單核細(xì)胞增生性李斯特菌最新研究進(jìn)展

(天津市寶坻區(qū)疾病預(yù)防控制中心，天津 301800)

單核細(xì)胞增生性李斯特菌(單增李斯特菌)廣泛分布于水、土壤、人和動(dòng)物糞便中，常伴隨人類皰疹病毒引起傳染性單核細(xì)胞增多癥，也可引起腦膜炎、菌血癥等。近年來在發(fā)達(dá)國(guó)家常污染奶制品而引起食物中毒。致病物質(zhì)主要是溶血素和菌體表面成分。機(jī)體主要靠細(xì)胞免疫功能清除本菌。單增李斯特菌尚能引起魚類、鳥類和哺乳動(dòng)物疾病。很多國(guó)家都已經(jīng)采取措施以控制食品中的單增李斯特菌，并制定了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。本文對(duì)單增李斯特菌研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 微生物學(xué)特性

1.1 形態(tài)與染色

單增李斯特菌為革蘭陽(yáng)性短小桿菌，無(wú)芽孢，不分支、規(guī)則、短小。通常成雙排列，偶爾可見雙球菌。該菌在18～20 ℃鞭毛有動(dòng)力，在37 ℃鞭毛動(dòng)力緩慢；該菌不產(chǎn)生芽孢，一般不形成莢膜，在含血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成黏多糖莢膜。

1.2 培養(yǎng)特性

單增李斯特菌為兼性厭氧菌，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，菌落初始很小，直徑約0.2～0.4 mm，半透明，邊緣整齊，呈露水滴狀，但隨著菌落的增大，變得不透明。最適生長(zhǎng)溫度30～37 ℃，由于其在4 ℃能生長(zhǎng)，故可進(jìn)行冷增菌。在血瓊脂上于35 ℃經(jīng)18～24 h培養(yǎng)能長(zhǎng)出狹窄的β-溶血環(huán)。在半固體培養(yǎng)基內(nèi)，可呈倒傘形生長(zhǎng)。在含酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)瓊脂上，用45°角入射光照射菌落，通過解剖鏡垂直觀察，菌落呈藍(lán)色、灰色或藍(lán)灰色。在科瑪嘉(CHROMagar)單增李斯特菌選擇培養(yǎng)基上，菌落呈藍(lán)色并帶有白色光環(huán)(暈輪)。

1.3 單增李斯特菌的鑒定

革蘭染色陽(yáng)性桿菌，細(xì)菌在濕片中呈翻筋斗運(yùn)動(dòng)；過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性；37 ℃培養(yǎng)24 h能發(fā)酵葡萄糖、海藻糖、七葉苷、水楊素、果糖；產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵木糖；體積分?jǐn)?shù)0.40膽汁溶解實(shí)驗(yàn)陰性；M-R和V-P實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。

1.4 屬內(nèi)種間的鑒別

單增李斯特菌的溶血環(huán)狹窄，沒有延伸超過菌落邊緣，而伊氏李斯特菌有明顯超過菌落邊緣寬大溶血環(huán)。雖然斯氏李斯特菌亦有狹窄溶血環(huán)，但根據(jù)生化反應(yīng)可區(qū)別。

2 流行病學(xué)

2.1 單增李斯特菌的分類

李斯特菌屬中只有單增李斯特菌感染人類[1]。單增李斯特菌包括致病性、弱致病性和非致病性3種類型。李斯特菌4b型主要感染反芻動(dòng)物，1型主要感染嚙齒動(dòng)物，與全球33%～50%的單增李斯特菌感染暴發(fā)流行有關(guān)[2]。

2.2 單增李斯特菌的致病性

該菌適應(yīng)生長(zhǎng)溫度4 ℃，故有許多機(jī)會(huì)進(jìn)入食品生產(chǎn)或加工過程，人類攝取已被單增李斯特菌污染食品，可引起感染。在成人可引起原發(fā)性腦膜炎、腦炎及敗血癥等。

