三明地區(qū)規(guī)模豬場傳染性胃腸炎和呼吸道冠狀病毒病血清學調(diào)查

陳小麗 吳德喜 福建省三明市農(nóng)業(yè)局 福建三明 365500

近年來，豬場傳染性胃腸炎（TGE）給三明市規(guī)模化養(yǎng)殖場造成了嚴重經(jīng)濟損失。TGE是由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）引起的一種以2周齡以內(nèi)仔豬嘔吐、嚴重腹瀉、脫水和高死亡率為主要特征的高度接觸性腸道傳染?。?-2］。病原為冠狀病毒科冠狀病毒屬的單股正鏈RNA病毒，只有一個血清型，與豬呼吸道冠狀病毒（PRCV）有一定的抗原相關(guān)性。后者被認為是TGEV的一個基因缺失變異株，不表現(xiàn)臨床癥狀或臨床癥狀比較溫和，給豬傳染性胃腸炎實驗室血清學診斷帶來一定干擾［3-4］。同時，豬呼吸道冠狀病毒病（PRC）在國外的流行和傳播證據(jù)表明，該病在豬場的傳播和隱性存在，對TGE的感染和發(fā)病有一定的影響。這也是在開展豬傳染性胃腸炎血清學監(jiān)測的同時，引入PRC監(jiān)測的原因。2012年通過監(jiān)測三明地區(qū)21個規(guī)模豬場傳染性胃腸炎和呼吸道冠狀病毒病的血清學情況，從而掌握兩種疫病在三明市的流行狀況，為規(guī)模豬場的疫病防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 豬血清樣品 2012年共采集21個規(guī)模豬場的血清樣263份。

1.1.2 診斷試劑盒 豬傳染性胃腸炎和呼吸道冠狀病毒病抗體檢測試劑盒（Svanova，批號44000-6084）。

1.1.3 儀器設(shè)備 Eppendorf單道移液器、Transferpette 8道移液器、Sunrise Remote酶標儀、Tecan自動酶標洗板機。

1.2 方法

1.2.1 操作過程 所有試劑在使用前一律恢復至室溫（18～25℃），輕輕搖動或旋轉(zhuǎn)，使試劑混合均勻。PBS原液20倍稀釋，HRP酶結(jié)合物稀釋根據(jù)說明書操作。未加入樣品前，用PBS-Tween溶液洗板3次，每次讓洗液在板中停留1 min，最后1次將板拍干。按照說明書分別加入100 uL陽性對照、陰性對照，樣品孔雙孔，每孔分別加入50 uL PBS-Tween和50 uL血清，輕微震蕩反應板，密封，于37℃溫箱中孵育2 h，洗滌3次，拍干。分別加入100 uL antitgev溶液至樣品第一孔，加100 uL anti-tgev/prcv溶液至樣品第二孔，室溫孵育30 min，洗滌3次，拍干。每孔加入100 uL酶結(jié)合物，室溫孵育30 min，洗滌3次，拍干。加100 uL底物，室溫孵育30 min，加50 uL終止液，混勻，15 min內(nèi)在450 nm波長（或雙波長450 nm和620 nm）測定和記錄樣品以及對照的吸光值。

1.2.2 計算結(jié)果 在陰性、陽性對照成立的基礎(chǔ)上，根據(jù)試劑說明書對結(jié)果進行判斷。

2 結(jié)果分析及討論

從表1中可以看出，PRC抗體含量高的場，TGE抗體含量明顯偏低，這是由于豬只感染PRCV后所產(chǎn)生的抗體可中和TGEV，產(chǎn)生交叉保護。

PRCV的感染呈亞臨床型，所引起的臨床癥狀及嚴重程度取決于毒株的差異，臨床癥狀比較溫和或不表現(xiàn)癥狀，與TGE完全不同［3-4］。仔豬人工感染PRCV后出現(xiàn)短暫發(fā)熱，肺部啰音，生長受阻；母豬人工感染后，部分豬只出現(xiàn)咳嗽及繁殖障礙。仔豬通過吮乳獲得保護，并可抵抗TGEV感染。PRCV可通過空氣或相互接觸而感染所有年齡的豬只。

從表2的結(jié)果可以看出，三明地區(qū)完全沒有感染的場較少，僅有3個場，占14.3%。

加強飼養(yǎng)管理是控制該病的關(guān)鍵。TGEV極易傳入豬場，因此，豬場應堅持自繁自養(yǎng)，如確實需要引進種豬，則應避免從疫區(qū)或發(fā)病豬場引進，并對引進的種豬嚴格檢疫，在隔離場隔離觀察1個月以上，經(jīng)檢測確實無該病時方可合群。同時，禁止外來人員及車輛進入豬場范圍內(nèi)。實施“全進全出”的生產(chǎn)模式，分娩舍應做好保溫工作，特別是冬春季節(jié)，日夜溫差較大，應注意防寒保暖，保持豬舍干燥、清潔衛(wèi)生，盡早使初生仔豬吃足初乳［5］。

表1 三明地區(qū)規(guī)模豬場PRCV和TGEV檢測情況

表2 三明地區(qū)規(guī)模豬場PRCV和TGEV感染情況

［1］許世清.豬傳染性胃腸炎［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2011（6）：160-161.

［2］彭旺興.試論豬傳染性胃腸炎［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學，2009（4）：207-208.

［3］李煥榮，張春葉，林祥梅，等.豬呼吸道冠狀病毒及實驗室診斷方法研究進展［J］.北京農(nóng)學院學報，2007（2）：78-80.

［4］房紅瑩，竇守強，羅滿林.豬呼吸道冠狀病毒研究進展［J］.中國獸藥雜志，2007（5）：40-43.

［5］劉蒙恩，劉秋俠.冬春季節(jié)養(yǎng)豬謹防豬傳染性胃腸炎［J］.中國動物保健，2010（2）：71-72.