高效液相色譜法測定茵山蓮顆粒的含量

【摘要】建立反相高效液相色譜法測定茵山蓮顆粒中五味子醇甲的含量。方法：采用大連依利特液相色譜柱C18 Hypersil ODS2 4.6*250*5，甲醇一水（65：35）為流動相，檢測波長為250nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。五味子醇甲在20～160μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.99996）。五味子醇甲平均回收率分別為99.6%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于茵山蓮顆粒中五味子醇甲的含量測定。

【關(guān)鍵詞】茵山蓮顆粒；含量；測定

茵山蓮顆粒為淺棕褐色至棕褐色圓柱形不規(guī)則顆粒，由茵陳、半枝蓮、五味子、梔子、甘草、板蘭根、糊精、甜菊素組成。茵山蓮顆粒具有清熱解毒利濕的功效。茵山蓮顆粒用于慢性肝炎，膽囊炎、胰腺炎等癥的治療。五味子是其主要成份之一。五味子具有抗驚厥、保肝、抗衰老等作用[1-6].中國藥典2010版僅對茵山蓮顆粒中野黃芩甘含量作要求，未對五味子醇甲做要求。本文對茵山蓮顆粒中五味子醇甲進行含量測定。

1、儀器與試藥

1.1儀器：LC-5500型高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；SP-2500型雙光束紫外可見分光光度計（蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司）；FE20K梅特勒FE20K酸度計（北京聯(lián)合科儀科技有限公司）；KQ-700GTDV臺式高頻恒溫數(shù)控超聲波清器（昆山市超聲儀器有限公司）；AC 150-S21恒溫水浴鍋（賽默飛世爾科技（中國）有現(xiàn)公司）；XYA-H 帕恩特一般檢驗級純水機（北京湘順源科技有限公司）；SHB-（III）循環(huán)水式真空泵（上海楚柏實驗室設(shè)備有限公司）；R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琦有限公司）；CH-10小型實驗室用槽形混合機（江陰市祝塘明科機械廠）：實驗室迷你型YK60搖擺顆粒機制粒機（常州市佳騰干燥制粒設(shè)備有限公司）。

1.2色譜柱：大連依利特液相色譜柱C18 Hypersil ODS2 4.6*250*5（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）

1.3對照品：五味子醇甲

1.4試劑：甲醇（北京儀化通標(biāo)科技有限公司）、乙醚（北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司）、乙腈（上海瀾銳儀器科技有限公司）。

1.5試藥：茵山蓮顆粒

2、測定方法確定

2.1色譜條件

依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動相：甲醇一水（65：35）為流動相，檢測波長：250nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計算應(yīng)不得低于2000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取五味子醇甲對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含80μg的溶液，即得。

2.3提取方法確定

2.3.1提取溶媒的選擇 取茵山蓮顆粒適量，研細，精密稱定，分別選用了水、50%甲醇、甲醇進行超聲提取，結(jié)果表明50%甲醇分離效果為最好，所以在試品溶液的制備過程選用50%甲醇。

2.3.2提取時間的選擇 取茵山蓮顆粒適量，研細，精密稱定，用50%甲醇溶解，超聲波振蕩分別提取20、25、30分鐘，制備茵山蓮顆粒溶液，含量結(jié)果表明：三種提取時間結(jié)果無明顯差異，所以選用25分鐘。

2.3.3供試品溶液的制備 取茵山蓮顆粒適量，研細，精密稱取約2g，置25mL量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理25分鐘使溶解，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0·45μm）濾過，即得。

2.4專屬性試驗

取茵陳、半枝蓮、梔子、甘草、板蘭根煎煮兩次，第一次2小時，第二次1小時，合并煎液，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.10-1.15（50）的清膏，取一份清膏加1.3份糊精及甜菊素適量，混勻，制成顆粒，即得陰性對照樣品，照2.3.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在五味子醇甲出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5精密度試驗

精密稱取五味子醇甲對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為80μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.62%，表明本方法精密度良好。

2.6對照品的線性考察

精密稱取適量五味子醇甲對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含20、40、80、100、120、140、160微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，五味子醇甲在20～160μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的茵山蓮顆粒樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.86%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8準(zhǔn)確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量茵山蓮顆粒9份，置量瓶中，分別精密加入五味子醇甲對照品，按項下方法制備成80%、100%、120%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗，計算回收率為99.6%，RSD為0.66%。

2.9最低檢出限與定量

采用2.1項下色譜條件，對樣品測定，當(dāng)信噪比為10時，定量限為2.2ng；當(dāng)信噪比為3時，最低檢出限為0.5ng.

2.10樣品穩(wěn)定性試驗

取同一批五味子醇甲樣品，分別制備供試品和對照品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4、5小時，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定五味子醇甲對照品和樣品RSD分別為0.66%，0.52%。結(jié)果表明供試品和樣品5小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.11樣品含量測定

依照上述含量測定方法，再按外標(biāo)法以峰面積計算樣品的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為82.6μg·g-1、85.1μg·g-1、83.3μg·g-1。

3、討論

本實驗采用高效液相法效果好、方法簡便、快捷、準(zhǔn)確、專屬性好，可用于茵山蓮顆粒中五味子醇甲的含量測定。

參考文獻

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