福林酚法測定茶樹中茶多酚的分布水平

摘要：采用福林酚法對茶樹不同部位多酚化合物總含量進行測定，比較不同部位中茶多酚含量的差異，探討茶多酚在茶樹體內(nèi)的分布情況。結(jié)果表明，茶樹中茶多酚含量隨生長部位的不同而存在差異，葉片中茶多酚含量最高，根部含量最低。了解茶樹不同部位茶多酚的分布將有助于為茶樹茶多酚代謝的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：茶樹；茶多酚；福林酚法；分布

中圖分類號：O657.3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）10-2417-03

茶葉富含茶多酚，一般是茶葉中兒茶素類、酚酸類和花色素類多酚化合物的總稱，是茶葉中具有生物活性的主要成分，其含量一般占干重的15%～35%，其含量及組成與制茶類別及品質(zhì)關(guān)系密切，直接影響茶湯色澤、滋味，歷來為茶葉科技工作者所重視[1-3]；此外，人們還發(fā)現(xiàn)茶多酚具有抑菌、消炎等多種功效，其抗氧化特性還可應(yīng)用于肉類、蔬菜等產(chǎn)品保鮮及深加工保健等領(lǐng)域[4-6]。本研究針對同一茶樹的不同部位所含茶多酚含量進行比較，分析茶多酚在茶樹中分布差異，以期為茶樹茶多酚的代謝及體內(nèi)轉(zhuǎn)運途徑等研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

茶樹品種：早白尖5號無性系6～7年生健壯植株；采樣時間：2011年7月15日；采集地：四川省自貢市榮縣五通農(nóng)場茶園（海拔715 m左右）。

在不同植株上隨機剪取樣品，按根、莖、當年生新葉、隔年生老葉片歸類，分別用塑料保鮮袋密封樣品，迅速帶回實驗室，80～85 ℃熱風烘干至恒重后粉碎備用。

1.2 試劑與儀器

10 mg/100 mL沒食子酸標準溶液；1%（m/V，下同）鐵氰化鉀，現(xiàn)配現(xiàn)用。

福林酚試劑：稱取Na2CO3·2H2O 50 g和Na2HPO4·12H2O 12.5 g，加入350 mL去離子水、25 mL濃硫酸及50 mL濃HCl溶液，混勻，以小火回流10 h；再加入75 g LiSO4，25 mL去離子水及數(shù)滴溴，開口沸騰15 min，以除去過量溴，冷卻后定容至500 mL，過濾至棕色試劑瓶中；用1 mol/L的NaOH標準液滴定，酚酞為指示劑，后稀釋至終濃度為1 mol/L。

T6型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；LG10-2.4A型高速離心機（北京京立離心機有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 沒食子酸標準曲線的制作 采用福林酚法（Folin-Ciocalteaut）[7，8]。在20 mL具塞試管中，分別加入不同體積（0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL）的10 mg/100 mL沒食子酸標準溶液和3 mL福林酚試劑，7～8 min后加入3 mL 10%（m/V，下同）Na2CO3溶液，搖勻，于25 ℃靜置反應(yīng)l h，用去離子水定容至20 mL，測定OD760 nm。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.3.2 樣品液中總酚的測定 取適量樣品溶液于20 mL具塞刻度試管中，按上述方法測定760 nm處吸光度，按照式（1）計算樣品中總酚的質(zhì)量分數(shù)。式中：G為標準曲線中查的總酚含量，單位μg；W為樣品重量，單位g。

總酚含量=0.003 75G/W×100% （1）

1.3.3 樣品中茶多酚提取 準確稱取5 g干粉樣品于索氏提取管中，加入一定體積的乙醇，用恒溫磁力加熱攪拌器加熱，于80～85 ℃回流1 h，待提取液冷卻至室溫，以去離子水定容至100 mL，澄清后測定OD760 nm，根據(jù)式（1）計算出樣品中的總酚含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 福林酚法測定條件的優(yōu)化

采用福林酚法測定茶多酚時，對測定結(jié)果產(chǎn)生影響的因素有：福林酚試劑用量、福林酚試劑與Na2CO3溶液的比例、溫度、時間等，針對上述因素分析，尋找各因素最佳的反應(yīng)條件。

在福林酚試劑用量優(yōu)化試驗中，沒食子酸標準溶液0.5 mL，于20 ℃反應(yīng)1.5 h，研究不同體積福林酚試劑對吸光度的影響，其中Na2CO3溶液與福林酚試劑等體積使用，結(jié)果見圖1。由圖1可知，當福林酚試劑加入量為3.0 mL時，吸光度最大。

在福林酚試劑和Na2CO3溶液體積比的優(yōu)化試驗中，沒食子酸標準溶液為0.5 mL，福林酚試劑3 mL，于20 ℃反應(yīng)1.5 h，研究2種試劑不同體積比例條件下對吸光度的影響，結(jié)果見圖2。由圖2可知，當體積比為1∶1時，吸光度最大，顯色反應(yīng)完全。

在溫度優(yōu)化試驗中，沒食子酸標準溶液0.5 mL，福林酚試劑和Na2CO3溶液各3 mL，反應(yīng)時間1.5 h，研究不同溫度對吸光度的影響。由圖3可知，25 ℃吸光度最高，選擇25 ℃是最佳反應(yīng)溫度。

在時間優(yōu)化試驗中，沒食子酸標準溶液0.5 mL，福林酚試劑和Na2CO3溶液各為3 mL，25 ℃反應(yīng)，研究不同反應(yīng)時間對吸光度的影響，結(jié)果見圖4。由圖4可知，反應(yīng)1 h后其吸光度達到最大并保持穩(wěn)定，選擇1 h為最佳反應(yīng)時間。

綜合上述結(jié)果，該反應(yīng)的最佳條件為，福林酚試劑用量為3.0 mL，福林酚試劑與Na2CO3溶液的比例為1∶1，于25 ℃反應(yīng)1 h。

2.2 繪制沒食子酸標準曲線

按以上的優(yōu)化條件，測定吸光度并繪制標準曲線（圖5）。線性回歸方程為y=0.142 0x-0.081 8，R2=0.999 4。

2.3 茶樹不同部位的茶多酚含量

茶樹不同部位的茶多酚含量見表1。由表1可知，在茶樹各不同部位中，茶多酚含量不同，其中茶葉中含量最多，當年生新葉中茶多酚含量高于老葉，茶樹莖與根部含量較低，以根部為最低。

3 結(jié)論

試驗發(fā)現(xiàn)福林酚法檢測總酚的最佳反應(yīng)條件為福林酚試劑3.0 mL，10% Na2CO3溶液3.0 mL，25 ℃反應(yīng)1 h，在此條件下線性回歸方程為y=0.142 0x-0.081 8，R2=0.999 4。茶樹植株不同部位茶多酚含量存在明顯差異，茶多酚主要分布于茶樹葉片中，其中又以幼嫩芽葉中茶多酚含量為高。茶樹植株內(nèi)茶多酚的分布情況可能與茶樹茶多酚代謝及轉(zhuǎn)移運輸有關(guān)[9，10]，尚有待進一步研究。

參考文獻：

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