四君子湯對新生兒窒息患兒腸道菌群及體液免疫的影響

溫秋玉 劉俊峰 黃軍華 汪浩文 李宗輝 任大偉

新生兒窒息后由于體內血液的重新分布而造成胃腸道激素的異常分泌，出現(xiàn)包括頻繁嘔吐、胃排空減慢，甚至消化道出血等在內的一系列喂養(yǎng)不耐受的表現(xiàn)。同時，新生兒發(fā)生窒息后由于腸道內的微環(huán)境發(fā)生了改變，勢必會造成腸道菌群的失調以及大量毒性代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生，由此造成腸道內過度激活的炎癥反應，進而影響腸道局部正常的屏障作用及免疫功能。對此，筆者采用四君子湯對其進行治療，并對其腸道雙歧桿菌及腸球菌定植情況及體液免疫水平進行檢測，以探討四君子湯對對新生兒窒息患兒腸道菌群定植及體液免疫水平的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 從華北石油總醫(yī)院兒科2006年12月-2009年6月收治的新生兒窒息患兒中隨機選取52例作為研究對象，男28例，女24例；均為妊娠37~42周順產(chǎn)娩出的適于胎齡兒；生后1 min的Apgar評分為3~5分，窒息持續(xù)時間為5~10 min。將其隨機分為兩組，四君子湯治療組及對照組，每組26例，同時選取26例同期順產(chǎn)娩出的正常新生兒，男14例，女12例。治療組及對照組性別、孕周、出生體重比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 治療方法 對照組采用常規(guī)對癥處理及靜脈營養(yǎng)支持，治療組在此基礎上加用四君子湯進行治療。組方為：人參5 g，白術5 g，茯苓5 g，炙甘草2 g。用清水80 ml煎至20 ml，1 ml/（kg·次），3次/d口服。

1.3 檢測方法

1.3.1 腸道菌群培養(yǎng) 各組新生兒于生后4~5 d內，取自然排出的新鮮糞便，將其終末端放入無菌培養(yǎng)采集瓶內。于超凈工作臺內稱取0.5 g糞便，加入4.5 ml生理鹽水，經(jīng)震蕩混勻并逐步以10倍稀釋至106。用移液器吸取lO μl糞便懸液滴加至細菌培養(yǎng)基上，分別于37 ℃的厭氧及需氧條件下進行細菌培養(yǎng)48 h。對細菌進行鑒定并行菌落計數(shù)。

1.3.2 體液免疫檢測 各組新生兒于生后4~5 d內清晨空腹采集靜脈血5 ml，離心后收集血清使用重慶醫(yī)學檢驗試劑研究所提供的試劑盒采用單擴法測定血清IgA、IgG和IgM含量，嚴格按操作規(guī)程集中進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理，正態(tài)分布計量資料以（±s）表示，多組樣本的比較采用單因素方差分析檢驗，組間比較采用q檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 腸道菌群定植情況 正常新生兒生后4~5 d腸道內已存在雙歧桿菌及腸球菌的定植，經(jīng)便培養(yǎng)結果顯示，腸球菌所形成的菌落數(shù)為（4.2±1.5）×108個/g糞便，雙歧桿菌所形成的菌落數(shù)為（2.9±1.2）×108個/g糞便。而在伴有出生窒息史的新生兒，對照組菌群數(shù)量則明顯少于正常新生兒（P<0.01）。而四君子湯治療組腸球菌及雙歧桿菌所形成的菌落數(shù)均較對照組明顯增多（P<0.01）。見表1。

表1 各組菌落數(shù)量的比較 108個/g糞便

2.2 體液免疫情況 與正常新生兒相比，新生兒窒息后各組患兒血清IgG水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而對照組IgA、IgM與正常組相比均存在一定程度的下降（P<0.01），經(jīng)四君子湯治療后其IgA、IgM較對照組顯著升高（P<0.01），且與正常組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

