解毒通脈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究＊

張 麗 鄧國(guó)健 尹小娥 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院（咸陽(yáng)712000）

解毒通脈膠囊處方來(lái)源于臨床經(jīng)驗(yàn)方，由黃連、三七、蓮子心、全瓜蔞、半夏、萊菔子、丹參和赤芍八味中藥組成，具清熱解毒、化痰祛瘀、宣痹通脈之功效，臨床用于治療熱毒痰瘀型冠心病不穩(wěn)定型心絞痛。制劑中成分復(fù)雜，為有效控制本品的質(zhì)量，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了定性和定量研究，制定了三七、赤芍、丹參的薄層鑒別［1］，并采用高效液相色譜法對(duì)其所含有效成分鹽酸小檗堿［2，3］進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1儀器 ZB－1D智能藥物崩解儀（上海）；D101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京科偉永鑫實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）；水分測(cè)定儀（上海）；梅特勒電子天平（萬(wàn)分子一）；L－2130高效液相色譜儀（日本日立L－2400檢測(cè)器，EZStart 工作站），Diamonsil C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱。

GB204型萬(wàn)分之一天平（瑞士），KH－400KED 型超聲波清洗機(jī)（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 本品項(xiàng)下所用樣品為由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院自制（批號(hào)：101220、101225、101230）；所用化學(xué)試劑均為分析純；硅膠G（青島海洋化工廠生產(chǎn)）；鹽酸小檗堿對(duì)照品、芍藥苷對(duì)照品、三七對(duì)照藥材、丹參對(duì)照藥材（批號(hào)依次為：110713－200208、0736－200414、120941－200405、120923－200408中國(guó)藥品生物制品檢定所）。樣品乙腈（美國(guó)Fisher公司）為色譜純，水為二次重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 三七定性鑒別 取本品內(nèi)容物5g，研細(xì)，加甲醇30mL，超聲40min，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇萃取3次（20mL、10mL、10mL），合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2 次（10mL、10mL），棄去水溶液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，得供試品溶液。陰性供試品溶液的制備：以處方中藥味比例和制備工藝制成不含三七的空白樣品，再按供試品制備方法處理，制成陰性對(duì)照溶液。取三七對(duì)照藥材0.5g，加70%乙醇約20mL，加熱提取1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.2mL使溶解，得對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法［1］試驗(yàn)吸取上述三種溶液各10μl分別點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，各點(diǎn)10uL，以氯仿—甲醇—正丁醇—水（2∶1∶4∶2）10℃以下放置12h以上的下層溶液為展開(kāi)劑，預(yù)飽和20min，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸溶液，加熱使斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上有相同顏色的主斑點(diǎn)。

2.2 赤芍定性鑒別 取本品內(nèi)容物5g，加乙醇25mL，超聲提取30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL 使溶解，得供試品溶液。以處方中藥味比例和制備工藝制成不含赤芍的空白樣品，再按供試品制備方法處理，制成陰性對(duì)照溶液。取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成lmL 含lmg的溶液，得對(duì)照品溶液。照薄層色譜法［6］試驗(yàn)吸取上述三種溶液各10μL分別點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。

2.3 丹參定性鑒別 取本品內(nèi)容物5g，研細(xì)加乙醚30mL，超聲20min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL 使溶解，得供試品溶液。以處方中藥味比例和制備工藝制成不含丹參的空白樣品，再按供試品制備方法處理，制成陰性對(duì)照溶液。取丹參對(duì)照藥材1g，同供試品法制備，得丹參對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法［6］試驗(yàn)吸取上述三種溶液各10μL分別點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，以苯－甲醇（19∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。

3 含量測(cè)定研究

黃連為方中君藥，現(xiàn)代藥理研究表明，黃連改善微循環(huán)、抗心律失常，其含有的鹽酸小檗堿能抑制血清游離脂肪酸的增高，降低梗死后病理性Q 波的發(fā)生率，對(duì)缺血性心肌具有保護(hù)作用；具有抗血小板聚集、降壓、降血脂作用。因此本研究以其主要成分鹽酸小檗堿為指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定。

