無菌藥品包裝密封完整性驗證研究

【摘要】密封的包裝是保證藥品無菌的重要手段之一，本文針對無菌原料藥企業(yè)常用的包裝——10Kg裝鋁瓶進(jìn)行論證，并設(shè)計了完整的驗證步驟，對藥用鋁瓶的包裝密封完整性進(jìn)行針對性驗證。

【關(guān)鍵詞】無菌原料藥；藥品包裝；完整性；驗證

1、目的

用微生物挑戰(zhàn)試驗——液體浸沒法，檢測瓶裝無菌產(chǎn)品密封系統(tǒng)的完整性。

2、適用范圍

本驗證適用于檢測10Kg裝鋁瓶裝無菌產(chǎn)品密封系統(tǒng)的完整性。

3、鋁瓶生產(chǎn)廠家及批號（略）

每個廠家的鋁瓶都應(yīng)取至少3個批次進(jìn)行試驗，以充分證明該廠家生產(chǎn)鋁瓶的密封性。

4、概述

4.1試驗原理

向無菌產(chǎn)品鋁瓶中灌裝無菌培養(yǎng)基并在正常生產(chǎn)線上加塞和壓蓋，將鋁瓶封口端浸在含有高濃度的細(xì)菌懸液中，培養(yǎng)這些鋁瓶并檢查是否有挑戰(zhàn)微生物侵入。

4.2試驗中的關(guān)鍵控制點(diǎn)

a）挑戰(zhàn)用培養(yǎng)基的配方；

b）挑戰(zhàn)用微生物細(xì)胞的大?。?/p>

c）挑戰(zhàn)用菌懸液的濃度要足夠高（不得低于105CFU/ml）；

d）樣品浸入菌懸液的時間；

e）無菌培養(yǎng)基對挑戰(zhàn)微生物的靈敏度。

5、內(nèi)容

5.1儀器用具

5.2培養(yǎng)基

5.3挑戰(zhàn)菌：粘質(zhì)沙雷氏菌【CMCC（B）41 002】

注：粘質(zhì)沙雷氏菌為短桿菌，約0.5×（0.5～1.0）um，周身鞭毛，能運(yùn)動，無莢膜，無芽胞，常用于0.45um濾膜的過濾除菌驗證。

5.4實驗前準(zhǔn)備

5.4.1無菌培養(yǎng)基的灌裝

將制備好的培養(yǎng)基經(jīng)濕熱滅菌，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，在A級層流的保護(hù)下，通過無菌操作將培養(yǎng)基灌裝至滅菌的10Kg裝鋁瓶中，在正常生產(chǎn)線上加塞、壓蓋。

5.4.2無菌檢查

隨機(jī)抽取已灌裝培養(yǎng)基的鋁瓶7瓶，在30-35℃培養(yǎng)14天，每隔兩天隨機(jī)抽取一個鋁瓶進(jìn)行無菌檢查。

所有鋁瓶均應(yīng)無微生物生長。

對于鋁瓶，因培養(yǎng)期內(nèi)無法觀察是否有微生物生長，檢查時，將鋁瓶內(nèi)培養(yǎng)基倒出，轉(zhuǎn)移至一無菌玻璃容器內(nèi)，觀察是否有微生物生長，如發(fā)現(xiàn)任何瓶內(nèi)培養(yǎng)基有微生物生長，丟棄所有的鋁瓶，重新開始試驗。

5.4.3對試驗用鋁瓶進(jìn)行培養(yǎng)基靈敏度檢查（略）

5.4.4挑戰(zhàn)用菌懸液的制備

取2-3支粘質(zhì)沙雷氏菌的斜面培養(yǎng)物，用10ml 0.9%無菌氯化鈉溶液洗脫菌苔，將洗脫后的菌苔接入含200L培養(yǎng)基的容器內(nèi)，于30-35℃培養(yǎng)18-24小時。培養(yǎng)結(jié)束后，能明顯見容器內(nèi)培養(yǎng)基渾濁。此菌液用于鋁瓶的液體浸沒試驗。顯微鏡下觀察菌液，細(xì)胞應(yīng)處于生長態(tài)，并且運(yùn)動活躍，活動性細(xì)胞應(yīng)占90%以上。通過無菌操作取無菌0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行1ml→9ml的10倍系列稀釋，選擇適當(dāng)?shù)南♂尲?，用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾倒法計數(shù)，置30-35℃培養(yǎng)48小時。菌液濃度應(yīng)大于106，計數(shù)結(jié)果應(yīng)予以記錄。