單增李斯特菌是李斯特菌屬中致病力最強(qiáng)的細(xì)菌，是引起動(dòng)物和人類疾病的主要食源性致病菌，其導(dǎo)致的死亡率甚至超過了沙門菌和肉毒桿菌[3]。研究表明，高達(dá)10%的人類胃腸道對(duì)單增李斯特菌易感[4]。單增李斯特菌進(jìn)入人體是否患病與菌量、宿主的年齡及免疫狀態(tài)有關(guān)，因?yàn)樵摼且环N細(xì)胞內(nèi)寄生菌，宿主對(duì)其清除主要靠細(xì)胞免疫功能，因此，易感者為新生兒、孕婦、40歲以上的成人和免疫功能缺陷者。通過近幾年食品污染物調(diào)查結(jié)果顯示，單增李斯特菌在生肉及即食食品中污染率較高[5]。該菌可誘發(fā)食物中毒，導(dǎo)致李斯特菌病，主要引起人類腦膜炎、菌血癥等，發(fā)病率雖低，病死率卻高達(dá)30%～70%[6]。美國(guó)密歇根州曾有14人因食用被該菌污染的“熱狗”和熟肉死亡[7]。該菌可通過眼及破損皮膚、黏膜進(jìn)入體內(nèi)而造成感染，性接觸也是本病傳播的可能途徑，且有上升趨勢(shì)。

3 實(shí)驗(yàn)室檢查

3.1 標(biāo)本鏡下觀察

本菌為革蘭陽(yáng)性小桿菌，直徑約為0.4～2.0 μm，直或稍彎，多數(shù)菌體一端膨大，似棒狀，常呈V字形排列，偶可見雙球狀。無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，20～25 ℃形成周鞭毛，有動(dòng)力，在37 ℃時(shí)動(dòng)力緩慢或無(wú)。幼齡培養(yǎng)物為革蘭陽(yáng)性，陳舊培養(yǎng)物可轉(zhuǎn)為革蘭陰性，呈兩極著色，易誤認(rèn)為雙球菌。

3.2 免疫學(xué)方法

由于細(xì)菌菌體和鞭毛抗原的存在，使得人們可以建立基于抗原-抗體反應(yīng)的方法來檢測(cè)食品中的致病菌，這種方法只需少許樣品純化就可以精確檢出抗原，不易受基質(zhì)影響，并可以提供實(shí)時(shí)信息。

3.2.1酶聯(lián)熒光分析法(ELFA) 將單增李斯特菌抗原與單克隆抗體結(jié)合，再將結(jié)合有堿性磷酸酶的抗體與單增李斯特菌抗原結(jié)合，發(fā)出熒光，測(cè)得熒光強(qiáng)度與抗原含量呈正比。由此可推斷出樣品中單增李斯特菌數(shù)量。該方法靈敏度高。

3.2.2自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫檢測(cè)系統(tǒng)(VIDAS)分析方法 此分析系統(tǒng)是依據(jù)免疫學(xué)酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA)原理對(duì)單增李斯特菌等進(jìn)行快速檢測(cè)的方法。研究結(jié)果顯示，VIDAS檢測(cè)該菌的特異度可達(dá)96%，靈敏度為73%[8]。

3.2.3辣根過氧化物酶標(biāo)記葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)-ELISA方法 利用HRP-SPA代替酶標(biāo)二抗，采用一步法ELISA 檢測(cè)肉品中的單增李斯特菌。HRP-SPA 可完全代替酶標(biāo)二抗用于對(duì)李斯特菌的檢測(cè)。

3.2.4磁性試紙條層析方法 磁性試紙條可以對(duì)檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行定量分析，其結(jié)果更為精準(zhǔn)、靈敏、客觀，同時(shí)便于記錄保存[9]。通過在體系中添加Tween-20、BSA、KCI和葡聚糖，并對(duì)其濃度進(jìn)行調(diào)整，可提高磁性試紙條靈敏度，并確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，可用于單增李斯特菌的快速檢測(cè)[10]。

3.3 分子生物學(xué)檢測(cè)方法

隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)的不斷成熟，PCR技術(shù)、 核酸探針雜交技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)等在單增李斯特菌的檢測(cè)中得到了應(yīng)用[11]。尤其是實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在病原菌的分子生物學(xué)檢測(cè)中有著廣闊的應(yīng)用前景[12]。