表2 各組血清免疫球蛋白水平的比較 mg/ml

3 討論

新生兒窒息不僅是導致顱內出血、缺氧缺血性腦病等嚴重疾病的主要原因之一[1]，同時在窒息過程中，由于血流的重新分布造成胃腸道血流減少，局部缺氧的微環(huán)境造成代謝及胃腸道激素分泌的異常，進而導致胃腸道功能紊亂的發(fā)生，并出現(xiàn)諸如腹脹、頻繁嘔吐、消化道出血等喂養(yǎng)不耐受的癥狀[2]。我們前期的研究顯示，新生兒窒息后血漿胃動素的水平顯著的下調，以及血清一氧化氮的水平的顯著增高均與喂養(yǎng)不耐受的發(fā)生呈現(xiàn)明顯的相關性[3]。此外，局部缺血、胃腸道運動減弱及各種代謝產(chǎn)物的聚集也會對正常菌群的定植產(chǎn)生一定的影響，進一步加劇腸道功能紊亂的發(fā)生，并有可能對機體的免疫功能產(chǎn)生影響。四君子湯，記載于《太平惠民和劑局方》，組方為人參、茯苓、白術、炙甘草，多用于調節(jié)脾胃氣虛所見諸證，在胃炎、胃腸疾病中能夠顯示出很好的臨床療效[4]。西醫(yī)學研究顯示，四君子湯不僅能夠促進消化吸收，改善胃腸道疾病的臨床癥狀，同時在胃腸道激素水平的調節(jié)、黏膜的損傷修復以及腸道局部免疫功能的調理上均具有一定的藥理活性[5-6]。然而其對于新生兒腸道菌群及體液免疫的影響卻鮮有研究。

腸道菌群是一個非常復雜的微生態(tài)系統(tǒng)，不僅參與食物的消化過程、提供機體所必需的維生素，同時在免疫調節(jié)方面也發(fā)揮著重要的作用。新生兒出生后脫離子宮的無菌空間，自然環(huán)境中的多種細菌會通過消化系統(tǒng)進入并定植于腸道，逐漸達到一種穩(wěn)態(tài)。研究表明，不同的出生周齡、分娩方式、喂養(yǎng)方法均會對腸道菌群的定植造成一定的影響[7]。而新生兒發(fā)生窒息后，由于胃動素分泌減少及一氧化氮生成的增加造成胃腸道的蠕動減弱，加之缺血對腸道局部微環(huán)境的影響，無疑都會影響到腸道菌群的定植。在本研究中，通過對發(fā)生窒息的新生兒生后3~4 d內的糞便進行培養(yǎng)，我們發(fā)現(xiàn)在相同的培養(yǎng)體系下，窒息新生兒糞便內腸球菌及雙歧桿菌所形成的菌落數(shù)量均明顯少于正常新生兒，其中尤以雙歧桿菌更為顯著。這表明，相對正常新生兒而言，產(chǎn)程中窒息的發(fā)生明顯的阻礙了腸道菌群的定植。由于雙歧桿菌作為最重要的益生菌之一，不僅在維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)、抑制致病菌生長過程中發(fā)揮著重要的作用，同時對機體的特異性免疫及非特異性免疫都具有一定的調節(jié)作用[8]，因此新生兒窒息后腸道雙歧桿菌定植的延緩極有可能會造成機體免疫功能的減低，降低其對致病菌的抵抗能力，從而易于發(fā)生壞死性小腸結腸炎等嚴重的并發(fā)癥，甚至危及患兒的生命。在此，我們通過對窒息患兒生后3~4 d血清體液免疫水平進行了檢測，結果顯示，其IgA、IgM水平與正常新生兒相比均存在一定程度的降低。而經(jīng)過四君子湯的治療后，不僅明顯增加了腸球菌及雙歧桿菌的腸道定植數(shù)量，同時對患兒體液免疫的改善亦能夠起到一定的改善作用。

由此可見，新生兒發(fā)生窒息后由于血漿胃動素分泌水平的降低和一氧化氮生成的增多，使得胃腸道的蠕動減慢，正常運動功能的下降延緩了雙歧桿菌及腸球菌等腸道正常菌群的定植，進一步將導致腸道屏障作用減弱，并造成機體免疫功能下降。而四君子湯的應用可以通過增加胃動素和降低一氧化氮的生成從而有效地改善腸道的運動功能[9]，進而有效地促進腸道菌群的定植并上調機體的體液免疫水平。

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