5.5微生物挑戰(zhàn)——液體浸沒試驗

5.5.1將上述挑戰(zhàn)用菌懸液倒入一敞口不銹鋼容器，長×寬×高為1.5m×1.5m×0.2m。

5.5.2分別隨機(jī)抽取10個鋁瓶，將鋁瓶倒立于挑戰(zhàn)菌液中，鋁瓶用試管架或其他適當(dāng)?shù)姆绞焦潭?，使其倒置于菌液中，瓶?nèi)的無菌培養(yǎng)基應(yīng)充分浸沒封口內(nèi)表面，封口的的外表面和瓶頸應(yīng)完全浸沒在菌懸液中。如下圖所示：

5.5.3在常溫常壓下將鋁瓶倒置在菌懸液中持續(xù)不少于4小時。試驗結(jié)束后，取敞口容器中的菌懸液，按5.4.4進(jìn)行菌液濃度以及細(xì)菌細(xì)胞的活動狀態(tài)的測定。

5.5.4從菌懸液中取出鋁瓶，擦凈瓶外的殘留菌液，然后用無菌注射用水將鋁瓶外表面沖洗干凈。

5.5.5將沖洗干凈的鋁瓶放在塑料袋中，置30-35℃培養(yǎng)14天，按5.4.1的方法檢查瓶內(nèi)是否有微生物生長，有生長記作“+”，無生長記作“-”，未進(jìn)行觀察則記作“N/A”，記錄檢查結(jié)果。

5.5.6如果所有鋁瓶都無菌生長，則取2瓶浸過菌懸液的鋁瓶，進(jìn)行培養(yǎng)基的靈敏度檢查。

5.5.7所有接觸過挑戰(zhàn)微生物的物品均必須經(jīng)滅菌后丟棄。

5.6結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

5.6.1只有5.4.3、5.5.6中的培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果均符合規(guī)定，挑戰(zhàn)試驗才有效。

5.6.2在整個挑戰(zhàn)過程中，挑戰(zhàn)用菌懸液的菌液濃度不得低于1.0×106CFU/ml。

5.6.3記錄挑戰(zhàn)試驗中有微生物生長的鋁瓶數(shù)，如果有微生物生長，必須進(jìn)行以下調(diào)查：

a）檢查是否由于鋁瓶封口有缺損造成微生物的侵入，如有，應(yīng)描述并記錄觀察到的所有鋁瓶封口的缺損（如拍照等）。b）進(jìn)行菌種鑒別確認(rèn)瓶內(nèi)微生物是否為粘質(zhì)沙雷氏菌。

5.6.4如果任何有挑戰(zhàn)微生物生長的鋁瓶，不是由于明顯的鋁瓶密封件的物理性缺損造成微生物的侵入和生長，判該試驗結(jié)果不合格。如果所有經(jīng)挑戰(zhàn)的鋁瓶均無菌生長或生長的微生物經(jīng)鑒別不是粘質(zhì)沙雷氏菌，則判挑戰(zhàn)試驗合格。

6、結(jié)果

本次驗證中，分別對兩個生產(chǎn)廠家各3批次鋁瓶進(jìn)行驗證，培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果合格，鋁瓶在30-35℃培養(yǎng)14天，無微生物生長。挑戰(zhàn)試驗合格，本次驗證通過。

7、討論

1.本驗證中，菌種的鑒別為難點(diǎn)之一，應(yīng)盡量去除雜菌以避免對驗證結(jié)果造成不良影響。例如，對驗證用的鋁瓶及附屬部件進(jìn)行滅菌，所使用的槽型容器也應(yīng)滅菌，如條件不允許，也應(yīng)通過其他有效的手段盡可能降低其表面帶菌量。2.在進(jìn)行驗證前，應(yīng)對鋁瓶的外觀進(jìn)行檢查，以避免鋁瓶封口破損導(dǎo)致驗證失敗，浪費(fèi)大量時間及人力物力。

參考文獻(xiàn)

[1]藥品生產(chǎn)驗證指南（2003）./國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品安全監(jiān)管司，國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證管理中心組織編寫.—北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003.5 ISBN 7-5025-4171-3

[2]無菌藥品：藥品GMP指南/國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證管理中心編寫.—北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2011.8 ISBN 978-7-5067-5076-9