20120322)；各種細(xì)菌：大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(CMCC44102)、金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC6538)、綠膿桿菌(臨床株)、表皮葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC12228)、白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株(CMCC98001)均來源于南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，新西蘭兔、18～22 g SPF級(jí)昆明小鼠購(gòu)自南華大學(xué)動(dòng)物部。

1.2 方法

1.2.1 殺菌試驗(yàn) 用滅菌PBS將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌稀釋成1×105cfu/mL后，用滅菌PBS稀釋100倍，即得實(shí)驗(yàn)菌液。分別在4.5 mL中草藥方劑原液和1∶2的稀釋藥液中加入0.5 mL實(shí)驗(yàn)菌液，充分?jǐn)嚢杌靹蚝?，分別取0.5 mL菌藥混合液并加入4.5 mL中和劑混勻，作用10 min后，制備瓊脂平板，在37 ℃下培養(yǎng)24 h后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，重復(fù)3次，取平均值計(jì)算殺菌率。同時(shí)用滅菌PBS代替進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 毒性試驗(yàn) 皮膚刺激和黏膜刺激試驗(yàn)采用新西蘭兔進(jìn)行。皮膚刺激試驗(yàn):將兔背部脊柱兩側(cè)分別剪掉兩塊毛(3 cm×3 cm)。將浸濕藥液的紗布貼于兔子一側(cè)皮膚，另一側(cè)用滅菌蒸餾水作對(duì)照。黏膜刺激試驗(yàn):將1∶2復(fù)方黃松洗液藥液滴入新西蘭兔一側(cè)眼結(jié)膜內(nèi)，另外一側(cè)眼作為對(duì)照。經(jīng)口毒性試驗(yàn):用18～22 g SPF級(jí)昆明小鼠進(jìn)行，用復(fù)方黃松洗液藥液灌胃，測(cè)LD50值。

1.2.3 最低殺菌濃度(Minimum bactericidal concentration，MBC)測(cè)定 將復(fù)方黃松洗液原藥用滅菌生理鹽水稀釋制備平板，使培養(yǎng)基中復(fù)方黃松洗液的稀釋濃度為1/2，1/4，1/8，1/16，1/32，1/64。用滅菌生理鹽水稀釋各菌種為1×107cfu/mL，分別接種于上述平板及空白對(duì)照平板。37 ℃溫箱培養(yǎng)24 h后觀察，將完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的復(fù)方黃松洗液最高稀釋度作為最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration，MIC)。將MIC測(cè)定的各平板無菌生長(zhǎng)處瓊脂接種于不含復(fù)方黃松洗液的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，37 ℃溫箱培養(yǎng)24 h后觀察，以無菌生長(zhǎng)的復(fù)方黃松洗液最高稀釋度作為其MBC。

2 結(jié) 果

2.1 殺菌效果

復(fù)方黃松洗液對(duì)5種細(xì)菌均有不同程度的殺滅作用，并且藥液濃度越大，作用時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌率越高。見表1。

2.2 毒性試驗(yàn)效果

皮膚刺激試驗(yàn)后，兔皮膚未出現(xiàn)紅腫、水腫和潰爛的發(fā)生。新西蘭兔眼黏膜在滴藥后0.5、1、2、4、8、16 h及32 h均未出現(xiàn)充血、水腫及分泌物等。經(jīng)口灌入藥液后，昆明小鼠未出現(xiàn)明顯中毒癥狀，觀察期內(nèi)無死亡。試驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠，大體解剖肉眼未見異常組織或臟器。復(fù)方黃松原液對(duì)昆明小鼠經(jīng)口的LD50>10 000 mg/kg，屬于無毒藥液。

表1 復(fù)方黃松洗液對(duì)5種細(xì)菌的殺菌效果

2.3 MBC結(jié)果

復(fù)方黃松洗液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌、表皮葡萄球菌殺菌作用均強(qiáng)。MBC分別為3.45525、3.54215、3.70625、3.99564、4.80125 g/L。強(qiáng)弱順序依次為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念株菌、綠膿桿菌、表皮葡萄球菌。

3 討 論

泌尿生殖道感染占社區(qū)感染的第2位，同時(shí)也是主要的醫(yī)院感染之一。盡管近年來泌尿生殖道感染的病原菌不斷發(fā)生變化，但大腸桿菌仍然是主要的病原菌(占50%～80%)，其次是腸球菌屬等[1-4]。中草藥具有明顯的殺菌效果，且細(xì)菌、病毒、真菌等病原微生物對(duì)其不易產(chǎn)生耐藥性，因此，中草藥越來越廣泛的用于泌尿生殖道感染治療。復(fù)方黃松洗液是由地膚子、黃柏、崗松、蛇床子等原料加工、提取而成的復(fù)方液體制劑。其中地膚子可以清熱利濕，祛風(fēng)止癢，黃柏可清熱燥濕、瀉火解毒、退熱除蒸，崗松可以去瘀，止痛，利尿，殺蟲，蛇床子可燥濕，祛風(fēng)，殺蟲[5-6]。本課題組選取了大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌作為實(shí)驗(yàn)菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該洗液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌均有較強(qiáng)的殺菌作用。對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌作用2 min殺滅率分別達(dá)99.97%、99.25%，對(duì)綠膿桿菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌作用2 min殺滅率分別達(dá)96.76%、

95.36%、97.23%；對(duì)5種細(xì)菌作用10 min后，殺滅率均達(dá)99%以上。復(fù)方黃松洗液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌、表皮葡萄球菌殺菌作用均強(qiáng)，MBC分別為3.455 25、3.542 15、3.706 25、3.995 64、4.801 25 g/L。強(qiáng)弱順序?yàn)榇竽c桿菌>金黃色葡萄球菌>白色念珠菌>綠膿桿菌>表皮葡萄球菌。并且實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)復(fù)方黃松洗液對(duì)皮膚、黏膜無刺激作用，對(duì)人體無毒副作用，可以安全使用。

本文證實(shí)了復(fù)方黃松洗液具有清熱除濕、殺蟲止癢的作用,并且安全無毒，為其臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)，說明復(fù)方黃松洗液可以用于泌尿生殖道感染的預(yù)防與治療。

[1]倪淑芳.泌尿系感染的病原菌分布及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010,20(10):1477-1479.

[2]白曉明,周寶祥,左淑蘭.醫(yī)院2008～2010年泌尿系統(tǒng)感染病原菌的種類及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(13):2850-2851.

[3]田立杰,趙晴,宋曉言，等.20味中草藥與抗生素聯(lián)用對(duì)豬源鏈球菌體外抑菌作用的分析[J].中國(guó)獸藥雜志,2014,48(1):45-48.

[4]倪萍,牛婷婷.幾種中草藥提取物對(duì)念珠菌體外抑菌作用研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2014,10(8):26-27.

[5]陳敬民，李開雙，李翠紅，等.復(fù)方黃松凝膠的主要藥效學(xué)研究[J].中成藥,2010,32(9):1592-1594.

[6]文萬鵬.復(fù)方黃松洗液主要藥效學(xué)研究[J].中國(guó)藥師,2004,7(8):599-601.