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 流動(dòng)相∶乙腈－0.05mmol／L磷酸二氫鉀溶液（50∶50）（每100mL 中加十二烷基磺酸鈉0.4g，再以磷酸調(diào)節(jié)pH 值為4.0）；檢測(cè)波長(zhǎng)345nm，流速1.0mL／min柱溫：室溫。在此條件下，理論板數(shù)以鹽酸小檗堿峰計(jì)算為5000（附圖1），樣品中鹽酸小檗堿得到良好分離（附圖2），缺黃連空白樣品鹽酸小檗堿在峰處無(wú)吸收（附圖3），不影響本品的測(cè)定。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)附圖

圖1 鹽酸小檗堿對(duì)照品HPLC色譜圖

圖2 解毒通脈膠囊樣品HPLC色譜圖

圖3 解毒通脈膠囊缺黃連陰性HPLC色譜圖

3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品10mg，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液制備 取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，超聲處理30min（功率250W，頻率40kHz），放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1mL，置10mL 量瓶中，加甲醇到刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 分別精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（C＝0.01mg／mL）3、5、10、15、20μL，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，測(cè)定。以面積對(duì)進(jìn)樣量（μg）回歸，得回歸方程，A＝15775904.6653C＋82297.1055，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9991，表明鹽酸小檗堿在0.03～0.20μg之間線性范圍良好。

3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（濃度0.01mg／mL）5μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算出RSD%＝0.21%，表明該方法精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取本品（批號(hào)：101220）內(nèi)容物適量，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液5μl，每隔2h測(cè)定1次（0、2、4、6、8、10h），分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明供試品溶液穩(wěn)定性良好，RSD%＝0.43%（n＝6）。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品（批號(hào)：101220）6 份，按供試品溶液制備方法，制備樣品溶液，并依據(jù)上述色譜條件，精密吸取各樣品溶液5ul，進(jìn)樣，測(cè)定計(jì)算含量，測(cè)得鹽酸小檗堿的平均含量為7.3166mg／粒，RSD%＝0.50%，表明本品重復(fù)性良好。

3.8 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的樣品（批號(hào)：101220，C＝7.3166mg／粒，即C＝18.2915mg／g）6份，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算回收率結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.9 樣品測(cè)定 按供試品溶液項(xiàng)下的方法制備供試液，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各5μL，進(jìn)樣測(cè)定，每批樣品平行測(cè)定兩次，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

經(jīng)過(guò)3批樣品的測(cè)定結(jié)果，結(jié)合《中國(guó)藥典》（2010 年版一部）黃連藥材項(xiàng)下鹽酸小檗堿的含量限度規(guī)定（含鹽酸小檗堿不得少于5.5%）及其它影響因素，暫定本品每粒含黃連以鹽酸小檗堿（C20H18CLNO4）計(jì)，不得少于6mg／粒。

4 討 論

4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，用甲醇溶解，用紫外分光光度計(jì)于200～400nm 范圍內(nèi)掃描，繪制吸收光譜圖，結(jié)果混合溶液在345nm 處有最大吸收，故選擇345nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)。

4.2 根據(jù)三批樣品的實(shí)測(cè)數(shù)據(jù) 結(jié)合原料黃連藥材的含量，又考慮到中藥材受產(chǎn)地、氣候的影響較大及大生產(chǎn)實(shí)際情況，暫定本品每1g含黃連以鹽酸小檗堿計(jì)不得少于6mg／粒。

［1］ 中國(guó)藥典編委會(huì).中國(guó)藥典［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：148.

［2］ 王秀萍，陳召暉，夏尚全.鹽酸小檗堿及其制劑含量測(cè)定方法研究概況［J］.中草藥，1998，29（2）∶132.

［3］ 王志朝，李 強(qiáng)，匡長(zhǎng)春.二妙顆粒的制備與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國(guó)藥房，2007，18（12）：908.

［4］ 中國(guó)藥典編委會(huì).中國(guó)藥典［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄34.