3.3.1核酸探針雜交技術(shù) 將兩條堿基互補(bǔ)的DNA鏈在適當(dāng)?shù)臈l件下雜交，通過檢測(cè)待測(cè)樣品與標(biāo)記性DNA探針之間形成的雜交分子來判斷樣品中是否存在單增李斯特菌，測(cè)定放射性或熒光強(qiáng)度可以得出樣品中單增李斯特菌的數(shù)量。此方法具有較高的分辨力和分型能力。

3.3.2實(shí)時(shí)熒光PCR 在傳統(tǒng)PCR的基礎(chǔ)上，在反應(yīng)混合物中加入熒光標(biāo)記，結(jié)合在雙鏈DNA的位置上，依據(jù)循環(huán)次數(shù)的增加導(dǎo)致熒光量的增強(qiáng)，可以直接進(jìn)行定量檢測(cè)，避免了實(shí)驗(yàn)過程中致癌物質(zhì)的污染。

3.3.3PCR-ELISA聯(lián)合檢測(cè)技術(shù) PCR-ELISA 檢測(cè)優(yōu)于PCR檢測(cè)的特點(diǎn)：快速、安全、可大量應(yīng)用。

3.4 變性高效液相色譜法

利用特異毒力基因建立PCR DHPlC方法，同時(shí)檢測(cè)幾種最常見的食源性致病菌，包括沙門菌、副溶血弧菌、福氏志賀菌、大腸埃希菌O157：H7和單增李斯特菌，以滿足食物中致病微生物快速檢測(cè)的需求[13]。

3.5 全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)

利用微生物生化反應(yīng)的原理把30個(gè)對(duì)細(xì)菌鑒定必須的生化反應(yīng)培養(yǎng)基固定到卡片上，然后通過培養(yǎng)后儀器對(duì)顏色反應(yīng)，利用數(shù)值法進(jìn)行結(jié)果判定。

3.6 生物傳感器——微芯片及生物芯片

生物傳感器所使用的識(shí)別信號(hào)包括電化學(xué)的、光學(xué)的和混合傳感器，正在向著小型化、微量化方向發(fā)展，并有望在食品安全監(jiān)測(cè)等方面應(yīng)用[14]。

4 診斷、治療及預(yù)防

4.1 臨床診斷

由于單增李斯特菌病臨床癥狀多樣性和血清學(xué)檢測(cè)尚無(wú)特異方法，因此，該病確診仍有賴于病原菌分離培養(yǎng)。

4.2 治療

4.3 預(yù)防

吉林省市售八類食品中尤其是熟肉制品和涼拌菜中單增李斯特菌污染現(xiàn)象嚴(yán)重[16]。我國(guó)散裝熟肉制品具有引起單增李斯特菌病的風(fēng)險(xiǎn)[17]。美國(guó)CDC對(duì)一般人群推薦降低單增李斯特菌病風(fēng)險(xiǎn)的5條措施。①生的動(dòng)物性食品如牛肉、豬肉和家禽肉，食前要徹底加熱。②生食蔬菜食前要徹底清洗。③未加工的肉類與蔬菜、已加工的食品和即食食品要分開。④不吃生奶(未經(jīng)巴氏消毒的)或用生奶加工的食品。⑤加工生食后的手、刀具和砧板要洗凈。

隨著生活節(jié)奏的不斷加快，快餐食品和各種即食食品不斷增加，單增李斯特菌對(duì)我國(guó)人民的健康具有潛在的危險(xiǎn)，應(yīng)引起衛(wèi)生部門的高度警惕。因此，在食品上市和消費(fèi)前開展單增李斯特菌的相關(guān)檢測(cè)非常必要，衛(wèi)生監(jiān)督部門應(yīng)加強(qiáng)對(duì)生產(chǎn)企業(yè)、賓館、超市等食品生產(chǎn)、流通企業(yè)的管理，減少其對(duì)食品的污染。

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